楊麗娜，劉興娜，盧寶慧，吳庠玉，白慶榮,王 雪，高 潔

(1 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，吉林 長春 130118；2 吉林省遼源市 農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，吉林 遼源 136300)

hrpZPsg12轉(zhuǎn)基因煙草及其抗性評價(jià)

楊麗娜1，劉興娜2，盧寶慧1，吳庠玉1，白慶榮1,王 雪1，高 潔1

(1 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，吉林 長春 130118；2 吉林省遼源市 農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，吉林 遼源 136300)

【目的】 將來源于大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌(Pseudomonassyringaepv.glycinea)Psg12菌株的hrpZPsg12基因?qū)霟煵荨霸茻?7”，對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行煙草普通花葉病毒(TMV)、煙草馬鈴薯Y病毒(PVY)和煙草野火病菌(Pseudomonassyringaepv.tabaci)的抗病性鑒定，為培育多抗煙草新品系奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā?采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將hrpZPsg12基因轉(zhuǎn)入煙草“云煙87”中，對T0和T1代轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測、Southern雜交，并對T1代轉(zhuǎn)基因植株的抗病性進(jìn)行評價(jià)?！窘Y(jié)果】hrpZPsg12基因成功轉(zhuǎn)入“云煙87”中，PCR檢測表明共獲得7株T0代陽性植株、35株T1代陽性植株。對T1代PCR陽性植株進(jìn)行Southern檢測，表明外源目的基因hrpZPsg12已經(jīng)整合進(jìn)煙草基因組中，并可在轉(zhuǎn)基因后代植株中穩(wěn)定遺傳。抗病性測定表明，T1代轉(zhuǎn)基因煙草對TMV和PVY表現(xiàn)高抗，對煙草野火病表現(xiàn)中抗?！窘Y(jié)論】 獲得了高抗TMV和PVY及中抗煙草野火病菌的轉(zhuǎn)hrpZPsg12基因植株20和15株。

煙草；hrpZPsg12基因；農(nóng)桿菌介導(dǎo)法；轉(zhuǎn)基因植株

hrp(Hypersensitive response and pathogenicity)基因普遍存在于革蘭氏陰性病原細(xì)菌中，其編碼的Harpin類蛋白本身不具有任何殺菌活性，但可以激活植物產(chǎn)生一系列抗性反應(yīng)，使植物獲得廣譜的抗病、抗蟲作用，并能促進(jìn)植物生長，提高植物抗逆性，增加作物產(chǎn)量，在生產(chǎn)上具有較好的應(yīng)用前景[1-5]。國內(nèi)外學(xué)者用不同來源的hrp基因轉(zhuǎn)化梨樹、油菜、馬鈴薯、大豆等植物，轉(zhuǎn)基因植株都獲得了不同程度的抗性[6-11]。來源于大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌(Pseudomonassyringaepv.glycinea,Psg)的hrpZPsg12基因大小為1 026 bp，編碼431個氨基酸，甘氨酸含量為13.19%，編碼蛋白的分子質(zhì)量約為34 ku。由hrpZPsg12基因編碼的Harpin蛋白具有與其他Harpins蛋白類似的特征和功能。姜兆遠(yuǎn)等[12]克隆到該基因，也證明該基因表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物具有誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性和促進(jìn)植物生長等效應(yīng)[13-15]。張?jiān)圃碌萚10]、尹俊琦等[11]將hrpZPsta基因轉(zhuǎn)入大豆品種中，轉(zhuǎn)基因后代對大豆灰斑病的抵抗能力大幅度增強(qiáng)。但目前該基因在煙草抗病性改良方面的研究尚未見報(bào)道，為進(jìn)一步明確該基因在煙草抗性改良中的功能，提高煙草抗病性，本研究將該基因轉(zhuǎn)化到煙草中并對其進(jìn)行抗病性鑒定，以期進(jìn)一步驗(yàn)證激活hrpZPsg12基因誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性和促進(jìn)植物生長的能力，為煙草抗病育種和誘導(dǎo)抗病機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 受體材料 供試煙草品種為吉林省主栽煙草品種云煙87，由吉林省煙葉公司提供。

