董正謀，劉魯川，敖 琳

(1.湖北省紅安縣人民醫(yī)院口腔科，湖北紅安 438400;2.第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所口腔科，重慶 400042;3.第三軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，重慶 400038)

復(fù)方奧硝唑甲磺酸培氟沙星牙周緩釋制劑對(duì)大鼠睪丸毒性的機(jī)制研究

董正謀1，2，劉魯川2，敖 琳3

(1.湖北省紅安縣人民醫(yī)院口腔科，湖北紅安 438400;2.第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所口腔科，重慶 400042;3.第三軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，重慶 400038)

目的:觀察復(fù)方奧硝唑甲磺酸培氟沙星(COPM)牙周緩釋制劑對(duì)大鼠睪丸毒性的作用機(jī)制。方法:將40只SD雄性大鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和低、中、高劑量組(n=10)，每日分別按1、4、8g/kg-1的劑量灌服COPM牙周緩釋制劑，陰性對(duì)照組每日按體質(zhì)量灌服相應(yīng)體積的雙蒸水，連續(xù)42d。所有大鼠處死后，分別計(jì)算附睪系數(shù)，檢查精子計(jì)數(shù)、活動(dòng)率和畸形率;透射電鏡觀察生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu);考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定睪丸組織中乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)的活力;RT-PCR檢測(cè)睪丸組織中雄激素結(jié)合蛋白(ABP)、抑制素-α(inhibin-α)基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:高劑量組睪丸、附睪系數(shù)減小，精子活力降低、計(jì)數(shù)減少、畸形率增加(P＜0.05)，生精細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度損害;高劑量組睪丸組織中的LDH、LAL、ACP和高、中劑量組的γ-GT活力降低;高劑量組睪丸組織中的ABP和inhibin-α mRNA表達(dá)水平下降(P＜0.05)。結(jié)論:高劑量COPM牙周緩釋制劑對(duì)大鼠睪丸有一定的毒性;睪丸組織中LDH、ALP、ACP、γ-GT的活力下降，ABP和inhibin-α mRNA的表達(dá)減少可能是其毒性作用機(jī)制之一。

牙周緩釋制劑;睪丸;超微病理;組織酶;基因表達(dá)

［Chinese Journal of Conservativedentistry，2015，25(6):354］

牙周病是一種病因復(fù)雜的微生物感染性疾病，在世界范圍內(nèi)均有較高的發(fā)生率?？梢芍虏【苯踊蜷g接作用于牙周組織或其他組織器官后，可引起一系列損害和癥狀，并嚴(yán)重影響患者的生理和心理健康。在牙周病治療中，藥物的應(yīng)用占有非常重要的位置;隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物材料學(xué)的發(fā)展，結(jié)合緩控釋制劑的優(yōu)點(diǎn)將藥物局部應(yīng)用于牙周已成為牙周病治療的一種全新、有效的治療方法［1］。COPM牙周緩釋制劑是根據(jù)牙周病的發(fā)病機(jī)制并結(jié)合緩控釋制劑的優(yōu)點(diǎn)而研制的新藥，本課題組在前期試驗(yàn)中已證實(shí)其具有較好的抑菌效果，發(fā)現(xiàn)臨床設(shè)計(jì)劑量(遠(yuǎn)低于低劑量組制劑)對(duì)大鼠睪丸無毒性作用，且高劑量制劑對(duì)大鼠睪丸有一定毒性［2-3］。本研究通過進(jìn)一步觀察該制劑對(duì)大鼠睪丸的毒性，并探討其毒性作用機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要材料、試劑和儀器

