王 超 ，仲山民 ，朱俊朋 ，羅 凡 ，常銀子，鄭 劍 ，鄭旭衛(wèi)

（1. 浙江農(nóng)林大學(xué) a.農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院；b.浙江省農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)改良技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 臨安 311300；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 亞熱帶林業(yè)研究所，浙江 富陽(yáng) 311400；3.浙江金華金山油脂有限公司，浙江 金華 321017）

油茶餅粕蛋白的制備及其酶解物活性分析

王 超1a,1b，仲山民1a,1b，朱俊朋1a,1b，羅 凡2，常銀子1a,1b，鄭 劍1a,1b，鄭旭衛(wèi)3

（1. 浙江農(nóng)林大學(xué) a.農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院；b.浙江省農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)改良技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 臨安 311300；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 亞熱帶林業(yè)研究所，浙江 富陽(yáng) 311400；3.浙江金華金山油脂有限公司，浙江 金華 321017）

為從油茶餅粕中提取蛋白，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)方法，研究了油茶餅粕蛋白堿提的重要影響因子，得到的最優(yōu)制備條件為：起始pH值為10，溫度為50 ℃，料液比為1∶14，時(shí)間為60 min；在此堿提條件下，油茶餅粕蛋白的溶出率為47.9%。文中還就其酶解物對(duì)·OH的清除率的影響情況進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果得到的最佳水解條件為：起始pH值為10，酶解溫度為40 ℃，酶用量為1.0%、酶解時(shí)間為120 min；在此酶解條件下，酶解物對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.9%。文中還對(duì)油茶餅粕蛋白活性肽的功能進(jìn)行了分析，結(jié)果表明：當(dāng)其濃度為150 μg/mL時(shí)，其對(duì)·OH和DPPH的清除率分別為34.49%和37.73%。

油茶餅粕蛋白；提取；酶解；活性

生物活性肽是有特定生理作用的多功能化合物的總稱[1]。這些多肽小的僅由2個(gè)氨基酸構(gòu)成，大的有復(fù)雜的長(zhǎng)鏈或環(huán)狀多肽，常經(jīng)糖苷化、磷酸化或酰化衍生修飾[2]。

有關(guān)研究者[3-4]發(fā)現(xiàn)，人類攝食蛋白質(zhì)，經(jīng)消化道的酶作用后，大多是以小肽的形式消化吸收的，而以游離氨基酸形式吸收的比例很小[5]。生物活性肽結(jié)構(gòu)復(fù)雜，由多種氨基酸組成，這直接導(dǎo)致其種類繁多，分布廣泛；其諸多生物活性（如降血壓、降低膽固醇、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化等功能）已引起了學(xué)者的關(guān)注[6]。

油茶餅粕蛋白是一種優(yōu)良的蛋白質(zhì)資源。有關(guān)分析結(jié)果表明，油茶仁果中含有10%～15%的蛋白質(zhì)，采用冷榨工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)的高溫焙烤再制油工藝，不但能提高油脂的品質(zhì)，還可以較好地保護(hù)其蛋白的活性[7]。

蛋白質(zhì)的提取方法已有多種，如水相法、水相酶解法、丙醇等有機(jī)溶劑提取法等種[8-9]。本研究采用堿提方法，以油茶餅粕蛋白的溶出率為指標(biāo)，對(duì)其提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了得率最高的制備方案；制備獲得的蛋白，再經(jīng)酶的有限水解，以羥基自由基清除率為考察指標(biāo)，優(yōu)化酶解條件；還對(duì)所獲得的酶解物進(jìn)行了活性檢測(cè)，以期為分析其功能與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 油茶餅粕

供試的油茶餅粕為經(jīng)低溫冷榨工藝制備山茶油后的餅粕。

1.2 試 劑

所用試劑為堿性蛋白酶等試劑。

1.3 儀 器

FZ102型植物粉碎機(jī)，天津市泰斯特有限公司；TDL-5-A低速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.4 樣品處理

