馬林龍,曹丹,龔自明,金孝芳(湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所,湖北 武漢 430064)
茶樹扦插生根機(jī)理研究進(jìn)展
馬林龍,曹丹,龔自明,金孝芳*
(湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所,湖北 武漢 430064)
茶樹扦插的關(guān)鍵是不定根的形成過程,受到多種因素的共同調(diào)控,研究茶樹生根機(jī)理對了解不定根形成及控制具有重要意義。本文介紹了國內(nèi)外關(guān)于茶樹不定根形成機(jī)理的解剖學(xué)、生理生化(植物激素、酶、營養(yǎng)物質(zhì))、分子生物學(xué)3個(gè)方面的研究進(jìn)展。通過對茶樹生根機(jī)理的綜合研究,可以為加快茶樹扦插生根速率和提高其成活率提供理論參考和技術(shù)支持。
茶樹扦插;生根機(jī)理;解剖學(xué);生理生化;分子生物學(xué)
茶樹扦插是利用茶樹的再生機(jī)能和極性現(xiàn)象,將離體的枝條再生成一個(gè)完整新植株的繁殖方法,具有保持母本的特征特性,品種純度高,繁殖系數(shù)大,取材方便,繁殖季節(jié)長等優(yōu)點(diǎn)。隨著茶樹栽培面積的增加以及無性系茶樹良種的推廣,近年來,在茶樹扦插生根機(jī)理的研究方面也取得了一定的進(jìn)展。本文結(jié)合當(dāng)前國內(nèi)外研究,對茶樹扦插生根過程解剖學(xué)、生理生化、分子生物學(xué)等方面進(jìn)行綜述,以期為茶樹扦插生根機(jī)理的進(jìn)一步研究提供一定參考,同時(shí)也為茶樹扦插技術(shù)發(fā)展提供理論支持。
插穗葉片、莖的解剖結(jié)構(gòu)與其生根率及難易程度有著密不可分的關(guān)系,其中與皮層中是否存在連續(xù)排列成環(huán)狀的厚壁細(xì)胞和莖內(nèi)有無潛伏根原基有較高的相關(guān)性[1,2]。茶樹插穗半木質(zhì)化莖從外至內(nèi)依次由表皮、皮層、中柱鞘、韌皮部、形成層、木質(zhì)部和髓等部分組成,其皮層最外層為1~2層厚壁細(xì)胞,枝條內(nèi)沒有潛伏根原基存在[3],這與茶樹扦插生根難有著密不可分的關(guān)系[4-6]。張澤岑[7]對茶樹插穗葉片結(jié)構(gòu)特征觀察發(fā)現(xiàn),柵狀細(xì)胞的細(xì)長度、數(shù)目和厚度、柵狀組織葉綠體數(shù)目與茶樹扦插發(fā)根率呈正相關(guān)。
茶樹插穗不定根的發(fā)生及其發(fā)育過程的解剖學(xué)觀察對扦插生根機(jī)理研究有著重要的意義。植物扦插生根的關(guān)鍵是其原基的形成[8],不定根原基按其形成時(shí)間分為潛伏根原始體和誘導(dǎo)根原始體兩種。高秀梅[9]研究了插穗發(fā)根過程的內(nèi)部結(jié)構(gòu),插穗不定根起源于維管形成層,扦插苗側(cè)根起源于中柱鞘。梁月榮等[10]對茶樹插穗發(fā)根的解剖學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)茶樹屬于誘導(dǎo)生根型,不定根原體所處的位置與茶樹插穗枝條發(fā)育程度有關(guān),紅棕色枝的不定根原基起源于木栓形成層,綠色枝的不定根原基起源于中柱鞘內(nèi)側(cè)的韌皮薄壁細(xì)胞,但其起源是共同的。茶樹扦插時(shí)愈傷組織的形成和不定根的分化是兩個(gè)獨(dú)立的過程,但對茶樹扦插生根有著重要作用,一方面愈傷組織防止水分的散失和微生物的侵襲,促進(jìn)扦插生根;另一方面愈傷組織的形成及發(fā)育消耗枝條內(nèi)的生根物質(zhì),對不定根的產(chǎn)生存在較強(qiáng)的抑制作用[10-12]。
近年來,茶樹扦插生根的生理生化研究主要集中在與生根關(guān)系比較密切的幾種生理生化物質(zhì)(如植物激素、酶活性、營養(yǎng)物質(zhì)等)等方面。
2.1 植物激素與生根
