馬和平 劉霞 劉越童 袁慧蕓

[摘要]目的 探討老年男性患者雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)對冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)影響。 方法 隨機(jī)選擇我院心血管內(nèi)科收治的86例冠心病患者作為觀察組，100例體檢非冠心病患者作為對照組，采用聚合酶連反應(yīng)（PCR）和直接測序法測定兩組研究對象外周血雄激素受體CAG重復(fù)序列的數(shù)目，并采用多因素Logistic回歸分析冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素。結(jié)果 觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項(xiàng)指標(biāo)上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)<22、CAG重復(fù)數(shù)≥22指標(biāo)上，兩組具有明顯的差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)<22是冠心病的危險(xiǎn)因素；其中CAG重復(fù)數(shù)<22是CAG重復(fù)數(shù)≥22患冠心病的危險(xiǎn)度增加4.421倍。 結(jié)論 罹患冠心病的危險(xiǎn)因素很多，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)<22是患冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一。

[關(guān)鍵詞]雄激素受體；基因多態(tài)性；冠心?。话l(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

[中圖分類號(hào)]R541.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]2095-0616（2014）20-196-04

Study of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men

MA Heping LIU Xia LIU Yuetong YUAN Huiyun

Department of Medicine，Dongguan Liaobu Hospital，Dongguan 523400，China

[Abstract]Objective To investigate the relationship of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men. Methods 86 cases of coronary artery disease patients were randomly selected as the observation group，and 100 cases of medical non coronary heart disease were selected as control group，who were treated in our hospital department of cardiovascular internal medicine. Results Investigation of androgen receptor CAG repeat sequence number of the two groups of subjects peripheral was determined by polymerase chain reaction（PCR） and direct sequencing method.Risk factors of coronary heart disease were analyzed by multivariate logistic regression analysis.The observation group and the control group were no significant difference in the four indicators of age，BMI，TT， E2（P>0.05），but the hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of diabetes，family history of coronary heart disease，CAG repeat numbers of<22，CAG repeat number≥22 of two groups had the obvious difference with statistical significance（P<0.05）.Smoking，hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of coronary heart disease，CAG repeat number<22 were risk factors for coronary heart disease.Coronary heart disease risk of CAG repeat numbers<22 was 4.421 times greater than that of CAG repeat numbers≥22. Conclusion There are many risk factors of CHD.Androgen receptor gene CAG polymorphism repeat number<22 is one of the major risk factors of coronary heart disease.

[Key words]Androgen receptor；Gene polymorphism；Coronary artery disease；Onset risk

冠心病是臨床上常見的一種心血管疾病，多發(fā)于中老年群體，且隨著年齡的增長，冠心病的發(fā)生率有呈上升的趨勢[1]。該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、病程長，容易并發(fā)多種合并癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此，對冠心病的早期發(fā)現(xiàn)和治療顯得尤為重要。臨床研究證實(shí)[2]，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)對老年男性冠心病的發(fā)生和發(fā)展具有一定的相關(guān)性。本研究主要以2011年1月～2012年12月我心血管內(nèi)科收治的86例老年男性冠心病患者為研究對象，分析了老年男性患者雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)對冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)影響，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究86例老年男性冠心病患者來自于2011年1月～2012年12月我院心血管內(nèi)科，100例正常研究對象來自于我院體檢中心。納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：（1）老年男性冠心病患者要求經(jīng)臨床體格檢查、患者主訴癥狀、心臟彩超或冠脈造影確診；（2）所有入選對象年齡均在60～82歲之間；（3）不合并其他內(nèi)分泌疾病、臟器功能衰竭；（4）體檢正常者均為自愿參加此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：自身合并其他嚴(yán)重影響本次研究結(jié)果的疾病、依從性較差的研究對象。本次研究共納入186例研究對象。觀察組86例，年齡60～82歲，平均（67.4±8.4）歲，其中單支病變28例、雙支病變39例、3支及以上病變19例。對照組研究對象100例，年齡60～82歲，平均（66.4±7.9）歲，兩組研究對象在年齡比較上差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），均在簽訂知情同意書后開始本次研究。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

液基因組DNA試劑盒由采用天根生化科技（北京）有限公司提供，ABI 3730xlDNA測序儀分析，北京六合華大基因科技股份有限公司提供的合成引物。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用聚合酶連反應(yīng)（PCR）：于清晨空腹抽取受檢者肘靜脈血3mL，采用肝素進(jìn)行抗凝，用等體積的Hanks液稀釋靜脈血，以800r/s的速度進(jìn)行分離操作，棄除上清液，將單個(gè)細(xì)胞放在溫度為-80℃的環(huán)境中保存。提取RNA，放置在Eppendorf管，加入5μgRNA，在溫度為70℃的恒溫箱中孵育5min，離心，加入1μL逆轉(zhuǎn)錄酶，在40℃的冰箱中孵育6min，合成第一鏈cDNA。由上海英峻生物技術(shù)有限公司合成CAG基因引物。內(nèi)引物序列為：下游：5-GCAGcGAcTAccGcATcATcA-3，上游：5-GCTCTGGGACGCAACCTCTCT-3；外引物序列為下游：5-CTCTACGATGGGclTrGGGGAGAAc-3，上游：5-CGGGGTAAGGGAAGTAGGTGGAAG-3。反應(yīng)條件：90℃ 30s；60℃ 40s；72℃ 60s，42個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸300s。采用直接測序法測定兩組研究對象外周血雄激素受體CAG重復(fù)序列的數(shù)目，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測序2次。