油茶餅粕蛋白提取的工藝流程：油茶餅粕→粉碎→50 ℃溫水浸泡20 min除雜→更換浸泡液（去除水溶性的多糖、堿類等）→加堿→過(guò)濾→濾液中加酸調(diào)節(jié)至pH＝4.0→獲得沉淀物→離心→水洗沉淀至pH＝7→離心→將沉淀冷凍干燥備用。

酶解流程：提取所獲蛋白→加適量水溶解→調(diào)節(jié)pH 加蛋白酶→控制條件反應(yīng)→滅酶→離心→上清液測(cè)·OH清除率。

1.5 堿提油茶餅粕蛋白的條件研究

（1）初始pH值對(duì)堿提效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在料液比為1∶10、溫度為50 ℃、提取時(shí)間為50 min的條件下連續(xù)提取，在初始pH值分別為7.0、8.0、9.0、10.0、11.0時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)的溶出率。

（2）溫度對(duì)堿提效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、料液比1∶10、提取時(shí)間50 min的條件下連續(xù)提取，在提取溫度分別為20、30、40、50、60 ℃時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)的溶出率。

（3）料液比對(duì)堿提效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、溫度為50 ℃、提取時(shí)間為50 min的條件下連續(xù)提取，在料液比分別為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)的溶出率。

（4）浸提時(shí)間對(duì)堿提效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、浸提溫度為50 ℃、料液比為1∶10的條件下連續(xù)提取，在浸提時(shí)間分別為20、40、60、80、100 min時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)的溶出率。

（5）正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平：根據(jù)以上單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，用反應(yīng)的起始pH值（A）、浸提溫度（B）、料液比（C）、浸提時(shí)間（D）作為實(shí)驗(yàn)因素，以蛋白質(zhì)溶出率為考察指標(biāo)，對(duì)油茶餅粕蛋白堿提的參數(shù)進(jìn)行了L9(43)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平見表1。

表 1 正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平Table 1 Factors and levels of the orthogonal experiment

1.6 堿性蛋白酶水解油茶餅粕蛋白的條件研究

（1）起始pH值對(duì)水解油茶餅粕蛋白效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在酶解溫度為40 ℃、酶用量為0.9%、酶解時(shí)間為120 min的條件下連續(xù)酶解，在起始pH值分別為9.0、9.5、10.0、10.5、11.0時(shí)測(cè)定酶解物對(duì)·OH的清除率。

（2）酶解溫度對(duì)水解油茶餅粕蛋白效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、酶用量為0.9%、酶解時(shí)間為120 min的條件下連續(xù)酶解，在酶解溫度分別20、30、40、50、60 ℃時(shí)測(cè)定酶解物對(duì)·OH的清除率。

（3）酶用量對(duì)水解油茶餅粕蛋白效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、酶解溫度為40 ℃、酶解時(shí)間為120 min的條件下連續(xù)酶解，在酶用量分別0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1.1%時(shí)測(cè)定酶解物對(duì)·OH的清除率。

（4）酶解時(shí)間對(duì)水解油茶餅粕蛋白效果的影響的實(shí)驗(yàn)：在起始pH值為10、酶解溫度為40 ℃、酶用量為0.9%的條件下連續(xù)酶解，在酶解時(shí)間分別為30、60、90、120、150 min時(shí)測(cè)定酶解物對(duì)·OH的清除率。

（5）正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平：在以上單因素研究的基礎(chǔ)上，用起始pH值（a）、酶解溫度（b）、酶用量（c）、酶解時(shí)間（d）作為實(shí)驗(yàn)因素進(jìn)行L9(43)的正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)因素與水平見表2。

表 2 正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平Table 2 Factors and levels of the orthogonal experiment

1.7 酶解物對(duì)羥基自由基清除率的測(cè)定

參照文獻(xiàn)[10]中的有關(guān)方法測(cè)定酶解物對(duì)羥基自由基的清除率。

2 結(jié)果與分析

2.1 堿提油茶餅粕蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 起始pH值對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響

