覃宗華，李早龍

（廣州先至飼料添加劑有限公司，廣州510663）

由艾美耳屬原蟲所引起的球蟲病是嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)的重要?jiǎng)游锛膊?，全世界因球蟲病所造成的經(jīng)濟(jì)損失每年約20億英鎊［1］，每年用于防治雞球蟲病的藥物費(fèi)用達(dá)數(shù)億元人民幣，占雞病防治費(fèi)用的1／3左右。雞球蟲病是由一種或多種艾美耳屬球蟲寄生于雞的腸道不同部位所引起的一種腸道細(xì)胞內(nèi)寄生性原蟲?。?］。艾美耳球蟲的生物學(xué)特點(diǎn)決定其難以消滅，只要有豬、雞等的集約化養(yǎng)殖，就不可避免球蟲的感染和球蟲病的流行。目前動(dòng)物球蟲病的控制主要依賴抗球蟲藥物，而抗球蟲藥物長期廣泛的使用已導(dǎo)致耐藥性產(chǎn)生，尤其是雞球蟲，且表現(xiàn)出與同類藥物或作用機(jī)理相同的其他藥物產(chǎn)生一定程度的交叉耐藥性，使藥物的療效下降［3］，所以迫切需要研制新的、廣譜高效的抗球蟲藥。鹽酸氟乙基硫胺素（Fluoroethyl Thiamine Hydrochloride，F(xiàn)TH）是廣州先至飼料添加劑有限公司研制的一種新的抗球蟲藥物，并已獲得了其研制及應(yīng)用的專利［4］?；瘜W(xué)名為氯化3-［（4-氨基-2-乙基-5-嘧啶基）-亞甲基］-5-（2-氟乙基）-4-甲基噻唑鹽酸，易溶于水，在乙醇中微溶，不溶于三氯甲烷。研究表明FTH的毒性很小，對(duì)堆型、巨型等艾美耳球蟲均有效。本試驗(yàn)通過給雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲，觀察比較鹽酸氟乙基硫胺素的抗球蟲效果，以期為臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼料 1日齡嶺南黃肉雞，購自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所家禽研究室。肉雞全價(jià)配合飼料，購自惠州元太飼料有限公司，不含任何抗菌藥及抗球蟲添加劑。

1.1.2 試驗(yàn)藥品 鹽酸氟乙基硫胺素（FTH），批號(hào)20130605，含量98.0%，廣州先至飼料添加劑有限公司研制；氨丙啉、尼卡巴嗪、馬杜拉霉素，購自SIGMA公司，批號(hào)分別為 20130214、20130306、20130223。

1.1.3 蟲株 柔嫩艾美耳球蟲GD株，廣州英賽特生物科技有限公司保存，分離自廣東江門地區(qū)某雞場(chǎng)。試驗(yàn)前用雞繁殖擴(kuò)增，收集新鮮卵囊孢子化后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將14日齡時(shí)鏡檢糞便中無球蟲卵囊的雛雞稱重后，剔除瘦弱或體重過大雞，選擇體重差異在20 g以內(nèi)的健康雞，隨機(jī)分成8組，每組試驗(yàn)雞30只，進(jìn)行編號(hào)。第1組不給藥不攻球蟲作為陰性對(duì)照組，第2組攻球蟲但不給藥作為模型組，第3～8組分別按表1添加不同的抗球蟲藥物。試驗(yàn)分組當(dāng)天按表1分別飼喂含不同藥物的飼料，自由采食并飼喂到試驗(yàn)結(jié)束。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

1.2.2 試驗(yàn)方法 除陰性對(duì)照組外，各試驗(yàn)組每只雞在分組第2天經(jīng)嗉囊灌服柔嫩艾美球蟲孢子化卵囊2.5×105個(gè)。試驗(yàn)期間，每天觀察記錄雞的精神狀態(tài)、飲食、發(fā)病、血便情況及死亡數(shù)等。感染后第5天對(duì)各組雞只進(jìn)行血便記分，第7天各組分別稱重后剖殺全部雞只，觀察盲腸病變，并進(jìn)行盲腸內(nèi)卵囊計(jì)數(shù)，計(jì)算抗球蟲指數(shù)（Anticoccidial Index，ACI）。

