樸成玉，于　敏，劉永武，劉樹(shù)民

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥物安全性評(píng)價(jià)中心，哈爾濱　150040)

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淺談乳鼠在兒童藥藥理毒理學(xué)研究中的應(yīng)用

樸成玉，于敏，劉永武，劉樹(shù)民

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥物安全性評(píng)價(jià)中心，哈爾濱150040)

【摘要】實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究的重要手段，兒童是特殊的用藥人群，故兒童藥實(shí)驗(yàn)研究中選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行藥理毒理學(xué)研究是保證新藥研究科學(xué)性的關(guān)鍵問(wèn)題。作者通過(guò)查閱大量文獻(xiàn)，總結(jié)乳鼠在兒童常見(jiàn)疾病及其治療藥物藥理學(xué)研究和毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用情況，歸納乳鼠在藥理毒理學(xué)研究中存在的問(wèn)題，提出解決方法，為兒童藥研發(fā)中受試動(dòng)物的應(yīng)用提供參考。

【關(guān)鍵詞】?jī)和盟?；乳鼠；藥理；毒?/p>

隨著“奪命退燒藥——尼美舒利”的出現(xiàn)、“叫停魚(yú)腥草注射液事件”和“不合理使用抗生素致聾”等兒童藥不良反應(yīng)的頻發(fā)，兒童用藥安全已成為我國(guó)乃至全球醫(yī)藥行業(yè)最關(guān)注的問(wèn)題。目前我國(guó)兒童藥存在品種少、劑型規(guī)格缺乏、兒童和成人用藥不區(qū)分、不合理用藥、不良反應(yīng)發(fā)生率高等問(wèn)題，而兒童藥研發(fā)不足為其主要原因[1,2]，給我國(guó)兒童帶來(lái)健康隱患。兒童為特殊用藥人群，處于生長(zhǎng)發(fā)育階段，生理生化功能與成人差異較大，同一藥物在兒童和成人體內(nèi)的動(dòng)態(tài)過(guò)程(吸收、分布、代謝、排泄)過(guò)程也不同[3]，故兒童藥藥理毒理作用應(yīng)根據(jù)適用兒童年齡選用不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行研究，但關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適用情況的報(bào)道較少。本文通過(guò)查閱文獻(xiàn)，就乳鼠在兒童常見(jiàn)疾病研究和藥理毒理學(xué)研究中應(yīng)用情況進(jìn)行整理和總結(jié)，為兒童用藥的研發(fā)提供研究方法和技術(shù)。

1乳鼠在兒童常見(jiàn)疾病研究中的應(yīng)用

手足口病是腸道病毒感染而得的急性傳染病，3歲以下兒童為主，多數(shù)以發(fā)熱出診為主要特征[4,5]。防治手足口病研究中多位學(xué)者選用ICR、KM、BALB/c不同日齡的乳鼠接種CoxA16或EV71病毒復(fù)制手足口病模型，觀察給藥后乳鼠的體重、死亡率、生命延長(zhǎng)率、腦、后肢骨骼肌、腸組織中EV71病毒VP1蛋白表達(dá)等，研究對(duì)感染手足口病乳鼠的防御作用及其作用機(jī)理[6-8]。袁媛等[9]分別于交配前和受孕時(shí)注射免疫ICR雌鼠EV71 VLP疫苗、CVA16 VLP疫苗和雙價(jià)VLP疫苗，使母鼠產(chǎn)生抗體，產(chǎn)下仔鼠第5天乳鼠接種EV71和CVA16病毒，觀察單價(jià)和雙價(jià)疫苗對(duì)5日齡手足口病模型乳鼠的免疫保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)EV71 VLP疫苗、CVA16 VLP疫苗和雙價(jià)VLP疫苗均能通過(guò)母鼠傳代于仔鼠降低乳鼠的死亡率，改善體重下降趨勢(shì)。

早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變是早產(chǎn)兒和低出生體重兒的常見(jiàn)疾病，也是兒童致盲的主要原因之一[10]，氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(oxygen-induced retinopathy, OIR)動(dòng)物模型是研究早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的常用手段，由于乳鼠的視網(wǎng)膜血管尚未發(fā)育完全，故為研究早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的良好動(dòng)物[11]，C57BL/6J、SD乳鼠常用于OIR的研究。文獻(xiàn)報(bào)道[12-15]，7日齡C57BL/6J乳鼠置高氧(75%±2%)條件下飼養(yǎng)5 d，正常氧氣條件下飼養(yǎng)5 d，能成功復(fù)制OIR動(dòng)物模型，研究發(fā)現(xiàn)缺氧條件能促進(jìn)OIR乳鼠視網(wǎng)膜組織血管新生，降低抗氧化能力，缺氧條件下巨噬細(xì)胞具有促進(jìn)新生血管形成作用。白內(nèi)障是兒童致盲的主要原因，多位學(xué)者選用12日齡Wistar或SD乳鼠頸背部皮下注射亞硒酸鈉溶液復(fù)制硒性白內(nèi)障模型[16,17]，考察藥物對(duì)硒性白內(nèi)障的防治作用。胎兒酒精綜合征是因孕期飲酒過(guò)量導(dǎo)致的新生兒發(fā)育異常綜合征，唐永萍等[18]研究發(fā)現(xiàn)5日齡C57BL/6J頸部皮下注射2次20%酒精，兩次給藥間隔2 h，給藥第2天導(dǎo)致新生小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層神經(jīng)元明顯丟失。