起始pH值對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，隨著pH值的升高，蛋白質(zhì)的溶出率逐漸升高。當(dāng)pH值為7時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為7.3%；當(dāng)pH值為9時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為44.1%；而當(dāng)pH值為11時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為47.3%。當(dāng)pH值為7～9時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率隨著pH值的增大而明顯上升；而當(dāng)pH值為9～11時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率趨于穩(wěn)定。但當(dāng)pH值較大時(shí)，提取液呈深褐色，同時(shí)其品質(zhì)與功能都會(huì)遭到破壞。綜合分析可知，油茶餅粕蛋白的浸提溶液的pH值宜為8～10。

2.1.2 浸提時(shí)間對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響

浸提時(shí)間對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，隨著浸提時(shí)間的增加，油茶餅粕蛋白的溶出率隨之提高，最后趨于穩(wěn)定。當(dāng)浸提時(shí)間為20 min時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為3.7%；當(dāng)浸提時(shí)間為60 min時(shí)，其蛋白溶出率為43.2%；而當(dāng)浸提時(shí)間為100 min時(shí)，其蛋白溶出率為46.9%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，浸提時(shí)間為20～60 min時(shí)，其蛋白溶出率逐漸提高；之后，油茶餅粕蛋白的溶出率趨于穩(wěn)定。因此，浸提時(shí)間宜控制在50～70 min內(nèi)。

圖1 pH值對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響Fig. 1 Effect of pH value on soluble rate of C. oleifera dregs proteins

圖2 酶解時(shí)間對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響Fig. 2 Effect of enzymolysis time on soluble rate ofC. oleifera dregs proteins

2.1.3 浸提溫度對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響

浸提溫度對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，油茶餅粕蛋白的溶出率隨著浸提溫度的升高而提高，直到浸提溫度在50 ℃左右時(shí)才開始急劇下降。當(dāng)浸提溫度為20 ℃時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為33.7%；而當(dāng)浸提溫度為50 ℃時(shí)，其蛋白溶出率提高到46.3%。這是因?yàn)?，蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而升高，同時(shí)，溶液的粘度也有所下降，從而加快了化學(xué)反應(yīng)，提高了浸提的速度。但當(dāng)浸提溫度為60 ℃時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率反而降到42.3%。這是因?yàn)椋?dāng)浸提溫度在60 ℃時(shí)，油茶餅粕蛋白質(zhì)已變性。綜合考慮得出，油茶餅粕蛋白的浸提溫度宜控制在40～50 ℃之間。

圖 3 酶解溫度對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響Fig. 3 Effect of enzymolysis temperature on solution rate of C. oleifera dregs proteins

2.1.4 料液比對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響

料液比對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，隨著料液比的升高，油茶餅粕蛋白的溶出率明顯上升。當(dāng)料液比為1∶6時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為20.3%；當(dāng)料液比為1∶10時(shí)，其蛋白溶出率為45.1%。這是因?yàn)?，?dāng)料液比增大時(shí)，溶液的粘度隨之相對(duì)降低，溶液內(nèi)部的阻力也就減小，分子擴(kuò)散加快，其浸出速度也就加快。而當(dāng)料液比為1∶14時(shí)，油茶餅粕蛋白的溶出率為47.5%，相對(duì)于料液比為1∶10時(shí)的油茶餅粕蛋白溶出率而言僅提高2.4%，提高幅度并不大。這是因?yàn)椋鞍踪|(zhì)溶解于浸提液中已接近飽和狀態(tài)，過(guò)量的蛋白質(zhì)并不能溶解。因此，料液比宜設(shè)在1∶10～1∶14之間。

圖4 料液比對(duì)油茶餅粕蛋白溶出率的影響Fig. 4 Effect of ratio of material to liquid on soluble rate of C. oleifera dregs proteins