1.2.3 抗球蟲效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 死亡情況：記錄各試驗(yàn)組的死亡雞數(shù)，病理剖檢確定死因，計(jì)算存活率。

血便記分：按 Morehouse和 Baron（1970）標(biāo)準(zhǔn)［5］，即0分，無血便；1分，少于25%的糞便帶血；2分，25%～50%的糞便帶血；3分，50%～75%的糞便帶血；4分，多于75%的糞便帶血。

病變記分：感染后第7天宰殺雞，參照J(rèn)ohnson和Reid（1970）［6］的病變記分進(jìn)行盲腸病變記分，并將病變記分換成病變值。病變值＝各試驗(yàn)組的平均病變記分×10。

卵囊計(jì)數(shù)和卵囊值［7］：刮取盲腸內(nèi)容物用10%次氯酸鈉消化15 min后，卵囊計(jì)數(shù)采用血球計(jì)數(shù)板法［5］，并換算出盲腸中的卵囊數(shù)量，卵囊數(shù)量與卵囊值之間的換算關(guān)系見表2。

表2 卵囊數(shù)與卵囊值的換算關(guān)系

抗球蟲指數(shù) （ACI）：按照下述公式計(jì)算，ACI＝（相對(duì)增重率+存活率）×100-（病變值+卵囊值）?？骨蛳x藥效力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：ACI＜120，不宜作抗球蟲藥；ACI在120～160之間，抗球蟲效力低；ACI在160～180之間，中度抗球蟲效力；ACI在180以上，高效抗球蟲效力［8］。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)雞臨床癥狀 陽性對(duì)照組：感染后第3天，雞采食量下降、精神沉郁，第4天出現(xiàn)血便，共死亡10只。剖解死亡雞見盲腸高度腫大，內(nèi)充滿血凝塊，腸粘膜見大量出血點(diǎn)。存活雞羽毛松亂，雙翅下垂，少數(shù)雞縮頸閉眼。陰性對(duì)照組：雞食欲精神都正常，未見血便等異常。各用藥試驗(yàn)組：50 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素組雞群出現(xiàn)少數(shù)采食量下降、精神沉郁，第4天出現(xiàn)少量血便，但未見死亡；125 mg／kg和 200 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素組的雞群食欲精神都正常，無血便或死亡等異常；125 mg／kg氨丙啉組和尼卡巴嗪組采食量略微減少，少數(shù)雞體重增長減慢，未見血便或死亡；5 m／kg馬杜拉霉素組采食量略微減少，個(gè)別雞出現(xiàn)精神沉郁，但無血便及死亡。

2.2 試驗(yàn)組雞的盲腸平均病變記分 陽性組的平均病變計(jì)分為32.6分，氨丙啉組為4分，馬杜拉霉素組為6分，50 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素組為11.2，鹽酸氟乙基硫胺素組（高、中劑量）、尼卡巴嗪組及陰性組均為0分。

2.3 試驗(yàn)組的相對(duì)增重率、存活率、病變值、卵囊值和ACI 結(jié)果見表3。50 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素組ACI值為168.4，屬中效抗球蟲藥物；高、中劑量組鹽酸氟乙基硫胺素、氨丙啉、尼卡巴嗪及馬杜拉霉素均屬于高效抗球蟲藥物，ACI值分別為200.8、201.6、191.2、192.9 和 186.7，但鹽酸氟乙基硫胺素在病變值和卵囊值方面均優(yōu)于氨丙啉和馬杜拉霉素，且在增重方面優(yōu)于尼卡巴嗪。