新生兒缺血缺氧性腦損傷是新生兒窒息引起死亡或智力障礙的原因之一，研究報(bào)道[19,20]，不同日齡乳鼠麻醉手術(shù)結(jié)扎單側(cè)頸總動(dòng)脈，恢復(fù)后置低氧(氧/氮為8/92)環(huán)境下飼養(yǎng)，可成功復(fù)制新生兒缺氧缺血性腦病模型，模型乳鼠學(xué)習(xí)記憶能力、平衡能力降低，出現(xiàn)腦水腫癥狀。

腸易激綜合征是胃腸功能紊亂的慢性功能性疾病，而內(nèi)臟高敏性是IBS的主要發(fā)病原因。旺建偉[21]，梁萬(wàn)年[22]等通過(guò)自幼年期刺激動(dòng)物(8日齡Wistar乳鼠、14日齡SD乳鼠)腸道，增加成年后的內(nèi)臟敏感性，成功復(fù)制IBS大鼠模型。

人類(lèi)輪狀病毒(HRV)和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌是2歲以下嬰幼兒發(fā)生腹瀉的最主要病因，姜曉等選用5日齡NIH乳鼠灌胃HRV病毒成功造模后，連續(xù)給藥5 d七味白術(shù)散發(fā)現(xiàn)該藥物能清除感染乳鼠腸道內(nèi)HRV，明顯改善乳鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞病變[23]；趙姝靜等[24]在抗大腸桿菌腸毒素卵黃抗體的研究中每只3日齡KM乳鼠灌胃給予100 μL致病菌和抗體混合物，驗(yàn)證了抗體對(duì)耐熱腸毒素的中和作用。

2乳鼠在藥理學(xué)研究中的應(yīng)用

胡金芳等將7日齡C57BL/6J乳鼠置75%±2%用高氧箱內(nèi)飼養(yǎng)5 d，正常空氣中飼養(yǎng)5 d復(fù)制OIR動(dòng)物模型，治療后發(fā)現(xiàn)渴絡(luò)欣膠囊通過(guò)HIF1-VEGF信號(hào)途徑抑制VEGF分泌，抑制新生血管生成，改善無(wú)灌注區(qū)的形成[25]。張艷莎等[26]發(fā)現(xiàn)來(lái)源于人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)基可以改善缺氧缺血腦損傷7日齡SD乳鼠移植神經(jīng)干細(xì)胞的存活，減少其凋亡，降低活化的caspase-3表達(dá)，為治療新生兒缺氧缺血腦損傷提供有效方法。新生兒缺氧性腦病是新生兒腦損傷中常見(jiàn)疾病，張艷等[27]用珍寶丸干預(yù)7日齡Wistar乳鼠7 d后置缺氧(氧/氮為8/92)箱內(nèi)1或4 h復(fù)制缺氧性腦損傷模型觀察腦組織，發(fā)現(xiàn)珍寶丸能明顯改善治療組腦組織結(jié)構(gòu)，其作用機(jī)理可能與降低缺氧性腦損傷乳鼠腦組織中p53蛋白的表達(dá)有關(guān)。徐濤等[28]首先結(jié)扎7日齡SD乳鼠頸總動(dòng)脈，恢復(fù)2h后置低氧(氧/氮為8/92)環(huán)境下2.5 h復(fù)制新生兒缺氧缺血性腦病模型，用電針治療能促進(jìn)GFR生兒的表達(dá)，具有較好的腦保護(hù)作用。

3乳鼠在毒理學(xué)研究中的應(yīng)用

草澤彧等[29]選用5日齡ICR乳鼠單次ip 0.1 mL(生藥26 g/kg)或0.1 mL/次連續(xù)ip給藥13 d考察兒童藥熱毒寧注射液的單次和多次給藥毒性，未見(jiàn)異常不良反應(yīng)，可知該藥物在臨床生藥劑量2.23 g/kg下安全。