1.1.2 菌株和質(zhì)粒 大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌(Pseudomonassyringaepv.glycinea,Psg)菌株P(guān)sg12、農(nóng)桿菌LBA4404、煙草普通花葉病毒(TMV)、煙草馬鈴薯Y病毒(PVY)和煙草野火病菌(Pseudomonassyringaepv.tabaci)，均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病害綜合治理實(shí)驗(yàn)室保存。植物表達(dá)載體pROKⅡ，由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物抗病基因工程研究室惠贈。

1.1.3 主要試劑 PCR擴(kuò)增試劑、限制性內(nèi)切酶，均購自MBI公司；DNA Marker DL2000，購自TaKaRa公司；植物基因組DNA提取試劑盒，購自北京天根公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方 法

1.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建 根據(jù)GenBank登錄號為FJ853143的大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌hrpZPsg12基因序列設(shè)計(jì)1對特異性引物(P1:5′-GCTCTAG-ATGATGCAGAGTCTCAGTCTT-3′和P2:5′-CG-AGCTCTCAGGCAGCAGCCTGGTTTT-3′)，在其5′端和3′端分別引入XbaⅠ和SacⅠ酶切位點(diǎn)。以大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌Psg12基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增[8]。PCR擴(kuò)增條件:94 ℃預(yù)變性6 min；94 ℃變性30 s，56 ℃退火45 s，72 ℃延伸90 s，30個循環(huán)；72 ℃延伸8 min。PCR產(chǎn)物與pGM-T連接，構(gòu)建克隆質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，提取重組質(zhì)粒，雙酶切鑒定后送TaKaRa公司測序。用XbaⅠ和SacⅠ分別對克隆載體及表達(dá)載體pROKⅡ進(jìn)行雙酶切，回收目的片段。將目標(biāo)基因與植物表達(dá)載體連接、熱激法轉(zhuǎn)化DH5α，提取重組質(zhì)粒后進(jìn)行雙酶切鑒定，測序。凍融法將其轉(zhuǎn)入到農(nóng)桿菌LBA4404中，用于轉(zhuǎn)化煙草。

1.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草 轉(zhuǎn)化煙草按白慶榮等[16]的方法進(jìn)行，轉(zhuǎn)基因植株種子分單株收獲。

1.2.3 T0代和T1代植株的分子檢測 1)PCR檢測。從T0和T1代轉(zhuǎn)化煙草植株及對照植株中剪取葉片，CTAB法提取植物基因組DNA，以P1和P2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以質(zhì)粒pROKⅡ-hrpZPsg12為陽性對照，未轉(zhuǎn)化的植株為陰性對照。

2)Southern blot檢測。采用植物基因組DNA提取試劑盒提取PCR檢測陽性植株和對照植株的基因組DNA，經(jīng)BamHⅠ消化過夜，然后用0.8%瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離，再用20ΧSSC轉(zhuǎn)移到尼龍膜，80 ℃固定2 h后與探針雜交。地高辛DNA標(biāo)記與檢測試劑盒(Roche公司)進(jìn)行Southern雜交檢測。以純化的hrpZPsg12為模板制備探針，采用隨機(jī)引物標(biāo)記法進(jìn)行標(biāo)記，隨后按照試劑盒說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、雜交、封閉和顯色。

1.2.4 T1代轉(zhuǎn)基因植株的抗病性評價(jià) (1)TMV和PVY的抗性評價(jià)。病毒汁液的制備：取感染TMV和PVY的煙草葉片，用流水沖洗葉片表面，消毒濾紙擦干后剪去主脈，將葉片放入研缽中并加入等量的磷酸緩沖液，在冰上研磨，4 ℃、10 000 r/min 離心10 min，吸取上清液至50 mL離心管中，按1∶5體積比用0.1 mol/L的磷酸緩沖液(含體積分?jǐn)?shù)0.1%的巰基乙醇，pH 7.2)稀釋后加入體積分?jǐn)?shù)0.05%的Tween-80表面活性劑備用。

