彭勇 徐業(yè)燕 杜成智

【摘要】目的：建立白子菜中黃酮類物質(zhì)（蘆?。┑暮繙y定方法。方法：采用Waters Symmetry C18色譜柱，流動相為甲醇-1%冰醋酸（35∶65），檢測波長為358nm，柱溫25℃。 結(jié)果：蘆丁在00232～0116μg （r=09998）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為994%，RSD為09%。結(jié)論：該法簡便可行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該藥材的含量測定。

【關(guān)鍵詞】白子菜;HPLC;蘆丁

【中圖分類號】R2841【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）07-0020-02

Determination of Rutin in Gynura divaricata（L）DC by HPLCPENG Yong1， XU Ye-yan3， DU Cheng-zhi2*

1 Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi，530001;

2Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi，530001;

3 Guangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanning， Guangxi，530001Abstract：Objective： To establish a HPLC method for the determination of Rutin in Gynura divaricata（L.）DC.. Method： Waters Symmetry C18 analytical column was used， mobile phase： methanol-1% glacial acetic acid （35∶65）， UV detection wavelength was at 358nm; Column temperature was at 25℃. Result： Under the chromatographic conditions used， the calibration curve of Rutin was linear in the range of 00232～0116μg （r=09998）. The average recoveries was 994%， RSD： 09%. Conclusion： The method is accurate， effective and feasible. It can be used for the determination of the contents of Rutin in Gynura divaricata（L.）DC..

Keywords：Gynura divaricata（L.）DC.; HPLC; Rutin

白子菜是菊科植物白子菜Gynura divaricata（L.）DC.的全草，別名白背三七、大肥牛、槍刀藥、清心菜、土生地、白仔菜藥等[1]，多年生草本植物，主產(chǎn)于廣西，在南方各省均有分布。全草消熱解毒，活血化淤，去風(fēng)消腫，根入藥，有瀉火、涼血、生津之功效，是民間治療乳腺炎、關(guān)節(jié)炎、氣管炎等各種炎癥常見中草藥[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[3-4]，以上功效與黃酮化合物有關(guān)。為有效控制藥材質(zhì)量，本研究參考相關(guān)文獻[5-6]建立了白子菜中蘆丁的含量測定方法。

1儀器與試藥

美國Agilent 1260 Series高效液相色譜儀：四元泵，在線脫氣機，自動進樣器 （G1329B），柱溫箱;KQ3200B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）;LG16-WA臺式高速離心機（北京京立離心機有限公司）;超純水系統(tǒng)（MILLIPORE）;電子分析天平（CP224S，Sartorius 德國）。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100080-200707）。白子菜（采自南寧市郊區(qū)）由廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室鑒定為菊科植物Gynura divaricata（L）DC.的全草。

2方法與結(jié)果

21色譜條件Waters Symmetry C18色譜柱（250mm ×46mm，5μm），柱溫25℃;流動相： 甲醇-1%冰醋酸（35∶65），流速10ml/min;檢測波長358nm，進樣量10μl。

22對照品溶液制備精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml含蘆丁058mg的溶液，即得蘆丁儲備液。

23供試品的制備取60℃烘干的白子菜地上部分粉碎后，過篩備用。精密稱取經(jīng)過前處理的白子菜粗粉1g，精密加入甲醇25ml，精密稱定后超聲處理30min，放冷，補足減失重量。濾過后取續(xù)濾液離心10min，靜置，用045μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

24系統(tǒng)適應(yīng)性試驗吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀，按“21 項”下色譜條件記錄色譜圖，色譜圖見圖1-2，蘆丁峰與鄰近峰達到基線分離，分離度良好（R>1 5）。

25線性試驗精密吸取對照品儲備液適量，加甲醇定容，配制系列對照品溶液，分別吸取10μl注入高效液相色譜儀，按“21項”下色譜條件測定峰面積。以對照品的進樣量（μg）對峰面積進行線性回歸，求得回歸方程，為Y=16987X-281，r=09998，線性范圍為00232～0116μg。

26精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，重復(fù)進樣6次，依次測定。測得RSD為009%（n= 6），表明儀器精密度良好。

27穩(wěn)定性試驗取供試品溶液按“21項”下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12h進樣測定，測得結(jié)果RSD為079% （n = 6）。結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

28重復(fù)性試驗取白子菜藥材，按“23項”下供試品溶液的制備方法平行制備供試品溶液6份并依法測定，計算得大蘆丁平均含量為0543mg/g，RSD為16% （ n = 6），說明該法重復(fù)性較好。

29加樣回收率試驗取已知含量并經(jīng)前處理的藥材6份，取約1g，精密稱定，分別精密加入一定量的蘆丁對照品溶液，其余操作按23項下供試品溶液的制備方法，測定，計算，結(jié)果蘆丁平均加樣回收率為994%，RSD=16% （ n=6 ），說明本方法準(zhǔn)確度較好。結(jié)果見表1。

表1加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

原有量

/mg加入量

/mg測定量

/mg回收率

/%平均回

收率/%RSD/%0537405800111239912

994

0905428058001121499760544705800112219955053810580011097985505396058001125310100541605800111259843

210樣品含量測定取6批樣品，按“23項”制備供試品溶液，在“21項”色譜條件測定，結(jié)果見表2。

表2含量測定結(jié)果（n=3）

編號（mg/g）RSD/%105520820537143053906405471550543196055315

3討論

31在實驗過程中，曾分別采用不同比例的乙醇、甲醇超聲提取和回流考察提取率，結(jié)果顯示100%甲醇超聲提取即可較好去除干擾雜質(zhì)又可提取完全效果最佳。

32在流動相的選擇中，分別考察了多種流動相的分離效果，經(jīng)過實驗分析，綜合考慮了分離效果、基線平穩(wěn)、操作方便性等情況，最終確定甲醇-1%冰醋酸（35∶65）為最佳流動相，該條件下測定物質(zhì)出峰快，與雜質(zhì)峰的分離度均達到15以上。

33白子菜的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其含有黃酮類物質(zhì)。近現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白子菜的藥用效果與黃酮化合物有關(guān)。國內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)通過技術(shù)開發(fā)、粗加工、精細(xì)提取人體生理活性有效成分，加工提取白子菜濃縮汁、固體飲料、凍干產(chǎn)品、萃取物（黃酮、多糖提?。┑认盗挟a(chǎn)品。本方法對白子菜藥材中蘆丁的含量測定方法進行初步探索。該法簡便可行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于白子菜藥材及含白子菜制劑中蘆丁的含量測定。

參考文獻

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[4] 俞浩，毛斌斌，周國梁，等.白背三七總黃酮對糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 食品科學(xué)， 2013， 34（15）： 295-298.

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（收稿日期：20140217）