植物激素是一類具有調(diào)控植物生長發(fā)育的生物活性物質(zhì),它不僅對植物的生理活動(dòng)起著重要的調(diào)節(jié)作用,同時(shí)還在植物扦插生根過程中起著關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用[13,14]。其中生長素類(auxins)、細(xì)胞分裂素(CTK)、脫落酸(ABA)和赤霉素類(GA)等在茶樹不定根形成中起著較為重要作用。姚永宏等[15]研究發(fā)現(xiàn)不同品種茶樹插穗生根過程中IAA、ABA、ZR 3種主要激素的變化趨勢基本一致,但其含量在扦插生根過程中均有一定差異,同時(shí)發(fā)現(xiàn)在生根過程中IAA、ZR 起促進(jìn)生根的作用,ABA起抑制生根的作用,不同生根率茶樹品種間IAA /ABA存在顯著差異。梁月榮等[10]研究發(fā)現(xiàn)在剪穗前2周用80 mg·kg-1的IBA噴灑黃葉早母樹,枝條在離開母樹時(shí)已形成“原發(fā)性”根原體。李永欣等[16]認(rèn)為插穗IAA、ZR、ABA、GA 4 種內(nèi)源激素的初始含量與生根率表現(xiàn)出不同的相關(guān)性,IAA、ZR的初始含量與生根率呈正相關(guān),而ABA、GA的初始含量與生根率呈負(fù)相關(guān),其中IAA與生根率關(guān)系最密切。
茶樹插穗不定根形成中生長素類(auxins)物質(zhì)起關(guān)鍵的作用。近年來,研究表明生長素的種類、濃度、處理時(shí)間對茶樹扦插苗生根的效應(yīng)是不同的。Rout[17]研究表明,IAA,NAA和IBA三種激素對茶樹插穗不定根的形成均有促進(jìn)作用,同時(shí)具有明顯的濃度效應(yīng)且IBA優(yōu)于其它兩種激素,濃度為75 mg·kg-1的IBA效果最佳;柴紅玲等[18]研究IAA,IBA,NAA 和ABT 1號生根粉4種外源激素對中茶108扦插育苗的影響發(fā)現(xiàn),在適宜的濃度下四種外源激素對中茶108扦插苗均有促進(jìn)生根作用,NAA對茶樹扦插生根率的提高極顯著優(yōu)于其他外源激素;王雪萍等[19]研究發(fā)現(xiàn)用50 mg·kg-1ABT1號生根粉溶液浸泡茶樹插穗0.5 h后扦插,生根率提高了36.67%,同時(shí)生根數(shù)多、根系發(fā)達(dá);周健等[20]比較了激素種類、濃度和浸蘸處理時(shí)間對于誘導(dǎo)茶樹組培苗在溫室內(nèi)生根的影響,篩選出最佳的生根誘導(dǎo)條件是采用100 mg·L-1的IBA進(jìn)行短時(shí)浸蘸處理,促進(jìn)發(fā)根,生根率可達(dá)60%,小苗的成活率也得到提高,而NAA和2,4-D 處理的茶苗成活率都很低;梁金波等[21]用2,4-D、NAA、速效生根靈3種生根激素對茶樹短穗12 h浸根處理發(fā)現(xiàn)3種生根劑均能促進(jìn)茶樹短穗生根,其中NAA效果最理想。Sharma等[22]在茶樹大田扦插中用500 mg·kg-1IBA處理插穗30 min,生根率達(dá)到71.6%,并顯著高于對照。
2.2 酶活性與生根
茶樹扦插生根過程中酶具有重要的作用,其中過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)是目前研究最多的,也是公認(rèn)的與扦插生根關(guān)系最為密切的3種酶類[23]。POD是一種活性較高的酶,參與植物體內(nèi)的各種生理過程以及木質(zhì)素的形成,與不定根的誘導(dǎo)和伸長生長密切相關(guān)[24],并在植物扦插生根過程中參與生長素的代謝,起著與IAAO 相同的作用,氧化消除體內(nèi)過多的IAA,同時(shí)還能促使插穗木質(zhì)化程度提高,抑制生根[25];PPO廣泛存在于植物體內(nèi),能夠催化IAA與酚類物質(zhì)形成 “IAA-酚酸復(fù)合物”,是不定根形成的輔助因子,對植物生根具有重要作用[26];IAAO具有降解IAA的作用,調(diào)節(jié)植物體內(nèi)IAA含量,IAAO的活性影響著根原始體的啟動(dòng)與不定根的形成,一般容易生根的植物體內(nèi)IAAO活性較低,難生根的植物體內(nèi)IAAO活性較高[27]。陳啟文等[28]研究表明茶樹插穗扦插后葉片中POD活性與扦插生根呈顯著負(fù)相關(guān),如皖茶91 的POD 活性最低,扦插成活率最高,石佛翠POD活性最高,扦插成活率卻最低;認(rèn)為茶樹扦插30 d內(nèi),PPO活性高低影響著扦插成活率,二者呈一定正相關(guān),因葉片中高含量的茶多酚有利于插穗成活;同時(shí)表明在插穗愈傷組織形成期,IAAO活性提高有利于愈傷生成,而在插穗生根過程中IAAO活性越低則易于發(fā)根。Rout[17]將茶樹扦插生根分為感應(yīng)、啟動(dòng)、表達(dá)3個(gè)階段,用75 mg·L-1的IBA處理茶樹插穗,結(jié)果表明,POD的活性顯著高于對照,同時(shí)在感應(yīng)、啟動(dòng)階段活性上升,表達(dá)階段下降,而對照則在3個(gè)階段均緩慢上升;PPO活性處理與對照均在感應(yīng)、啟動(dòng)階段上升,在表達(dá)階段緩慢下降,但PPO活性均顯著高于對照;IAAO活性均低于對照,變化趨勢相似,在感應(yīng)、啟動(dòng)階段活性下降,表達(dá)階段上升。