病毒接種：分別選取5株7葉期T1代轉(zhuǎn)基因煙草植株和空白對照植株作為接種對象，每株接種2個完全展開的新生葉片。先將石英砂均勻撒在葉片上，用滅菌毛刷蘸取病毒汁液在接種葉片上輕度摩擦，1～2 h后用無菌水噴洗接種部位，將接種植株置25 ℃溫室中培養(yǎng)。逐天觀察接種煙草葉片的癥狀變化，參照黃婷等[9，17]的方法分別調(diào)查接種后7，15 d煙草葉片的發(fā)病情況，并對轉(zhuǎn)基因煙草進(jìn)行抗性評價(jià)。

(2)煙草野火病菌的抗性評價(jià)。將活化后的煙草野火病菌制成5×108CFU/mL的菌懸液。分別選取15株轉(zhuǎn)基因植株(7葉期)用上述菌懸液噴霧接種，再選取15株非轉(zhuǎn)基因健康植株用無菌水噴霧作為空白對照，套袋保濕24 h，置25 ℃溫室中培養(yǎng)。接種后7 d，調(diào)查發(fā)病情況，記載葉片病斑直徑，計(jì)算平均病斑直徑和病葉率。

煙草野火病的病級指數(shù)采用9級分級標(biāo)準(zhǔn)，其中0級：葉片無病斑；1級：病斑占葉片面積5%以下；3級：病斑占葉片面積6%～10%；5級：病斑占葉片面積11%～20%；7級：病斑占葉片面積21%～40%；9級：病斑占葉片面積40%以上。按下式計(jì)算病情指數(shù)：

病情指數(shù)=[(∑各級病葉數(shù)×該病級值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×9)]×100。

按病情指數(shù)進(jìn)行群體抗性分類。群體抗性分類標(biāo)準(zhǔn)為4級，其中免疫：病情指數(shù)等于0，無侵染；高抗：0<病情指數(shù)≤20；中抗：20<病情指數(shù)≤50；感?。?0<病情指數(shù)≤100。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與pGM-T連接，構(gòu)建克隆質(zhì)粒pGM-hrpZPsg12，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，提取重組質(zhì)粒。用XbaⅠ和SacⅠ分別對克隆載體進(jìn)行酶切，得到1 026 bp的片段，將該片段與相同酶切位點(diǎn)的植物表達(dá)載體pROKⅡ進(jìn)行連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pROKⅡ-hrpZPsg12， PCR和雙酶切鑒定(圖1)及測序結(jié)果表明，植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。

圖1 質(zhì)粒pROKⅡ-hrpZPsg12的酶切鑒定M.DL2000 DNA Marker；1,2.pROKⅡ-hrpZPsg12質(zhì)粒 XbaⅠ/SacⅠ雙酶切

2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草的轉(zhuǎn)化

將構(gòu)建好的植物表達(dá)載體經(jīng)凍融法轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，葉盤法轉(zhuǎn)化煙草，結(jié)果獲得10株卡那抗性植株(圖2)。

圖2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的hrpZPsg12基因轉(zhuǎn)化煙草A.預(yù)培養(yǎng)；B.共培養(yǎng)；C.選擇培養(yǎng)；D.分化芽；E.生根培養(yǎng)；F.轉(zhuǎn)化植株
Fig.2 Transformation ofhrpZPsg12gene into tobacco via agrobacterium-mediated method A.Pre-regeneration culture;B.Co-cultivation;C.Callus culture;D.Km resistant buds from tobacco leaf disks;E.Root-reduced culture;F.Transformation plants

