■岳 龍 易孟霞 賀 朝 邱 磊 賀 喜 張石蕊

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料安全與高效利用教育部工程研究中心動物營養(yǎng)研究所，湖南長沙 410128）

血根堿是存在于自然界中的一類含氮的堿性有機(jī)化合物，系罌粟科植物博落回中分離出的生物堿，分子式為[C20H14NO4]+，相對分子質(zhì)量為332.09，橙紅色針狀結(jié)晶，具有抑菌、抗炎的效果。在歐洲，血根堿作為植物源飼料添加劑已使用多年。本研究通過對不同畜禽類型的飼養(yǎng)，評定雞、鴨及豬主要臟器、肌肉中血根堿殘留量，為血根堿預(yù)混劑作為植物源飼料添加劑的安全性提供依據(jù)與參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

血根堿預(yù)混劑：1.5%血根堿（植物源提?。?載體。

1.2 試驗(yàn)動物及分組管理

試驗(yàn)一：選取40日齡健康三黃雞30只。試驗(yàn)分高劑量組（添加80 mg/kg血根堿預(yù)混劑）、低劑量組（添加40 mg/kg血根堿預(yù)混劑）、對照組（不添加血根堿預(yù)混劑），每組10只。雞籠養(yǎng)，試驗(yàn)期間自由采食和飲水，其他日常管理按雞舍常規(guī)進(jìn)行。

試驗(yàn)二：選取60日齡健康攸縣麻鴨30只。試驗(yàn)分高劑量組（添加80 mg/kg血根堿預(yù)混劑）、低劑量組（添加40 mg/kg血根堿預(yù)混劑）、對照組（不添加血根堿預(yù)混劑），每組10只。鴨籠養(yǎng)，各組條件一致，試驗(yàn)期間自由采食和飲水，其他日常管理按鴨舍常規(guī)開展。

試驗(yàn)三：選取80 kg左右健康“杜長大”雜交豬20頭，分試驗(yàn)組（添加80 mg/kg血根堿預(yù)混劑）和對照組（不添加血根堿預(yù)混劑），每組10頭，分欄地面平養(yǎng)，條件一致。飼養(yǎng)試驗(yàn)期間豬自由采食，自由飲水。清潔和消毒工作按常規(guī)進(jìn)行，保持欄舍通風(fēng)、衛(wèi)生、干燥。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)一和試驗(yàn)二的基礎(chǔ)飼糧參照NRC家禽營養(yǎng)需要(1994)配制，低劑量組在基礎(chǔ)飼糧中添加40 mg/kg血根堿預(yù)混劑，高劑量組在基礎(chǔ)飼糧中添加80 mg/kg血根堿預(yù)混劑。

試驗(yàn)三基礎(chǔ)飼糧參照NRC豬營養(yǎng)需要(1998)和中國豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）配制，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中添加80 mg/kg血根堿預(yù)混劑。

1.4 檢測指標(biāo)與方法

1.4.1 樣品采集方法

試驗(yàn)一：試驗(yàn)期為30 d，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每組隨機(jī)選取6只雞，屠宰后取其肝臟、腎臟、胸肌各10 g，將取得的樣品用錫箔紙包好，放入液氮中后取出放入-80℃冰箱保存待測。

試驗(yàn)二：試驗(yàn)期為30 d，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每組隨機(jī)選取6只鴨，屠宰后取其肝臟、腎臟、胸肌各10 g，將取得的樣品用錫箔紙包好，放入液氮中后取出再放入-80℃冰箱保存待測。

試驗(yàn)三：試驗(yàn)期為30 d，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每組隨機(jī)選取6頭豬進(jìn)行屠宰，取其肝臟、腎臟、眼肌各10 g，將取得的樣品用錫箔紙包好，放入液氮中后取出再放入-80℃冰箱保存待測。

1.4.2 樣品中血根堿殘留檢測方法

本研究參照馮宋崗等的方法進(jìn)行測定。

儀器：島津 LCMS2010液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，LC-10AD VP低壓四元梯度泵，CTO-10A VP柱溫箱，SCL-10AD VP系統(tǒng)控制器，LC-MSsolution工作站。