2.1.5 堿提油茶餅粕蛋白的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)以上堿提油茶餅粕蛋白的各單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3。從表3中可以看出，各因素對(duì)堿提油茶餅粕蛋白溶出率影響的主次順序?yàn)锳＞B＞C＞D，即起始pH值＞浸提溫度＞料液比＞浸提時(shí)間；堿提油茶餅粕蛋白的最優(yōu)組合條件為A3B3C3D2，即起始pH值為10、浸提溫度為50 ℃、料液比為1∶14、時(shí)間為60 min。因?yàn)楸?中由極差分析得到的最優(yōu)組合未出現(xiàn)于此前的9個(gè)實(shí)驗(yàn)方案中，故需進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果表明，在此組合條件下，油茶餅粕蛋白的溶出率可達(dá)47.9%，由此證明，該組合條件為最優(yōu)組合條件。

表 3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Design and results of the orthogonal experiment

2.2 堿性蛋白酶水解油茶餅粕蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 起始pH值對(duì)·OH清除率的影響

起始pH值對(duì)·OH清除率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。由圖5可知，隨著起始pH值的增大，酶解物對(duì)·OH的清除率先呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)，然后急劇下降。當(dāng)pH值為9.0時(shí)，其對(duì)·OH的清除率為6.4%；當(dāng)pH值為10.0時(shí)，其對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.2%；而當(dāng)pH值為11.0時(shí)，其對(duì)·OH的清除率反而降到5.3%。這是因?yàn)?，酶分子的活性部位由結(jié)合部位與催化部位組成，酶分子中的活化中心內(nèi)的基團(tuán)對(duì)pH值比較敏感，不同的pH值，活化中心的催化效果不同；由酶分子形成的空間構(gòu)象是活化中心存在的前提，酶的催化能力與底物構(gòu)象有關(guān)，底物構(gòu)象有一定的pH環(huán)境要求，因此，要發(fā)揮最佳的催化功能，需要選取合適的pH值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，pH值的適宜范圍為 9.5～ 10.5。

圖 5 pH值對(duì)·OH清除率的影響Fig. 5 Effect of pH value on ·OH scavenging rate

2.2.2 酶解溫度對(duì)·OH清除率的影響

酶解溫度對(duì)·OH清除率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。由圖6可知，隨著酶解溫度的升高，酶解物對(duì)·OH的清除率先呈上升趨勢(shì)，然后相對(duì)急劇下降。當(dāng)酶解溫度為20 ℃時(shí)，其對(duì)·OH的清除率為35.9%；當(dāng)酶解溫度為40 ℃時(shí)，其對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.9%；而當(dāng)酶解溫度達(dá)60 ℃時(shí)，其對(duì)·OH的清除率反而降到35.2%。這是因?yàn)?，適宜的溫度能增加酶的活性，加快分子運(yùn)動(dòng)，從而加快水解速度，但如果溫度過(guò)高，則會(huì)導(dǎo)致酶蛋白變性、失活。所以，選用的酶解溫度范圍宜為35～45 ℃。

圖6 酶解溫度對(duì)·OH清除率的影響Fig. 6 Effect of temperature on ·OH scavenging rate

圖7 酶用量對(duì)·OH清除率的影響Fig. 7 Effect of enzyme dosage on ·OH scavenging rate

2.2.3 酶用量對(duì)·OH清除率的影響

酶用量對(duì)·OH清除率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。由圖7可知，隨著酶用量的增加，酶解物對(duì)·OH的清除率逐漸升高而后趨于穩(wěn)定。當(dāng)酶用量為0.3%時(shí)，酶解物對(duì)·OH的清除率為29.8%；當(dāng)酶用量為0.9%時(shí)，其對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.4%；而當(dāng)酶用量達(dá)到1.1%時(shí)，其對(duì)·OH的清除率（38.8%）上升不明顯。這是因?yàn)?，隨著酶用量的增加，水解液中的酶濃度也有所增加，使得水解程度加深，當(dāng)所用的蛋白酶達(dá)到一定量時(shí)，蛋白完全被水解，所以，此時(shí)即使再增加酶的用量，也不能提高其對(duì)·OH的清除率。因此，實(shí)驗(yàn)選用的酶用量在0.8%～1.0%之間。

