胡兆鵬 肖 波 (萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院病理科，江西 萍鄉(xiāng) 337055)

非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)為高發(fā)惡性病變肺部腫瘤，患者預(yù)后較差，5年生存率可能性與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，因此，準(zhǔn)確評(píng)估NSCLC患者病變程度，評(píng)估患者預(yù)后有重要意義〔1〕。黏蛋白-1(MUC1)和PINCH蛋白表達(dá)情況可與腫瘤生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)移情況有必要關(guān)聯(lián)，逐漸被應(yīng)用到臨床病變組織的檢測(cè)之中。MUC1分子量高，在癌細(xì)胞浸潤(rùn)的組織中可明顯發(fā)生異常表達(dá)，尤其是來(lái)源于上皮細(xì)胞的腫瘤，如NSCLC為此類(lèi)代表性腫瘤〔2〕。PINCH蛋白是近期發(fā)現(xiàn)的腫瘤生長(zhǎng)刺激因子，參與細(xì)胞增殖以及遷移等作用，并起到一定的調(diào)節(jié)作用，在腫瘤組織中也可高度表達(dá)。因此，MUC1和PINCH蛋白在NSCLC患者肺部癌變組織中表達(dá)情況備受關(guān)注，成為研究靶點(diǎn)，本文旨在探討MUC1和PINCH蛋白的表達(dá)意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 抽選2011年1月至2013年1月本院收治的35例NSCLC患者，均進(jìn)行手術(shù)治療，其中男19例，女16例，年齡42～65歲，平均(51.4±3.5)歲，治療前 NSCLC 病程 4～8年，平均(6.3±2.4)年。將患者手術(shù)肺癌組織標(biāo)本冰凍保存，記為觀察組，另外留取35例正常肺部組織標(biāo)本進(jìn)行通用方法保存，記為對(duì)照組?；颊卟?shì)控制良好，腫瘤病灶清晰，PS評(píng)分均低于2分，生存期均超過(guò)3個(gè)月?；颊吒文I功能未受明顯影響，凝血功能正常，均可耐受手術(shù)切除治療，并且與治療前未接受其他治療干預(yù)?；颊呔芍鲃?dòng)配合完成手術(shù)治療，并且取得患者監(jiān)護(hù)人或患者本人的書(shū)面知情同意。癌變組織高、中、低分化者分別為7、15、13 例，分期為Ⅰ ～ Ⅳ期8、10、9、8 例。根據(jù)術(shù)后病理報(bào)告詳細(xì)記錄組織學(xué)類(lèi)型、是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移等情況。

1.2 MUC1檢測(cè)方法

1.2.1 試劑 RT-PCR RNA試劑盒(華美生物工程公司)、MUC-1RT-PCR試劑盒(Gibco BRL公司)、兔抗人MUC-1IgG(腫瘤研究室提供)、免疫組化卵蛋白-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法試劑盒(DAKO公司)。

1.2.2 方法 應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)MUC-1mRNA表達(dá):首先制備標(biāo)本總RNA，選擇相關(guān)試劑盒;并且擴(kuò)增MUC-1，65℃后采取退火，之后進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)凝膠圖像分析。MUC-1/B-actin陽(yáng)性表達(dá)指標(biāo)為在0.5以上。應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)MUC-1蛋白，首先制備合格要求的冰凍切片(5 μm)，置于處理后的載玻片上并固定，加兔抗人 MUC-1IgG之后進(jìn)行過(guò)夜并洗滌。應(yīng)用ABC法試劑盒染色，篩選出陽(yáng)性表達(dá)組織。陽(yáng)性癌細(xì)胞達(dá)全部的20%以上，定為陽(yáng)性患者。

1.3 PINCH蛋白檢測(cè)方法 同樣方法將冰凍標(biāo)本進(jìn)行10%甲醛固定，并且進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)切片。其表達(dá)應(yīng)用免疫組化EnVision法檢測(cè)，選用試劑:PV9000試劑盒(北京中杉生物技術(shù)有限公司)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑(同上)、兔抗人PINCH蛋白多克隆抗體(博士德公司)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。PINCH表達(dá)以組織間質(zhì)中成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)總數(shù)的25%以上為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以s表示，行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中MUC1和PINCH蛋白表達(dá)情況 對(duì)照組標(biāo)本中均無(wú)MUC1和PINCH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，觀察組中MUC1和PINCH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.9%(22/35)和57.1%(20/35)，與對(duì)照組比較差異明顯(P＜0.05)，MUC1和 PINCH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)水平間無(wú)明顯差異。

2.2 MUC1和PINCH表達(dá)與NSCLC患者病理特征間的關(guān)系MUC1和PINCH蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者性別差異、年齡、分型、分期等因素?zé)o關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生與否密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的MUC1和PINCH蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯高于未淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。見(jiàn)表1。

表1 MUC1和PINCH表達(dá)情況與NSCLC患者病理特征間關(guān)系〔n(%)〕

2.3 MUC1和PINCH蛋白表達(dá)情況與患者5年生存率關(guān)系MUC1和PINCH蛋白陽(yáng)性表達(dá)者的術(shù)后5年生存率為22.7%(5/22)和30%(6/20)，明顯低于 MUC1和PINCH蛋白陰性表達(dá)者的77.3%(17/22)和70%(14/20)(P ＜0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 肺癌組織Muc-1基因表達(dá)