SPF級(jí)SD(sprague-dawley rats)雄性大鼠［合格證號(hào):SCXKC(渝)2007-0005，第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心］;復(fù)方奧硝唑甲磺酸培氟沙星牙周緩釋制劑(10 mg/枚，自制);考馬斯亮藍(lán)測(cè)試盒、乳酸脫氫酶 (lactatedehydrogenase，LDH)試劑盒、堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase，ALP)試劑盒、酸性磷酸酶 (acid phosphatase，ACP)試劑盒、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶 (γ-glutamyl transpeptidase，γ-GT)試劑盒(南京建成生物工程研究所);柱式小量總RNA抽提試劑盒(上海華舜生物有限公司);Reverse transcription system A3 500、GoTaqgreen master mix M7 122(Promega，美國);7 200型可見光分光光度計(jì)(Unic，美國);全波長(zhǎng)酶標(biāo)測(cè)定儀(賽默飛，美國);TECNAI-10透射電子顯微鏡(飛利浦，荷蘭);ND 1 000型核酸蛋白分析儀(Thermo，美國);PCR儀(Bio Rad，美國);VDS-CL型凝膠成像系統(tǒng)(GE，美國);高速低溫離心機(jī)(貝克曼，美國);XBK-25型血球計(jì)數(shù)板(上海求精生化試劑有限公司);AV-560生物顯微鏡(OLYMPUS，日本)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組和給藥

取11～13周齡體質(zhì)量為(200±20)g雄性SD大鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，并觀察其活動(dòng)、飲食等無異常后，隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和低、中、高劑量組(n=10)，每組分籠喂養(yǎng)。飼養(yǎng)條件:清潔級(jí)動(dòng)物房，溫度(22±3)℃，相對(duì)濕度50%～60%，人工照明，12 h光照，12 h黑暗，飼以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由飲水。飼養(yǎng)期間，低、中、高劑量組每日分別按體質(zhì)量1、4、8g/kg-1的劑量灌服復(fù)方奧硝唑甲磺酸培氟沙星牙周緩釋制劑(1、4、8g/kg-1折合原料藥0.1、0.4、0.8g/kg-1，相當(dāng)于成人全口牙用量的156.25、625、1 250 倍)，陰性對(duì)照組每日按體質(zhì)量灌服相應(yīng)體積的雙蒸水。每天灌服1次，連續(xù)灌服42d后稱重，并處死所有大鼠。

1.2.2 睪丸、附睪系數(shù)和精子活動(dòng)率、計(jì)數(shù)、畸形率的觀察

分離睪丸、附睪，分別稱其質(zhì)量后按以下公式計(jì)算睪丸、附睪系數(shù):睪丸(或附睪)系數(shù)=雙側(cè)睪丸(或附睪)質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100。取出附睪，置于2 mL、37℃生理鹽水中剪碎，并混勻成精子懸液后，分別進(jìn)行以下檢測(cè):①取精子懸液，置于37℃水中孵育15 min后，室溫(26℃)下觀察200個(gè)精子的活動(dòng)情況(10 min內(nèi)完成)，并計(jì)算精子的活動(dòng)率:活動(dòng)率(%)=活動(dòng)精子數(shù)/200×100%;②取精子懸液置于60～80℃水浴中使其死亡后，取1滴懸液滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，并用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法計(jì)數(shù)精子數(shù):精子數(shù)=懸液精子數(shù)×稀釋倍數(shù)/單側(cè)附睪質(zhì)量;③取精子懸液1滴，推片、晾干，并用甲醇溶液固定5 min后，10g/L伊紅溶液染色1 h后;自來水沖洗，高倍鏡下觀察每只大鼠1 000個(gè)精子中發(fā)生畸形的精子數(shù)(香蕉形、胖頭、雙頭、無溝、尾折迭、雙尾、無定形)，并計(jì)算其畸形率:精子畸形率(%)=畸形精子總數(shù)/1000×100%。

1.2.3 睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察

在冰臺(tái)盒上預(yù)先注入4℃ 25 mL/L戊二醛固定液，迅速將睪丸置于固定液中，并以鋒利刀片迅速切割成1 mm×1 mm×1 mm的組織塊后，繼續(xù)固定。固定結(jié)束后，常規(guī)制作透射電鏡標(biāo)本，并在透射電鏡下觀察生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。

1.2.4 睪丸組織酶活力的測(cè)定

睪丸去被膜、血管，并準(zhǔn)確稱重后，立即置于一定體積的冰生理鹽水中，并在冰浴條件下研磨成勻漿;然后低溫離心取上清，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量，并按試劑盒操作說明測(cè)定 LDH、ALP、ACP、γ-GT的活力。