2.3 轉(zhuǎn)基因煙草的分子檢測

2.3.1 PCR檢測 轉(zhuǎn)基因植株T0代總DNA PCR產(chǎn)物的電泳檢測結(jié)果(圖3)表明,從T0代植株中擴(kuò)增出了與陽性對照在同一位置的特異性條帶，初步證明hrpZPsg12基因成功地轉(zhuǎn)入到受體煙草品種中，共獲得了7株陽性植株。

播種PCR檢測為陽性的T0代植株的種子，獲得T1代轉(zhuǎn)基因植株，將其播種于營養(yǎng)缽中，提取基因組DNA，以其為模板，P1、P2為引物進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果(圖4)表明，外源hrpZPsg12基因在轉(zhuǎn)基因后代中能夠遺傳，共獲得了35株T1代轉(zhuǎn)基因植株。

2.3.2 Southern雜交 對部分T1代PCR檢測為陽性的植株基因組DNA用BamHⅠ進(jìn)行酶切，并進(jìn)行Southern 雜交分析,結(jié)果如圖5所示。圖5顯示，PCR檢測為陽性的T1植株與陽性對照在相同位置出現(xiàn)雜交條帶，證明外源hrpZPsg12基因已整合到煙草基因組中并可穩(wěn)定遺傳。

圖3 T0代轉(zhuǎn)基因煙草植株的PCR檢測
1～5.轉(zhuǎn)基因植株；6.未轉(zhuǎn)化植株；7.重組表達(dá)質(zhì)粒 pROKⅡ-hrpZPsg12； M.DL2000 DNA Marker
Fig.3 PCR analysis of T0transgenic tobacco plants 1-5.Transgenic tobacco plants;6.Non-transgenic plant;7.Recombined plasmid pROKⅡ-hrpZPsg12;M.DL2000 DNA Marker

圖4 T1代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測1～4.T1代轉(zhuǎn)基因植株；5.未轉(zhuǎn)化植株；M.DL2000 DNA MarkerFig.4 PCR analysis of T1 transgenic tobacco plants 1-4.Transgenic tobacco plants;5.Non-transgenic plant；M.DL2000 DNA Marker

圖5 轉(zhuǎn)基因煙草的Southern blot分析1.陰性對照；2.陽性對照；3,4.轉(zhuǎn)基因陽性株系Fig.5 Southern blot analysis of transgenic tobacco plants1.Negative control;2.Positive control;3,4.Transgenic tobacco plants

2.4 T1代轉(zhuǎn)基因煙草的抗病性評價(jià)

在接種TMV后7 d，轉(zhuǎn)基因煙草接種的2個葉片產(chǎn)生不規(guī)則的過敏性枯死斑(圖6-A)，未轉(zhuǎn)基因植株的葉片產(chǎn)生典型的TMV初期癥狀(圖6-B)；在接種后15 d，轉(zhuǎn)基因煙草植株接種的2個葉片枯死，上部新生葉片正常(圖6-C)，而未轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓觌S著病程的持續(xù)，整株發(fā)病(圖6-D)。由此可以看出，轉(zhuǎn)基因煙草對TMV具有高度抗性。

圖6 轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草植株接種TMV后的癥狀
A.接種7 d的轉(zhuǎn)基因植株;B.接種7 d的非轉(zhuǎn)基因植株;C.接種15 d的轉(zhuǎn)基因植株;D.接種15 d的非轉(zhuǎn)基因植株
Fig.6 Symptoms on leaves of transgenic plants and non-transgenic plants after inoculation with TMV respectively
A.Transgenic tobacco plants 7 d after inoculation;B.Non-transgenic plants 7 d after inoculation; C.Transgenic tobacco plants 15 d after inoculation;D.Non-transgenic plant 15 d after inoculation