陳祥鵬等[30]將CVA16病毒從1×106按10倍稀釋至1×102CCID50/mL接種于2日齡ICR乳鼠腦腔感染，觀察21 d內(nèi)乳鼠的死亡情況，根據(jù)Reed-Muench法計(jì)算得CVA16病毒感染ICR乳鼠的LD50為6.5CCID50，為手足口病模型制備提供接種病毒劑量依據(jù)。

徐培渝等[31]連續(xù)觀察30 d離乳SD大鼠體重、攝食量、肝、腎、脾、睪丸、卵巢等主要臟器，確定雙性別SD大鼠的正常值范圍，為藥物毒理學(xué)研究提供正常參考值。

4乳鼠在藥理毒理學(xué)研究中存在的問(wèn)題及展望

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶微生物實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來(lái)源清楚, 用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定以及其它科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物，是醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究的重要手段，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括嚙齒類(lèi)、非嚙齒類(lèi)、靈長(zhǎng)類(lèi)等，其中小鼠和大鼠為最常用的嚙齒類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

兒童是特殊的用藥人群，因其特殊的生長(zhǎng)發(fā)育情況，藥物在兒童體內(nèi)的動(dòng)態(tài)過(guò)程不同于成人，故兒童藥研究應(yīng)根據(jù)兒童常見(jiàn)疾病特點(diǎn)選擇適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)文獻(xiàn)檢索可知，目前關(guān)于幼齡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育成熟情況報(bào)道較少，乳鼠的生物學(xué)特征尚不清楚，尤其是解剖學(xué)和生理學(xué)特點(diǎn)不明確，因此在兒童藥藥理毒理學(xué)研究中如何有效結(jié)合用藥兒童年齡、兒童疾病特征和乳鼠年齡、疾病在乳鼠的敏感性、動(dòng)物模型穩(wěn)定性，盡可能減少人類(lèi)與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬間差異是促進(jìn)兒童藥研發(fā)成功的有效措施。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭志剛,吳彬,管曉東,等. 中國(guó)兒童用藥研發(fā)現(xiàn)狀及存在問(wèn)題分析[J]. 中國(guó)新藥雜志, 2014, 23(22): 2602-2606.

[2]吳世啟, 王強(qiáng). 兒童用藥現(xiàn)狀淺析[J]. 中國(guó)藥事, 2012, 26(7): 787-789.

[3]劉恩梅, 陸權(quán). 促進(jìn)我國(guó)兒科臨床合理用藥[J]. 臨床兒科雜志, 2014, 32(11): 1005-1007.

[4]劉瑞海, 李晶, 曲先鋒, 等. 需機(jī)械通氣的危重癥手足口病患兒臨床特點(diǎn)及預(yù)后因素分析[J]. 中國(guó)當(dāng)代兒科雜志, 2015, 17(3): 249-253.

[5]胡茂紅, 陳盛恩, 吳景文, 等. 2009-2013年南昌市重癥手足口病疫情分析[J]. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志, 2014, 9(11): 1025-1028.

[6]任慶杰 ,李敏, 楊曉嵐, 等. Cox. A16型手足口病乳鼠動(dòng)物模型的建立及免疫、病理特征[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2013, 33(11): 1685-1690.

[7]楊倬, 田波. 五肽對(duì)腸道病毒71型在人橫紋肌肉瘤細(xì)胞和小鼠體內(nèi)復(fù)制的抑制作用 [J].藥學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 49(4): 457-462.

[8]郭姍姍, 金亞宏, 王意忠, 等. 疏風(fēng)解毒顆粒防治手足口病的體內(nèi)外藥效學(xué)研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2012, 18(2): 206-209.

[9]袁媛, 劉鑫, 周婭, 等. 重組EV71和CVA16型手足口病雙價(jià)VLP疫苗構(gòu)建及免疫保護(hù)效果評(píng)價(jià)[J]. 免疫學(xué)雜志, 2014, 30(6): 469-473.

[10]歐陽(yáng)麗娟, 皮練鴻. 早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變治療研究進(jìn)展[J]. 激光雜志，2015, 36(2): 135-138.

[11]伍蒙愛(ài), 陳婕靈, 王維, 等. Apelin及其受體和一氧化氮合酶在氧誘導(dǎo)的新生小鼠增生性視網(wǎng)膜病變中表達(dá)上調(diào) [J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2013, 29(6): 1081-1085.

[12]潘琪琦, 周容, 劉曉鈴. 改良的可定量氧誘導(dǎo)法建立視網(wǎng)膜新生血管小鼠模型[J]. 眼科研究, 2008, 26(7): 486-489.

[13]孟凡星, 王志軍, 羅瑤, 等. 氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變小鼠模型的建立與評(píng)價(jià)[J]. 暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2011, 32(2): 199-204.

[14]余增洋, 龔陳媛, 張國(guó)慶, 等. 氧誘導(dǎo)新生小鼠視網(wǎng)膜病變中血管新生和氧應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的變化 [J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2014, 30(10): 1397-1401.