3 討論

NSCLC是常見(jiàn)肺部腫瘤病變類(lèi)型，其發(fā)病率可達(dá)肺部腫瘤的80%以上，遠(yuǎn)期預(yù)后較差，5年存活率較低。腫瘤預(yù)后正確評(píng)估可有效為臨床治療提供思路和啟發(fā)，可制定合理治療方案，提升患者的生活質(zhì)量〔3〕。對(duì)NSCLC預(yù)后的傳統(tǒng)評(píng)價(jià)方法為基本病理學(xué)方法，以腫瘤病理分型以及分期等作為病變程度評(píng)估指標(biāo)。但是，腫瘤病情發(fā)展是一個(gè)漫長(zhǎng)而復(fù)雜的過(guò)程，腫瘤分期處于動(dòng)態(tài)變化中，缺乏一定穩(wěn)定性，并不能確切評(píng)估腫瘤病變預(yù)后，存在一定局限性。NSCLC病變組織的異質(zhì)性明顯，因此，即便同期腫瘤組織病變，甚至分化程度相似的組織病變中，均可出現(xiàn)不同檢測(cè)結(jié)果，影響病情預(yù)后的評(píng)估〔4〕。對(duì)于潛在浸潤(rùn)的組織或者發(fā)生微轉(zhuǎn)移的組織分期并不明顯，但是仍存在一定危險(xiǎn)性，不能單憑病理結(jié)果進(jìn)行分析。因此，為提升NSCLC病變預(yù)后評(píng)測(cè)的準(zhǔn)確性，需要更具有代表性的評(píng)測(cè)指標(biāo)。

隨著分子生物學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，技術(shù)不斷提升，大量研究發(fā)現(xiàn)，分子生物MUC1和PINCH蛋白與NSCLC預(yù)后密切相關(guān)。MUC1為跨膜黏蛋白，基因定位于染色體1q21，明顯具有多態(tài)性。MUC1主要表達(dá)于組織的上皮細(xì)胞，可在多種腫瘤中異常表達(dá)(如乳腺癌、卵巢癌)，MUC1骨架由胞內(nèi)外段和跨膜段組成，最先接觸細(xì)胞免疫系統(tǒng)，參與細(xì)胞黏附及細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和活化。有學(xué)者認(rèn)為〔4，5〕，黏附過(guò)程預(yù)示腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的開(kāi)始，因此MUC1與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。PINCH是黏著斑蛋白(含有5個(gè)LIM結(jié)構(gòu)域)，在正常組織中表達(dá)不明顯，通過(guò)與Nck-2結(jié)合過(guò)程，為細(xì)胞生長(zhǎng)因子提高導(dǎo)聯(lián)，為細(xì)胞黏附過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時(shí)參與細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程，同樣在多種腫瘤組織中異常表達(dá)〔6，7〕。本研究結(jié)果與其他研究者結(jié)果相似，說(shuō)明MUC1和PINCH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)可作為腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志物，具有一定代表性。另外，有學(xué)者認(rèn)為〔8，9〕，MUC1和PINCH蛋白的異常表達(dá)，可使 E-鈣黏蛋白表達(dá)水平下調(diào)，后者是抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要黏附因子，同樣說(shuō)明MUC1和PINCH參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中可高度表達(dá)。

1 牛中喜，周清華，徐 鵬，等.非小細(xì)胞肺癌患者淋巴結(jié)、外周血、骨髓微轉(zhuǎn)移的MUC1基因診斷臨床意義〔J〕.中國(guó)癌癥雜志，2004;14(6):497-500.

2 Rahn JJ，Dabbagh L，Pasdar M，et al.The importance of MUC1 cellular localization in patients with breast carcinoma:an immunohistologic study of 71 patients and review of the literature〔J〕.Cancer，2010;91(11):1973-82.

3 Huang L，Ren J，Chen D，et al.Muc-1 cytoplas m ic domain coactivates Wnt target gene transcription and confers transformation〔J〕.Cancer Biol Ther，2010;2(6):702-6.

4 Jessica WR，Anna D，Ghazwan M，et al.The signaling adapter protein PINCH is up-regulated in the stroma of common cancer，notably at invasive edges〔J〕.Cancer，2002;95(6):1387-95.

5 王寶山，宋冬梅，段惠軍，等.PINCH蛋自在人喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)以及低氧對(duì)其表達(dá)的影響〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床，2006;33(5):267-9.

6 Zhang JT，Li Qx，Wang D，et al.Up-regulation of PINCH in the stroma of oral squamous cell carcinoma predicts nodal metastasis〔J〕.Oncol Rep，2010;14(6):1519-22.

7 趙 健，趙振興，袁鳳輝.PINCH蛋白在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的作用研究〔J〕.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011;18(7):1198-200.

8 Velyvis A，Yang YW，Wu CY，et al.Solution structure of the focal adhension adaptor PINCH LIM1 domain and characterization of its inter action with the integrin-linked Killase ankyrjn repeat domain〔J〕.J Biol Chem，2010;276(6):4932-9.

9 Lagow EL，Carson DD.Synergistic stimulation of Muc-1 expression in nor mal breast epithelia and breast cancer cells by interferon-gamma and tumor necrosis factor alpha〔J〕.J Cell Biochem，2012;86(4):759-72.