1.2.5 睪丸雄激素結(jié)合蛋白(ABP)、抑制素-α(inhibin-α)基因的檢測(cè)

用柱式小量總RNA抽提試劑盒提取各組大鼠睪丸組織的總mRNA，并將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。在Genebank中分別搜尋ABP、Inhibin-α mRNA序列，并用Primer-6引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，各引物序列如下:①ABP(286 bp)，Sequence:ATCAACTGCTTGGGGTTCAC，anti-sequence:GAGCCTGGTCAGAGGCATAG;②Inhibin-α(208 bp)，Sequence:GCTCTACCAGGGAGCATGAG，anti-sequence:CACCTTCCTCCTAGCTGACG;③β-actin(285 bp)，Sequence:TCATGAAGTGTGATGTGGATATCCGCAAAG，anti-sequence:TCTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATGGAGG。然后以cDNA為模板，β-actin為內(nèi)參照，并按試劑盒說明構(gòu)建PCR反應(yīng)液體系后，用PCR儀對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增條件為:94℃預(yù)變性2 min;94℃變性30 s，55℃～60℃退火30 s(ABP、Inhibin-α退火溫度為58℃，β-actin退火溫度為60℃)，72℃延伸60 s，共30～35次循環(huán);最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳鑒定后，用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行成像，并掃描目標(biāo)基因片段的灰度，進(jìn)行半定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組睪丸、附睪系數(shù)和精子活動(dòng)率、計(jì)數(shù)、畸形率的比較

高劑量組大鼠的睪丸、附睪重量減輕、系數(shù)減小，精子活動(dòng)能力低下、數(shù)目減少，且畸形精子數(shù)增多;以上各指標(biāo)分別與陰性對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

表1 各組大鼠的睪丸、附睪系數(shù)和精子活動(dòng)率、計(jì)數(shù)、畸形率比較(%，±s)

*與陰性對(duì)照組相比P＜0.05

組別 睪丸系數(shù) 附睪系數(shù) 精子活動(dòng)率(×108)精子數(shù) 精子畸形率陰性對(duì)照組 1.1271 ±0.0024 0.3718 ±0.0038 86.45 1.17 ±0.17 2.89低劑量組 1.1267 ±0.0023 0.3717 ±0.0033 86.55 1.15 ±0.16 2.93中劑量組 1.1266 ±0.0021 0.3712 ±0.0035 85.95 1.15 ±0.19 3.14高劑量組 1.0178 ±0.0029* 0.3659 ±0.0036 74.45* 0.87 ±0.18* 5.72*

2.2 睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察

陰性對(duì)照組:曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列緊密(圖1a);精原細(xì)胞核膜平滑，常染色質(zhì)呈顆粒狀，胞漿線粒體密度中等，細(xì)胞器未見異常(圖1b);初級(jí)精母細(xì)胞細(xì)胞器豐富，線粒體密度中等，核大而圓、膜清晰(圖1c);精子細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，核仁明顯，核染色質(zhì)致密而均質(zhì)(圖1d)。高劑量組:曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞疏散(圖2a);精原細(xì)胞核膜不清晰，染色質(zhì)偏集，線粒體腫脹、空泡化(圖2b);初級(jí)精母細(xì)胞核膜內(nèi)陷，線粒體腫脹，嵴混亂，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，脫顆粒(圖2c);精子細(xì)胞腫脹明顯，核膜部分缺少，染色質(zhì)濃縮不良，部分精子頭部萎縮或畸形(圖2d)。中、低劑量組的生精細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與陰性對(duì)照組相比，基本上無變化(圖從略)。

圖1 陰性對(duì)照組睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)(透射電鏡)

圖2 高劑量組睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)(透射電鏡)

2.3 各組睪丸組織的酶活力比較

睪丸組織中各酶的含量均隨給藥劑量的增加而呈下降趨勢(shì)，其中高劑量組的LDH、ALP、ACP和中、高劑量組的γ-GT下降最明顯，分別與陰性對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表2)。