2.3 營養(yǎng)物質(zhì)與生根
營養(yǎng)物質(zhì)為插穗在生根過程中提供所需的基本物質(zhì)和能量,是插穗產(chǎn)生不定根的必要條件。Druege和Rapaka 等[29,30]研究發(fā)現(xiàn),插穗在生根過程中所消耗的營養(yǎng)物質(zhì)主要是碳水化合物和氮素化合物,它們不僅提供插穗生根和生長的營養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)也是插穗基部愈合和新根生長的能源物質(zhì);姚永宏等[31]對茶樹扦插生根過程中可溶性糖、總氮、茶多酚等生化成分的含量及比值進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn),不同生根率茶樹品種間糖/氮比值、糖/酚比值與其插穗生根率成正相關(guān);姜媛媛等[32]研究表明生根能力強(qiáng)的白毫早葉片中可溶性糖、C/N值在不定根生成期含量相對較高,而生根困難的舒茶早葉片中可溶性蛋白含量與C/N 值均較低,同時(shí)母葉中營養(yǎng)物質(zhì)的含量及其比值在不同的生根階段也發(fā)生著變化;梁月榮等[10]研究了插穗碳、氮化合物含量與發(fā)根性的關(guān)系,認(rèn)為母葉內(nèi)的淀粉、非蛋白氮含量和母莖內(nèi)的碳氮比高,以及母葉內(nèi)的蛋白氮含量低的品種, 一般都具有較強(qiáng)的發(fā)根能力。
現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展為茶樹扦插生根機(jī)理的研究提供了重要的技術(shù)手段和方法。雖然茶樹扦插分子生物學(xué)研究起步較晚,但近年來也取得一些重大進(jìn)展。趙麗萍等[33]構(gòu)建了茶樹幼根cDNA文庫并對其表達(dá)序列標(biāo)簽特性分析,獲得已知功能基因或具推測功能的EST 序列共1376個(gè),943個(gè)茶樹功能基因,421個(gè)EST為未知功能基因,1685個(gè)EST為新的表達(dá)基因;韋康等[34]運(yùn)用抑制性消減雜交技術(shù)(SSH)手段篩選分離出與IBA處理茶樹插穗相關(guān)的70個(gè)上調(diào)和7個(gè)下調(diào)特異表達(dá)基因序列,并對其中7個(gè)候選基因進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證,認(rèn)為IAA對這些候選基因的響應(yīng)效果弱于IBA;韋康等[35]基于數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)研究了溫濕度變化對秋插茶苗芽萌發(fā)基因表達(dá)的影響,比較保溫棚與對照芽的基因表達(dá)共篩選獲得949 個(gè)差異表達(dá)基因,其中503個(gè)基因受保溫棚處理誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),446個(gè)基因下調(diào)表達(dá),同時(shí)對差異表達(dá)基因進(jìn)行GO分類分析,認(rèn)為高溫高濕條件具有促進(jìn)光合相關(guān)基因表達(dá)的作用;韋康等[36]對用IBA處理與未用IBA處理的茶樹插穗進(jìn)行比較轉(zhuǎn)錄組分析,共篩選分離656個(gè)上調(diào)和435個(gè)下調(diào)差異基因表達(dá)序列,并通過RT-PCR對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步驗(yàn)證分析,結(jié)果表明,其中許多基因參與了植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、次生代謝、細(xì)胞壁組織形成。近年來在茶樹扦插相關(guān)基因的克隆方面也有一定的進(jìn)展,如茶樹生長素響應(yīng)因子基因CsARF1[37],茶樹赤霉素受體基因CsGID1a[38],茶樹生長素抑制蛋白基因CsARP1[39],茶樹多酚氧化酶基因[40]。