試劑：甲酸(質(zhì)譜級，上海安譜科學(xué)儀器有限公司)、甲醇(色譜純，Merk，Darmstadt，Germany)、鹽酸(分析級，國藥集團(tuán))、乙腈(色譜純，Merk，Darmstadt，Germany)、水(Milli-Q)、血根堿對照品(批號:201101，中國藥品生物制品檢定所)。

供試品溶液制備：稱取1.0 g的組織，加1 ml蒸餾水，制成勻漿，加1 ml 1%鹽酸-甲醇（50∶50），超聲萃取30 min，15 000 r/min離心，上清液轉(zhuǎn)入另一管中，沉淀物加1 ml 1%鹽酸-甲醇（50∶50）重復(fù)超聲萃取30 min，離心，上清液合并，50℃水浴氮?dú)鈸]干，加100 ml流動相，混勻，離心5 min，取上清液5μl進(jìn)樣離心。記錄色譜圖，外標(biāo)法以峰面積比定量。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定條件：色譜柱ThermoHypersil-HyPURITYC18（150×2.1 mm，5 μm）；柱溫40℃；流動相為甲醇∶0.2%甲酸=65∶35，流速0.20 ml/min。

電噴霧電離源（ESI）：電離源電壓4.5 kV，噴霧氣氮?dú)猓∟2）流速為1.5 L/min，干燥氣體氮?dú)饬魉贋?0 L/min。脫溶劑溫度為250℃，檢測器電壓1.6 kV。選擇性正離子監(jiān)測（SIM）質(zhì)荷比（m/z）為332.45的帶正電荷的分子離子峰。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量限

按照1.4.2的方法對標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品進(jìn)行稀釋，并檢測稀釋樣品，經(jīng)測定，本方法血根堿殘留檢測的定量限為5 ng/g。

2.2 雞肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果(見表1)

從表1結(jié)果分析可以看出，高劑量組和低劑量組雞的血根堿殘留量均低于定量限5 ng/g，對照組無血根堿殘留。

表1 雞肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果(ng/g)

2.3 鴨肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果（見表2）

表2 鴨肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果(ng/g)

從表2結(jié)果表明，試驗(yàn)二高劑量組和低劑量組的血根堿殘留量均低于定量限5 ng/g，對照組無血根堿殘留。

2.4 豬肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果（見表3）

表3 豬肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量結(jié)果（ng/g）

表3結(jié)果顯示了豬各器官、組織中血根堿殘留的基本情況。試驗(yàn)組豬肝臟、腎臟及肌肉中血根堿殘留量均小于5 ng/g，對照組無血根堿殘留。

3 討論

早期血根堿對雞、鴨方面的深入研究報(bào)道較少。在有關(guān)鼠的研究中認(rèn)為，血根堿濃度達(dá)到10 mg/kg時增加了鼠肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力，同時造成微粒氧化酶細(xì)胞色素P450活性丟失，造成鼠肝臟受損，出現(xiàn)腹膜水腫及輕微肝腫大。本研究中，低、高劑量組血根堿實(shí)際添加量控制在0.6、1.2 mg/kg，在此劑量持續(xù)飼喂30 d后，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)束屠宰后觀察，所有試驗(yàn)組雞、鴨體內(nèi)均無任何臟器發(fā)生水腫，肝腎大小與色澤正常。與對照組相比，試驗(yàn)組動物采食量、毛色、健康狀態(tài)等也沒有異常，因此，雞、鴨飼料中添加高至1.2 mg/kg血根堿，對動物是安全的。

一般說，大部分生物堿都隨糞便排出體外，只有一小部分會被機(jī)體吸收。研究報(bào)道，豬飼料中博落回生物堿的安全劑量不超過5 mg/kg體重，本研究中，試驗(yàn)組血根堿每天攝入約為0.036 mg/kg體重。此條件下，動物肝腎臟及肌肉中血根堿殘量僅為低于5 ng/g的數(shù)量級。這些都進(jìn)一步證明了血根堿的安全性。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，血根堿使用后相對雞、鴨和豬重要臟器與肌肉中的殘留量很低，全部低于5 ng/g，說明其安全性高。研究結(jié)果為血根堿預(yù)混劑作為飼料添加劑的安全性提供了依據(jù)及參考。