表2 各組睪丸組織的酶活力(U.g-1protein)比較(±s)

表2 各組睪丸組織的酶活力(U.g-1protein)比較(±s)

*與陰性對(duì)照組相比P＜0.05

組別 n LDH ALP ACP γ-GT陰性對(duì)照組 10 4864.12 ±440.79 129.44 ±17.37 107.51 ±18.01 46.72 ±6.41低劑量組 10 4699.64 ±687.39 120.17 ±23.55 103.07 ±28.03 48.41 ±9.61中劑量組 10 5110.31 ±638.41 115.13 ±25.42 99.02 ±26.65 31.63 ±8.94*高劑量組 10 3919.37 ±588.67* 88.47 ±19.98* 85.45 ±23.66* 27.19 ±7.78*

2.4 各組睪丸組織中ABP、inhibin-α mRNA表達(dá)水平比較

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，高劑量組睪丸組織中ABP(圖3)和inhibin-α(圖4)基因的表達(dá)量均明顯減少;經(jīng)半定量分析，兩者分別與陰性對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表3)。

圖3 睪丸組織中ABP基因的表達(dá)

圖4 各組睪丸組織中inhibin-α基因的表達(dá)

表3 各組睪丸組織中ABP、inhibin-α mRNA表達(dá)定量的比較(±s)

表3 各組睪丸組織中ABP、inhibin-α mRNA表達(dá)定量的比較(±s)

*與陰性對(duì)照組相比P＜0.05

組別 n ABP inhibin-α陰性對(duì)照組10 0.4954 ±0.1546 0.3828 ±0.0242低劑量組 10 0.4407 ±0.1434 0.3825 ±0.0262中劑量組 10 0.4419 ±0.1707 0.3782 ±0.0214高劑量組 10 0.3172 ±0.2037* 0.2855 ±0.0255*

3 討論

牙周病是口腔疾病中的常見病和多發(fā)病，在世界范圍內(nèi)均有較高的發(fā)生率;其病因復(fù)雜，主要以G-菌和厭氧菌感染為主。牙周可疑致病菌的表面物質(zhì)、毒素、酶、機(jī)械運(yùn)動(dòng)及代謝產(chǎn)物等不僅可直接或間接損傷牙周組織或其他組織器官，同時(shí)還能激發(fā)宿主的炎性免疫反應(yīng)，并引起組織細(xì)胞變性壞死、牙周纖維破壞、牙槽骨吸收等一系列損害，從而導(dǎo)致牙齦出血、牙周溢膿、食物嵌塞、牙齒松動(dòng)甚至脫落等癥狀［4］。有研究指出:牙周病與糖尿?。?］、心血管疾?。?］、消化系統(tǒng)疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕疾病、妊娠和生殖［7］等密切相關(guān)。相對(duì)于牙周病藥物治療的全身應(yīng)用、局部涂布、漱口和沖洗，結(jié)合緩控釋制劑的優(yōu)點(diǎn)并將藥物局部用于牙周已成為牙周病治療的有效途徑之一［8］。COPM牙周緩釋制劑是本課題組根據(jù)牙周病的發(fā)病機(jī)制，并結(jié)合緩控釋制劑的優(yōu)點(diǎn)而研制的新藥，本研究通過觀察該制劑對(duì)大鼠睪丸的毒性，并探討其作用機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