2.2.4 酶解時(shí)間對(duì)·OH清除率的影響

酶解時(shí)間對(duì)·OH清除率的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖8所示。由圖8可知，酶解物對(duì)·OH的清除率隨著酶解時(shí)間的增加先上升，當(dāng)酶解時(shí)間達(dá)到120 min時(shí)便開始下降。當(dāng)酶解時(shí)間為30 min時(shí)，酶解物對(duì)·OH的清除率為21.0%；當(dāng)酶解時(shí)間為120 min時(shí)，其對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.2%；但是，當(dāng)酶解時(shí)間增加至150 min時(shí)，其對(duì)·OH的清除率反而降至34.1%。這是因?yàn)?，隨著酶解時(shí)間的增加，酶解反應(yīng)能夠充分地進(jìn)行，而具有還原能力的蛋白酶解物的含量也隨之提高，所以酶解物對(duì)·OH的清除率有所提高。但是，當(dāng)酶解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，具有強(qiáng)還原能力的肽段水解下來(lái)之后又進(jìn)一步水解了，從而喪失了活性。所以，實(shí)驗(yàn)選用的酶解時(shí)間為110～130 min。

圖 8 酶解時(shí)間對(duì)·OH清除率的影響Fig. 8 Effect of enzymolysis time on ·OH scavenging rate

2.2.5 堿性蛋白酶水解油茶餅粕蛋白的正交組合優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)以上堿性蛋白酶水解油茶餅粕蛋白的各單個(gè)影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4。從表4中可以看出，各因素對(duì)·OH清除率影響的主次順序?yàn)閍 ＞d＞c＞b，即起始pH值＞酶解時(shí)間＞酶用量＞酶解溫度；影響·OH清除率的最優(yōu)組合條件為a2b2c3d2，即起始pH值為10、酶解溫度為40 ℃、酶用量為1.0%、酶解時(shí)間為120 min。由于由極差分析得到的最優(yōu)組合未出現(xiàn)于此前的9個(gè)實(shí)驗(yàn)方案中，故要進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。在此方案下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，得到的酶解物對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.9%。由此證明，該組合條件為最優(yōu)組合條件。

表 4 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 4 Design and results of the orthogonal experiment

2.3 油茶餅粕蛋白活性肽的功能分析

2.3.1 油茶餅粕蛋白活性肽對(duì)羥自由基（·OH）的清除率

不同濃度的酶解產(chǎn)物對(duì)·OH清除率的影響情況如圖9所示。由圖9可知，油茶餅粕蛋白活性肽對(duì)·OH的清除率隨著活性肽的質(zhì)量濃度的變大而顯著提高，其對(duì)·OH的清除效果與其濃度間存在量效關(guān)系。當(dāng)其濃度為150 μg/mL時(shí)，其對(duì)·OH的清除率可達(dá)34.49%。

圖 9 不同濃度的活性肽對(duì)·OH的清除率Fig. 9 ·OH scavenging rate under different concentrations of active peptides

2.3.2 油茶餅粕蛋白活性肽對(duì)DPPH自由基的清除率

不同濃度的油茶餅粕蛋白活性肽對(duì)DPPH自由基的清除率的影響情況如圖10所示。由圖10可知，油茶餅粕蛋白活性肽對(duì)DPPH的清除率隨著活性肽質(zhì)量濃度的加大而提高，其對(duì)DPPH的清除率與其濃度間存在量效關(guān)系[11]。當(dāng)活性肽的濃度為150 μg/mL時(shí)，其對(duì)DPPH的清除率高達(dá)37.73%。

圖10 不同濃度的活性肽對(duì)DPPH的清除率Fig. 10 DPPH scavenging rate under different concentrations of active peptides

3 結(jié)論與展望

本實(shí)驗(yàn)以冷榨山茶油的餅粕為原料，用堿提工藝制備油茶餅粕蛋白，最優(yōu)堿提條件為：起始pH值為10，浸提溫度為50 ℃，料液比為1∶14，浸提時(shí)間為60 min。在此條件下，油茶餅粕蛋白的溶出率為47.9%。