綜上所述,當(dāng)前對于茶樹扦插生根機(jī)理的解剖學(xué)、生理生化(植物激素、酶活性、營養(yǎng)物質(zhì)等)、分子生物學(xué)等方面作了一定的研究,基本明確茶樹扦插生根過程中不定根的發(fā)生、發(fā)育的形態(tài)解剖構(gòu)造,闡明了茶樹在扦插生根過程植物激素、相關(guān)酶活性以及營養(yǎng)物質(zhì)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,系統(tǒng)分析了茶樹扦插生根過程中差異基因,并對相關(guān)基因進(jìn)行克隆與表達(dá)。這些將為茶樹扦插技術(shù)發(fā)展提供理論參考,同時(shí)也為生產(chǎn)上加快茶樹扦插生根速率和提高其成活率提供技術(shù)支持。但對于茶樹不定根的發(fā)生與生長這一復(fù)雜過程,還有許多機(jī)理需要去探討研究,如茶樹扦插生根過程中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),無機(jī)養(yǎng)分、生根輔助因子與茶樹扦插生根的關(guān)系,生物技術(shù)在茶樹扦插生根方面的應(yīng)用,全面系統(tǒng)分析各因子之間的相互關(guān)系等。近年來,在一些模式植物中從分子生物學(xué)層面研究扦插過程中激素作用機(jī)理以及扦插過程中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究取得了可觀的進(jìn)展,這些能夠?yàn)檠芯坎铇淝げ逯兄参锛に刈饔脵C(jī)理以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制提供寶貴經(jīng)驗(yàn)和借鑒。同時(shí),隨著茶樹基因組計(jì)劃的實(shí)施,基因工程技術(shù)的日趨成熟和各種先進(jìn)科學(xué)技術(shù)的應(yīng)用,茶樹扦插生根機(jī)理研究將邁上一個(gè)嶄新的臺(tái)階。
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Progress on Study of Rooting Mechanism of Tea Cuttings
MA Lin-long,CAO Dan,GONG Zi-ming,JIN Xiao-fang*
(Fruit and Tea Research Institute,Hubei Academy of Agricultural Sciences,Wuhan,Hubei 430064,China )
Formation of adventitious roots is crucial for successful tea cutting. It can be affected by a variety of factors. To study the rooting mechanism can help understand, as well as improve, the complex process of tea cutting. This article reviews the reports published in China and abroad relating to the mechanism of the adventitious root formation with respect to the tea anatomy,physiology, biochemistry (i.e., plant hormones, enzymes and nutrients) and molecular biology. The comprehensive research will hasten the technological and agricultural advancements on the propagation and survival of tea cuttings in practice, as well as for theoretical reference.
tea cutting; rooting mechanism; anatomy; physiology and biochemistry; molecular biology
S339.4+4
A
2015-01-28 初稿;2015-03-15 修改稿
國家農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目;湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心項(xiàng)目(2011-620-005-003-04)。
馬林龍(1988-),男,碩士,研究實(shí)習(xí)員,主要從事茶樹種質(zhì)資源與遺傳育種研究,E-mail: myth1367101@126.com。
金孝芳(1982-),男,助理研究員,主要從事茶樹種質(zhì)資源與遺傳育種研究。