睪丸和附睪是雄性生殖系統(tǒng)最主要的器官，其質(zhì)量反映了生殖器官的功能和狀態(tài)［9］。本研究結(jié)果顯示，中、低劑量組大鼠的睪丸和附睪重量未見明顯變化，而高劑量組則引起睪丸和附睪重量減輕，可能是高劑量制劑及其代謝產(chǎn)物影響了睪丸組織中某些物質(zhì)的合成或代謝，從而造成其重量發(fā)生變化;但由于重量是評(píng)價(jià)體格發(fā)育的較好指標(biāo)，并且與生殖密切相關(guān)，其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步闡明?；顒?dòng)度是精子運(yùn)動(dòng)的特征性指標(biāo)，精子數(shù)量足夠和形態(tài)正常是保證動(dòng)物生育的最主要指標(biāo)之一［10］。若精子活動(dòng)能力不足、數(shù)目偏少、畸形偏多，其發(fā)生、分化、增殖和成熟、儲(chǔ)存及受精等過程將會(huì)受到影響，并可直接導(dǎo)致不孕、不育等生殖系統(tǒng)相關(guān)疾病。本結(jié)果顯示，中、低劑量組的精子活動(dòng)率、數(shù)量及畸形率均未見明顯變化;高劑量組的精子活動(dòng)率、數(shù)量明顯低于陰性對(duì)照組，畸形率則明顯高于陰性對(duì)照組，提示高劑量制劑可能影響了精子發(fā)生、分化和成熟的內(nèi)環(huán)境，從而導(dǎo)致某些物質(zhì)合成增加或減少，并使細(xì)胞代謝障礙、功能紊亂甚至結(jié)構(gòu)異常，最終導(dǎo)致其活動(dòng)能力降低、數(shù)量減少和形態(tài)學(xué)異常。

睪丸是精子發(fā)生、分化和增殖的場(chǎng)所，從精原細(xì)胞到精子歷經(jīng)了一系列的過程;在精子發(fā)生、分化和增殖過程中，各級(jí)生精細(xì)胞除含有一般細(xì)胞器外，還含有豐富的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，以保證精子發(fā)生、分化、成熟和良好的活動(dòng)性［11-12］。本結(jié)果顯示，中、低劑量組大鼠的睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)基本無變化，而高劑量組曲細(xì)精管中的各級(jí)生精細(xì)胞在細(xì)胞層次、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)不同程度的變化，說明細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能均受到了一定程度的損傷:細(xì)胞胞膜、核膜模糊，說明生物膜系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)能力低下，出入胞作用下降，防御功能降低;線粒體損傷，說明細(xì)胞能量代謝障礙，動(dòng)力機(jī)構(gòu)受損;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受損，會(huì)使其合成、轉(zhuǎn)化、解毒作用下降，并可進(jìn)一步造成細(xì)胞損傷;染色質(zhì)異常不僅可導(dǎo)致DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制相對(duì)靜止，還會(huì)使細(xì)胞功能低下，同時(shí)畸形率也會(huì)增加。睪丸是一種分化、發(fā)生非?；钴S的組織，正常的超微結(jié)構(gòu)是細(xì)胞行使功能學(xué)的基礎(chǔ)，如超微結(jié)構(gòu)損傷，可導(dǎo)致各級(jí)生精細(xì)胞分化、發(fā)生和成熟出現(xiàn)異常，并伴有結(jié)構(gòu)和功能學(xué)的改變。與本實(shí)驗(yàn)中所觀察到的睪丸、附睪重量減輕，精子活動(dòng)性能降低、數(shù)目減少、畸形率增加相一致。

精子的發(fā)生、分化與成熟經(jīng)歷一系列復(fù)雜的過程，其結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)均有賴于睪丸組織中各種酶活性的維持。LDH可催化丙酮酸和乳酸的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，并通過糖酵解生能，是生精能力的重要標(biāo)志酶［13-14］。本結(jié)果顯示，中、低劑量組的LDH活力與陰性對(duì)照組相比基本上無變化;而高劑量組的LDH活力則顯著降低，并由此導(dǎo)致能量代謝障礙，繼而影響精子的發(fā)生、分化、增殖和成熟等相關(guān)過程。ALP主要參與生殖細(xì)胞分化與增殖時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸，ACP主要發(fā)揮清除受損或衰老細(xì)胞的功能［15］。本結(jié)果顯示，中、低劑量組的 ALP、ACP活力基本上無變化;而高劑量組的ALP、ACP活力均顯著降低，說明各級(jí)生精細(xì)胞的相關(guān)物質(zhì)交換受到影響，同時(shí)細(xì)胞的吞噬和清除能力低下，并可繼發(fā)細(xì)胞的進(jìn)一步損傷和變化。γ-GT是睪丸支持細(xì)胞的特異性標(biāo)志酶［16］，本結(jié)果顯示，低劑量組的γ-GT活力基本上無變化;而中、高劑量組的γ-GT活力則明顯受到抑制，表明睪丸支持細(xì)胞受到了損傷，其營(yíng)養(yǎng)、支持、局部調(diào)節(jié)和防御功能也相應(yīng)降低。