在接種PVY后7 d，轉(zhuǎn)基因煙草植株生長正常 (圖7-A)；非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓甑娜~片產(chǎn)生典型的PVY癥狀(圖7-B)。在接種后15 d，轉(zhuǎn)基因煙草生長正常(圖7-C)，而非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓耆~脈呈褐色至黑色壞死，常延伸到中脈和莖上，造成葉片皺縮卷曲，在葉中脈或側(cè)脈處常發(fā)生大小數(shù)目不一的褐色或白色壞死斑點(diǎn)(圖7-D)。由此可以看出，轉(zhuǎn)基因煙草對PVY具有高度抗性。

圖7 轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草植株接種PVY后的癥狀A(yù).接種7 d的轉(zhuǎn)基因植株;B.接種7 d的非轉(zhuǎn)基因植株;C.接種15 d的轉(zhuǎn)基因植株;D.接種15 d的非轉(zhuǎn)基因植株

在接種煙草野火病菌的第4天，轉(zhuǎn)基因植株未出現(xiàn)發(fā)病癥狀(圖8-A)，非轉(zhuǎn)基因煙草植株出現(xiàn)水漬狀圓形褪色的小斑點(diǎn)(圖8-B)；在接種后13 d，轉(zhuǎn)基因煙草開始有部分葉片出現(xiàn)水漬狀圓形褪色的小斑點(diǎn)(圖8-C)，發(fā)病率為5%,推遲發(fā)病7～9 d。非轉(zhuǎn)基因煙草發(fā)病率達(dá)到60%，病斑擴(kuò)大，中心變成褐色，周圍有一圈很寬的黃綠色暈環(huán)，病斑合并擴(kuò)大，呈不規(guī)則形(圖8-D)；在接種后第21天，轉(zhuǎn)基因植株的平均病情指數(shù)為40，而對照植株的平均病情指數(shù)為100(表1)。隨著病程的持續(xù)，接種30 d時(shí)對照植株進(jìn)入病情指數(shù)為100的平穩(wěn)期，轉(zhuǎn)基因植株在30 d時(shí)才進(jìn)入病情指數(shù)為80平穩(wěn)期。上述結(jié)果表明，所選取的15株轉(zhuǎn)基因煙草均中抗煙草野火病菌。

圖8 轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草植株在接種煙草野火病菌后的癥狀A(yù).接種4 d的轉(zhuǎn)基因植株;B.接種4 d的非轉(zhuǎn)基因植株;C.接種13 d的轉(zhuǎn)基因植株;D.接種13 d的非轉(zhuǎn)基因植株

表1 轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草植株對煙草野火病菌的抗性Table 1 Resistance of transgenic and non-transgenic plants against Pseudomonas syringae pv.tabaci

3 討 論

hrpZ基因編碼的Harpin蛋白在引起植物產(chǎn)生過敏反應(yīng)的同時(shí)，不僅可以誘導(dǎo)植物獲得系統(tǒng)性抗性，還能刺激植物生長發(fā)育，誘導(dǎo)其他有益反應(yīng)的發(fā)生[13-16]。Harpin蛋白的作用機(jī)理并不是直接針對目標(biāo)病原菌，而是刺激植物自身產(chǎn)生過敏性反應(yīng)(HR),從而達(dá)到抵御不利微生物侵害的目的，該反應(yīng)效果已被證實(shí)能夠激發(fā)并提高植物體對多種微生物病原菌的抗性，而這種自然的免疫機(jī)制可以促進(jìn)植物抵抗一系列的細(xì)菌、真菌和病毒病害，賦予植物廣譜抗病性。目前已經(jīng)得到了高抗晚疫病轉(zhuǎn)hrp基因的馬鈴薯,用馬鈴薯晚疫病菌復(fù)合生理小種挑戰(zhàn)接種測定表明，HrpN蛋白的轉(zhuǎn)基因植株能夠拮抗病原菌的侵?jǐn)_[7-8]。張?jiān)圃碌萚10]、尹俊琦等[11]將hrpZPsta基因轉(zhuǎn)入2個大豆品種中，使大豆植株對真菌類病害的抵抗能力有較顯著的增強(qiáng)。本試驗(yàn)將hrpZPsg12基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入煙草獲得了穩(wěn)定遺傳2代的轉(zhuǎn)基因植株，T1代轉(zhuǎn)基因植株對TMV、PVY和煙草野火病的抗性都有所增強(qiáng)，且對TMV和PVY表現(xiàn)高抗，對煙草野火病表現(xiàn)中抗，以上研究結(jié)果說明，hrp基因編碼的Harpin蛋白在誘導(dǎo)植物獲得系統(tǒng)性抗性上有很大的作用，但是具體對哪種病害的抵抗能力更強(qiáng)尚不甚明確，這有待進(jìn)一步研究。