本實(shí)驗(yàn)還用堿性蛋白酶酶解油茶餅粕蛋白，得到的最佳酶解條件為：起始pH值為10，酶解溫度為40 ℃，酶用量為1.0%，酶解時(shí)間為120 min。在此酶解條件下，油茶餅粕蛋白酶解物對(duì)·OH的清除率達(dá)到38.9%。

實(shí)驗(yàn)測(cè)定了油茶餅粕蛋白酶解物的抗氧化性，考察了其對(duì)羥自由基（·OH）和 DPPH自由基的清除效果。結(jié)果表明：油茶餅粕蛋白酶解物具有抗氧化性，其活性與其濃度間呈量效關(guān)系。由此可進(jìn)一步推測(cè)：油茶餅粕蛋白的酶解物中含有一些具有抗氧化功能的生物活性肽，這為進(jìn)一步研究油茶餅粕抗氧化肽的精制與純化及其一級(jí)結(jié)構(gòu)分析積累了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

蛋白質(zhì)資源匱乏是世界性研究課題，同時(shí)，許多珍貴的動(dòng)植物蛋白又因技術(shù)手段的落后而被浪費(fèi)；采用非加熱、非化學(xué)試劑制備植物油脂，從而更好地保護(hù)餅粕，這已經(jīng)得到了學(xué)者及業(yè)內(nèi)人士的認(rèn)可；在這些餅粕中，采用溫和的酶水解技術(shù)，可以降解蛋白，以利于人和動(dòng)物的消化吸收，與此同時(shí)，也有望獲得具有特殊功能的生物活性肽，這對(duì)于油料作物資源的綜合開發(fā)利用、豐富蛋白質(zhì)來(lái)源及保護(hù)環(huán)境等方面都具有重要意義。

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Preparation and activity of enzymolysis products ofCamellia oleiferadregs proteins

WANG Chao1a,1b, ZHONG Shan-min1a,1b, ZHU Jun-peng1a,1b, LUO Fan2, CHANG Yin-zi1a,1b, ZHENG Jian1a,1b, ZHENG Xu-wei3
(1.a. The Key Laboratory for Quality Improvement of Agricultural Products of Zhejiang Province; b.College of Agriculture and Food Science, Zhejiang A&F university, Lin’an 311300, Zhejiang, China; 2. Research Institute of Subtropical Forestry,Chinese Academy of Forestry, Fuyang 311400, Zhejiang, China; 3. Zhejiang Jinhua Jinshan Limited Company, Jinhua 321017, Zhejiang, China)

In order to extract proteins fromCamellia oleiferadregs, some important effect factors ofC. oleiferadregs proteins with alkali extraction were researched, by several single factor experiments and an orthogonal experiment, and the optimal extraction processes were obtained, namely initial pH value 10, extraction temperature 50 ℃, solid-liquid ratio 1∶14 and extraction time 60 min. Under these extraction conditions, the extraction rate ofC. oleiferadregs protein reached 47.9%. The effects of enzymolysis products on scavenging rate of ·OH were analyzed, and the optimal enzymolysis conditions were obtained, namely initial pH value 10, enzymolysis temperature 40 ℃, enzyme dosage 1.0% and enzymolysis time 120 min. Under these enzymolysis conditions, the scavenging rate of ·OH reached 38.9%. The functions of protein active peptides fromC. oleiferadregs were analyzed, and the results showed that the scavenging rate of ·OH and DPPH were 34.49% and 37.73% when concentration of protein peptides was 150 μg/mL.

Camellia oleiferadregs proteins; extraction; enzymolysis; activity

S609.9；S794.4；TS22

A

1003—8981(2015)02—0034—07

2014-11-20

浙江省重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2011R50030)；浙江省重大科技專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目(2012C12005-1)；農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目(2013GB24320614)。

王 超，副教授，博士。

仲山民，教授，博士。E-mail：zhongsm2002@zafu.edu.cn

王 超,仲山民,朱俊朋,等. 油茶餅粕蛋白的制備及其酶解物活性分析[J].經(jīng)濟(jì)林研究,2015,33(2):34－40.

10.14067/j.cnki.1003-8981.2015.02.006

http: //qks.csuft.edu.cn

[本文編校：伍敏濤]