Inhibin是睪丸支持細(xì)胞分泌的糖蛋白激素，含有一個(gè)通用α亞單位和一個(gè)性質(zhì)不同的β亞單位，并根據(jù)不同β亞單位將inhibin分為inhibinA(αβA)和 inhibinB(αβB);其可特異性地作用于腺垂體，并通過下丘腦-垂體-性腺軸負(fù)反饋調(diào)節(jié)激素的分泌，除了對(duì)FSH的分泌起抑制作用外，還可在曲細(xì)精管內(nèi)減少精原細(xì)胞的有絲分裂［17］。ABP是睪丸支持細(xì)胞分泌的一種蛋白，與睪酮結(jié)合后可維持曲細(xì)精管局部睪酮的濃度，從而促進(jìn)生精過程［18］。本結(jié)果顯示，中、低劑量組睪丸組織中inhibin-α和ABP mRNA的表達(dá)量基本上無變化，而在高劑量組表達(dá)量則明顯減少;表明高劑量組支持細(xì)胞相關(guān)功能受到了一定的影響，從而使inhibin-α和ABP合成下降，中樞性反饋調(diào)節(jié)作用減弱，細(xì)胞有絲分裂減少，睪酮濃度減少，局部生物學(xué)效應(yīng)降低，生精啟動(dòng)作用受阻，精子的發(fā)生、分化和成熟受到抑制，并最終導(dǎo)致精子的活動(dòng)性能、數(shù)目和形態(tài)學(xué)等發(fā)生了相關(guān)改變。

綜上所述，高劑量COPM牙周緩釋制劑對(duì)大鼠睪丸有一定的毒性，睪丸組織中 LDH、ALP、ACP、γ-GT的活力下降，以及 inhibin-α、ABP mRNA的表達(dá)量下降可能是其毒性作用機(jī)制之一。

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The study on testicular toxicity of compound ornidazole and pefloxacin mesylate of periodontal sustained release preparations on male rats

DONG Zheng-mou*，LIU Lu-chuan，AO Lin
(*Department of stomatology，People＇s Hospital of Hongan，Hong'an 438400，Chian)

AIM:To observe the testicular influence of compound ornidazole and pefloxacin mesylate(COPM)of periodontal sustained release preparation on male rats and related mechanism.METHODS:40 male SD rats weredivided into negative control，low，medium and highdosegroups by randomdigit table(n=10)and were feddaily with COPM of the preparation at 1，4 and 8g.kg-1respectively，those in the negativegroup were feddaily bydistilled water，continuously for 42d.The coefficient of testis and epididymis，motility，count anddeformity of sperm were examined，ultrastructural examination on sperm atogenic cells were respectively observed;LDH，ALP，ACP，γ-GT in testicular tissue weredetermined respectively，the mRNA expression of ABP and inhibin- α in testis was examtned.RESULTS:In highdosegroup the coefficient of testis and epididymis，motility，count anddeformity of sperm were alldecreased(P ＜0.05);ultrastructure was changed;LDH，ALP，ACP，γ-GT，ABP and inhibin-α were alldecreased(P ＜0.05).CONCLUSION:COPM of periodontal sustained release preparations at highdose has toxicity on testis of male SD rats，the reduction of LDH，ALP，ACP，γ-GT，ABP and inhibin-α in testis may be the cause of mechanisms.

periodontal sustained release preparation;testis;ultrastructural pathology;tissue enzymes;gene expression

R780.2

A

1005-2593(2015)06-0354-06

10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.06.005

2014-11-10

重慶市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(CSTC2009AC5019)

董正謀(1973-)，男，漢族，湖北紅安人。碩士，主治醫(yī)師

劉魯川，E-mail:liuluchuan1957@126.com

·臨床研究·