近些年，人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性的問題愈加關(guān)注。hrpZPsta基因編碼的Harpin蛋白并非是毒蛋白，不會對植物體或者食用植物的動物或人造成危害，此種蛋白的主要作用是引起植物體本身的過敏性反應(yīng)，以應(yīng)對病原菌的入侵并產(chǎn)生廣譜的抗病性。因此該基因是較為安全的，不會給人們帶來對轉(zhuǎn)基因作物的恐慌。該基因在增強(qiáng)植株自身抗病性的同時(shí)，還可以提高煙草抗病性，改良煙草的品質(zhì)，為進(jìn)一步培育抗病轉(zhuǎn)基因煙草新品系奠定了基礎(chǔ)。

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Transgenic tobacco withhrpZPsg12gene and evaluation of its resistance

YANG Li-na1,LIU Xing-na2,LU Bao-hui1,WU Xiang-yu1, BAI Qing-rong1,WANG Xue1,GAO Jie1

(1CollegeofAgronomy,JilinAgriculturalUniversity,Changchun,Jinlin130118,China;2AgriculturalTechnologyExtensionStationofLiaoyuanCity，Liaoyuan,Jinlin136300，China)

【Objective】hrpZPsg12gene fromPseudomonassyringaepv.glycineaPsg12 strain was imported to tobacco variety “Yunyan 87” and the disease resistance to TMV,PVY andPseudomonassyringaepv.tabaciwas identified to provide reference for cultivating resistant tobacco varieties.【Method】hrpZPsg12gene was transferred into “Yunyan 87” by agrobacterium-mediated transformation method.Transgenic plants of T0generation and T1generation were detected by PCR,Southern blot and resistance assay.The disease resistance of T1generation plants was also evaluated.【Result】 PCR detection showed that this study obtained 7 positive transgenic plant lines in T0generation and 35 plant lines in T1generation,indicating thathrpZPsg12gene could inherit in transgenic plants.Southern blot for T1generation confirmed thathrpZPsg12gene was integrated into tobacco.Resistance assay confirmed that T1generation had high resistance against TMV and PVY,and moderate resistance againstPseudomonassyringaepv.tabaci.【Conclusion】 A total of 20 transgenic plants lines with high resistance against TMV and PVY and 15 transgenic plants lines with moderate resistance againstPseudomonassyringaepv.tabaciwere obtained.

tobacco;hrpZPsg12gene;transformation;multiple resistance transgenic plants

時(shí)間:2015-09-09 15:41

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.10.010

2014-03-10

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20090211)；吉林省煙草公司長春市分公司和湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司聯(lián)合資助項(xiàng)目(2012130073)；吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)青年啟動基金項(xiàng)目(201029)；吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)博士科研啟動基金項(xiàng)目(201106)

楊麗娜(1981-)，女，吉林扶余人，實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事植物病害綜合治理研究。E-mail:yanglina2004@sina.com

高 潔(1965-)，女，吉林梨樹人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事植物病害綜合治理研究。E-mail：jiegao115@126.com

S572.034

A

1671-9387(2015)10-0070-07

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