[15]高翔,王雨生. 巨噬細(xì)胞在小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用[J]. 眼科新進(jìn)展, 2015, 35(3) 201-204.

[16]韓真真, 李楠, 郭麗麗, 等. 兩種黃芩苷眼用制劑防治硒性白內(nèi)障作用研究[J]. 天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 33(3): 164-167.

[17]彭亞軍, 耿宇, 張軍, 等. 二硫蘇糖醇對(duì)大鼠硒性白內(nèi)障的抑制作用[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007, 28(12): 1320-1323.

[18]唐永萍, 楊陽(yáng), 徐培, 等. TO901317修復(fù)酒精致新生小鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 35(5): 376-380.

[19]陳剛, 王偉哲, 陳明釗, 等. 新生幼鼠缺血缺氧性腦損傷模型的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐, 2012, 18(7): 612-614.

[20]毛娟, 余加林, 付雪梅, 等. 新生大鼠缺氧缺血腦組織水腫及水通道蛋白-4的表達(dá)變化[J]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2014, 45(3): 386-389.

[21]旺建偉, 殷越, 隋方宇, 等. 痛瀉要方對(duì)內(nèi)臟高敏性大鼠結(jié)腸MC活化與5-HT相關(guān)性影響的研究[J]. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2013, 41(1): 82-85.

[22]梁萬(wàn)年, 江濤, 陳艷芬, 等. 高良姜總黃酮對(duì)大鼠內(nèi)臟高敏感性模型及鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2013, 19(7): 263-267.

[23]姜曉, 伍參榮, 田雪飛, 等. 七味白術(shù)散對(duì)人類(lèi)輪狀病毒感染乳鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞的保護(hù)作用 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2010, 17(5): 29-30.

[24]趙姝靜, 李丹丹, 朱穎, 等. 抗大腸桿菌腸毒素卵黃抗體的制備和鑒定 [J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)(科技版), 2014, 9: 22-26.

[25]胡金芳, 王瑋, 吳建明, 等. 渴絡(luò)欣膠囊對(duì)缺氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜血管新生的抑制作用[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2014, 20(10): 156-161.

[26]張艷莎, 楊印祥, 欒佐, 等. 間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)新生大鼠缺氧缺血腦損傷移植神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響 [J]. 中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版), 2014, 4(3): 175-182.

[27]張艷, 石博, 黃可欣, 等. 珍寶丸對(duì)缺氧性腦損傷新生鼠腦組織中p53蛋白表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2014, 29: 1258-1260.

[28]徐濤, 王琳, 萬(wàn)浩, 等. 電針對(duì)缺氧缺血性腦病模型大鼠GFRα1干預(yù)研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2014, 32(3): 480-482.

[29]草澤彧, 常秀娟, 趙忠鵬, 等. 熱毒寧注射液抗A16型柯薩奇病毒的研究 [J]. 中草藥, 2014, 45(10): 1450-1455.

[30]陳祥鵬, 檀曉娟, 張勇, 等. 柯薩奇病毒A組16型滅活抗原對(duì)小鼠免疫保護(hù)作用的研究[J].病毒學(xué)報(bào), 2014, 30(3): 226-232.

[31]徐培渝, 劉曉剛, 王正書(shū), 等. 成都地區(qū)SD大鼠參考值范圍的探討(一) — 體重和主要臟器正常參考值 [J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2005, 32(9): 1055-1056.

綜述與專(zhuān)論

Application of suckling mice in pediatric

pharmacological and toxicological studies

PIAO Cheng-yu, YU Min, LIU Yong-wu, LIU Shu-min

(Heilongjiang University of Chinese Medicine Center for Safety Evaluation of Drugs, Harbin 150040, China)

【Abstract】Research on laboratory animals is an important issue in biomedicine. Children are a special drug-using population. The selection of suitable experimental animals is a key issue to ensure the scientific quality of research for pediatric drugs. Based on the review of a large number of literature, the authors summarized the application of suckling mice in the pharmacological research and toxicological evaluation of pediatric drugs for the treatment of common diseases in children. We also summarized the existing problems in pediatric toxicology and proposed solutions for providing a reference of test animal application in pediatric drug research.

【Key words】Pediatric drugs; Suckling mice; Pharmacology; Children; Toxicology

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.006.014

【中圖分類(lèi)號(hào)】R-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1671-7856(2015) 06-0071-04

[通訊作者]劉樹(shù)民(1963-)，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥安全性評(píng)價(jià)。E-mail: keji-liu@163.com。

[作者簡(jiǎn)介]樸成玉(1980-)，博士，主要從事中藥藥物安全性評(píng)價(jià)。E-mail: anping0451@126.com。

[基金項(xiàng)目]黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(PC13S14)。