表3 鹽酸氟乙基硫胺素及對(duì)照藥物的抗球蟲效果結(jié)果

3 分析與討論

50 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素抗球蟲效果低于125 mg／kg、200 mg／kg 劑量組，但高、中劑量組無明顯差異，表明抗球蟲效果與給藥劑量有關(guān)。125 mg／kg鹽酸氟乙基硫胺素組雞群食欲精神都正常，無卵囊排出，增重率無影響，血便和盲腸病變記分均為0分，表明體內(nèi)球蟲的繁殖受到抑制或被殺滅，ACI值為201.6，屬于高效抗球蟲藥物，能夠很好地控制球蟲??；而125 mg／kg氨丙啉組有少量卵囊排出，相對(duì)增重率稍降低，盲腸輕度病變，ACI值為191.2；125 mg／kg尼卡巴嗪組相對(duì)增重率降低，無卵囊排出及盲腸病變，ACI值為192.9；5 mg／kg馬杜拉霉素組有少量卵囊排出，相對(duì)增重率稍降低，盲腸有病變，ACI值為186.7。表明鹽酸氟乙基硫胺素在抗雞柔嫩艾美球蟲效果方面優(yōu)于氨丙啉、馬杜拉霉素及尼卡巴嗪。

氨丙啉的作用機(jī)理是競(jìng)爭性抑制球蟲對(duì)硫胺素（維生素B1）的攝取，峰期為第3天，主要抑制球蟲第一代裂殖體，對(duì)有性繁殖階段和子孢子也有抑制作用；尼卡巴嗪的藥理作用峰期為第4天，抑制球蟲第二代裂殖體；馬杜拉霉素是一價(jià)單糖苷離子載體抗球蟲藥，能干擾球蟲的早期階段即孢子期和第一代裂殖體［9］。鹽酸氟乙基硫胺素的作用機(jī)理與氨丙啉相似，取代硫胺素，干擾蟲體細(xì)胞的糖代謝。本試驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸氟乙基硫胺素作為新型抗球蟲藥其效果優(yōu)于氨丙啉、馬杜拉霉素及尼卡巴嗪。鹽酸氟乙基硫胺素與其他抗球蟲藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用峰期不同，可定期或季節(jié)性地與其他性質(zhì)不同的抗球蟲藥穿梭使用，這樣不僅減少或避免耐藥性的產(chǎn)生，而且可提高藥物的防治效果［10］。

抗硫胺素類藥物主要有二甲硫胺、氯硫胺、氨丙啉等。二甲硫胺最早由日本研制合成，我國也由東北制藥總廠研制成功，并被農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)生產(chǎn)，禁用于產(chǎn)蛋雞，抗球蟲譜窄［11］。孫寶貴等研究結(jié)果顯示飼料添加1250 mg／kg二甲硫胺，雞的食欲明顯減少，劑量增至1875 mg／kg時(shí)出現(xiàn)動(dòng)物死亡［12］。氨丙啉對(duì)柔嫩、堆型艾美爾球蟲效果較好，雞和火雞的艾美爾球蟲多數(shù)對(duì)氨丙啉有耐藥性，在臨床上常與乙氧酰胺苯甲酯等其他藥物組成復(fù)方來增強(qiáng)其抗蟲效果［13］。鹽酸氟乙基硫胺素是新研制的專利化學(xué)物（ZL201210151345.8），研究表明其在抗球蟲譜、毒性等方面明顯優(yōu)于同類藥物。

因抗球蟲藥的長期濫用和球蟲本身生物學(xué)特性的改變，致使雞球蟲對(duì)抗球蟲藥物的敏感性降低或無效。球蟲可通過代謝途徑變化對(duì)藥物進(jìn)行修飾，并調(diào)動(dòng)自我防御機(jī)制，從而使藥物失去其活性［14］?，F(xiàn)代理論認(rèn)為，耐藥性的產(chǎn)生是在藥物的選擇壓力下，突變個(gè)體的多次重復(fù)選擇，將微弱的耐藥性積累的結(jié)果。球蟲也能夠在生長和繁殖時(shí)發(fā)生突變，有些突變對(duì)球蟲生存和繁殖有利，這樣的個(gè)體在藥物的作用下能夠生存下來，而沒有發(fā)生突變的個(gè)體會(huì)被抑制或殺死。經(jīng)過多次這樣的過程，就產(chǎn)生了對(duì)抗球蟲藥的耐藥性［15］，所以需要研發(fā)新的高效抗球蟲藥。鹽酸氟乙基硫胺素屬于新型高效抗雞球蟲藥物，有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。

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