1.4 觀察指標(biāo)

采用統(tǒng)一的自制調(diào)查問卷的方式對兩組研究對象進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容包括：患者的一般個(gè)人信息、BMI、危險(xiǎn)因素（吸煙史、高血壓、血脂、糖尿病史）、家族遺傳史等。實(shí)驗(yàn)室檢測的激素指標(biāo)總睪酮（TT）、雌二醇（E2）。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

所有收集數(shù)據(jù)錄入Excel2003，在SPSS10.0中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對兩組研究對象的一般資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析

對兩組研究對象的年齡、BMI、吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、TT、E2、CAG重復(fù)數(shù)<22、CAG重復(fù)數(shù)≥22指標(biāo)進(jìn)行單因素分析，結(jié)果：觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項(xiàng)指標(biāo)上差異不顯著（P>0.05）；但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)<22、CAG重復(fù)數(shù)≥22指標(biāo)上，兩組具有明顯的差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組各種指標(biāo)的單因素比較結(jié)果，見表1。

2.2 冠心病多因素分析

以是否患有冠心病作為應(yīng)變量，CAG重復(fù)數(shù)（<22 vs≥22）、是否吸煙、是否患有高血壓、是否患有糖尿病、是否有冠心病家族史、是否患有糖尿病家族史、是否具有高血脂進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)<22是冠心病的危險(xiǎn)因素；其中CAG重復(fù)數(shù)<22是CAG重復(fù)數(shù)≥22患冠心病的危險(xiǎn)度增加4.421倍。各種危險(xiǎn)因素的OR值及P值，見表2。

3 討論

冠心病是臨床上常見的一種心血管疾病，多發(fā)于中老年群體，且男性發(fā)病數(shù)量多于女性，隨著年齡的增長，冠心病的發(fā)生率有呈上升的趨勢。該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、病程長，容易并發(fā)多種合并癥，具有較大的治療難度。因此，對冠心病的發(fā)病機(jī)制和影響因素的研究顯得尤為重要。近年來，臨床上加大了對老年男性冠心病患者影響因素的研究力度，并取得了一定的進(jìn)展。經(jīng)研究證實(shí)[5]，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)對老年男性冠心病的發(fā)生和發(fā)展具有一定的相關(guān)性。

AR是介導(dǎo)雄激素生理效應(yīng)的主要蛋白，其3個(gè)主要結(jié)構(gòu)域由不同的外顯子編碼，其周中，CAG重復(fù)序列多態(tài)是其中的一個(gè)外顯子主要組成部分[6]。AR的功能和表達(dá)受到受到外顯子CAG重復(fù)序列多態(tài)性的調(diào)控，而AR基因中的CAG重復(fù)序列多態(tài)和冠心病的關(guān)系密切相關(guān)。近年來，國內(nèi)外大量研究證實(shí)[7]，雄激素具有抗缺血的功效，且雄激素水平和男性冠心病的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，其中，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)，22是老年男性冠心病發(fā)生和發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素。老年男性冠心病患者的血循環(huán)睪酮水平降低，而睪酮水平的降低會(huì)一定程度上增加動(dòng)脈粥硬化的風(fēng)險(xiǎn)。因此，老年男性高血壓患者通過長期口服高劑量睪酮制劑對心肌缺血和心絞痛癥狀的改善具有一定的效果。此外，老年男性群體容易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化，而老年男性的血循環(huán)睪酮水平會(huì)降低，表明動(dòng)脈粥樣硬化和睪酮的水平具有一定程度的相關(guān)性。臨床研究發(fā)現(xiàn)[8-9]，內(nèi)源性睪酮的濃度以及雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)和冠心病等心血管病死亡率呈負(fù)相關(guān)，其中，血清中睪酮含量每降低6nmol/L，校正多變量后老年男性冠心病的死亡率會(huì)上升約10%。

本研究通過對86例冠心病患者以及100例體檢非冠心病患者采用聚合酶連反應(yīng)（PCR）和直接測序法測定外周血雄激素受體CAG重復(fù)序列的數(shù)目，并采用多因素Logistic回歸分析冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素，結(jié)果顯示，觀察組與對照組在年齡、BMI、TT、E2四項(xiàng)指標(biāo)上差異不顯著，但是在高血壓、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)，22、CAG重復(fù)數(shù)≥22指標(biāo)上，兩組具有明顯的差異，吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重復(fù)數(shù)，22是冠心病的危險(xiǎn)因素，其中CAG重復(fù)數(shù)，22是CAG重復(fù)數(shù)≥22患冠心病的危險(xiǎn)度增加4.421倍，表明雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)，22是患冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一，這一結(jié)果和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)相吻合[10]。因此，我們認(rèn)為，雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)，22對是導(dǎo)致老年男性冠心病發(fā)生的重要因素。

綜上所述，罹患冠心病的危險(xiǎn)因素很多，包括吸煙、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病家族史等，但雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)，22是患冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一，高血壓臨床診治時(shí)，應(yīng)當(dāng)對患者的雄激素受體CAG基因多態(tài)性重復(fù)數(shù)進(jìn)行測定，以提高診斷正確率，有效預(yù)防老年男性冠心病的發(fā)生。

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（收稿日期：2014-08-08）