佟桂芝，宋 斌，黃 紅，丁昕穎

(黑龍江省畜牧研究所 161005)

純種和牛高效繁殖技術措施

佟桂芝，宋 斌，黃 紅，丁昕穎

(黑龍江省畜牧研究所 161005)

日本和牛是當今世界公認的優(yōu)秀肉牛品種之一。其肉大理石花紋明顯，由于其肉質細嫩多汁，肌肉脂肪中飽和脂肪酸含量很低，風味獨特，肉用價值極高，在日本被視為“國寶”，全球市場售價極其昂貴?？焖贁U繁純種和牛的繁育技術主要包括以下幾個方面。

1 同期發(fā)情與人工授精

人工授精技術自20世紀40年代問世以來，經過幾十年的不斷發(fā)展和完善，特別是精液冷凍保存技術的成熟，使人工授精技術成為肉牛育種中最重要的生物技術。該技術可以使優(yōu)秀的種公牛得到更好的利用，精液冷凍保存技術使得優(yōu)秀種公牛的使用范圍不再受時間和地區(qū)的限制。這就擴大了優(yōu)秀種公牛在肉牛遺傳改良中的作用。精液冷凍保存技術還減少了種公牛的飼養(yǎng)量，提高了公牛的選擇強度，加快了群體的遺傳進展，更經濟可靠地實現(xiàn)肉牛品種資源保護。

使和牛母牛在同一時期內發(fā)情并排卵的技術，稱為同期發(fā)情。同期發(fā)情實質是誘導母牛在同一時期發(fā)情排卵的方法。定時輸精，是在近年發(fā)展起來的一種能使多頭母牛在短時間內集中發(fā)情和集中進行人工授精的技術。采用同期發(fā)情技術，對提高母牛繁殖率和養(yǎng)牛生產經濟效益具有重要意義。采取同期發(fā)情技術，減少空懷時間，確保和牛母牛1年1產，既節(jié)省飼料成本，又增加產犢收入；同期發(fā)情、配種、產犢，有利于犢牛的飼養(yǎng)管理和出售，符合養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；?、集約化的發(fā)展趨勢；選擇配種時間，在最佳季節(jié)產犢，如避開寒冬、炎熱夏天以及枯草季節(jié)，既提高犢牛的成活率又能充分利用牧草資源，降低飼養(yǎng)成本；使不發(fā)情母牛發(fā)情配種，從而提高繁殖率；便于人工授精技術的推廣和普及，提高冷凍精液配種工作效率；容易操作，一般授精員經過培訓后都能夠掌握。因為操作簡單和成本低，同期發(fā)情和人工輸精是使用最廣泛的輔助生殖技術。

2 超數(shù)排卵與胚胎移植技術

牛是單胎動物，其繁殖力在很大程度上限制了生產力的發(fā)揮。隨著動物繁殖技術的發(fā)展，超數(shù)排卵從某種程度上解決了這一問題，即應用外源性促性腺激素誘發(fā)母牛卵巢發(fā)育并排出具有受精能力的卵子的方法，稱為超數(shù)排卵，簡稱“超排”。超數(shù)排卵是進行胚胎移植時，對供體母牛必須進行的程序，目的在于得到更多的胚胎。胚胎移植是對超數(shù)排卵處理的母牛(供體)，從其輸卵管或子宮內取出許多胚胎移植到另一群母牛(受體)的輸卵管或子宮內，以達到產生供體后代的目的。這是一種使少數(shù)優(yōu)秀供體母牛產生較多的具有優(yōu)良遺傳性狀的胚胎，使多數(shù)受體母牛妊娠、分娩而達到加快優(yōu)秀供體母牛品種繁殖的一種先進繁殖技術。主要包括下列環(huán)節(jié)：①選擇生殖機能正常、具有優(yōu)良遺傳特性的母牛作為供體，在發(fā)情周期的中后期，注射促性腺激素(有時需再注射前列腺素)，激發(fā)卵巢使之超數(shù)排卵。然后非手術方法(將專門的采卵管插入子宮)，用生理培養(yǎng)液將胚胎由子宮角沖出。②對采集的胚胎進行鑒定，選出正常者用于移植。也可以進行培養(yǎng)，或在零下196℃的液態(tài)氮中長期保存，待需要時再行移植。③在受體發(fā)情后的相應時間(一般和供體發(fā)情時間相差不能超過1天)，按上述采集胚胎的相同途徑，利用移植管將胚胎移植到受體子宮的一定部位內。為此，在供體發(fā)情時須選擇同時自然發(fā)情的母畜留作受體，或在對供體進行激素處理誘發(fā)超數(shù)排卵的同時，選擇若干適用的受體也注射激素，使之與供體同時發(fā)情，但不配種，留待移植之用。如使用冷凍保存的胚胎，應先選出受體母畜，待其自然發(fā)情后再根據胚胎的發(fā)育日齡進行移植。由于牛可以實現(xiàn)非手術采胚和移植，操作過程較易完成。通過MOET技術可以使優(yōu)秀的和牛母牛能獲得更多的后代。

3 幼畜超排、活體采卵、體外受精

幼畜超排是根據性成熟前幼畜(1～2月齡)卵巢對生殖激素敏感，卵泡發(fā)育很少發(fā)生閉鎖的特殊生理特點而發(fā)明的一項高效率生產卵母細胞的新技術。誘導幼畜超數(shù)排卵技術可以充分挖掘和利用優(yōu)良母畜的早期繁殖潛力，大大加快家畜育種及品種改良進程，同時也將解決種畜胚胎移植商業(yè)化所需胚胎來源匱乏及胚胎生產成本昂貴的問題，將大大促進胚胎生產的商業(yè)化應用，前景十分廣闊。但是，這種幼畜超排的卵，在體外受精后，發(fā)育到囊胚期的潛能比成年動物超排的卵發(fā)育潛能有所降低。

牛卵母細胞的活體采集技術是二十世紀90年代發(fā)展起來的一項新型獲得優(yōu)秀種母牛卵母細胞技術，是繼牛體外受精、胚胎移植技術之后研究并推出的一項胚胎工程技術。該技術與體外胚胎生產(IVP)技術相結合，可以反復地從性成熟前母犢牛體內采集卵母細胞，結合體外受精(IVF)技術生產大量系譜明確的胚胎，使其繁殖后代，克服了超數(shù)排卵和屠宰取卵技術應用中需要等待母牛成熟的缺點，從而大大縮短了世代間隔，加快了育種進程。這種技術始于二十世紀80年代初期，至90年代中期實現(xiàn)生產性應用。目前在一些發(fā)達國家，如日本、加拿大、美國、荷蘭均實現(xiàn)商業(yè)化生產。采用活體采卵(LOPU)-卵母細胞體外受精(IVF)-胚胎移植(ET)配套技術?；铙w采卵的方法主要有盲采法、內窺鏡法和B型超聲波導引法三種。

體外受精技術也稱胚胎的體外生產技術(IVP)，包括以下幾個步驟：卵母細胞采集、卵母細胞的體外成熟、精液預處理、體外受精、胚胎體外培養(yǎng)、和胚胎移植。迄今為止體外受精在各個主要技術環(huán)節(jié)上的效率還不高，因此總體技術水平尚未達到應用水平的要求。

4 胚胎分割

胚胎分割是通過對胚胎進行顯微操作，人工制造和牛的同卵雙生或同卵多生的技術，是擴大胚胎來源的一條重要途徑，其理論依據是早期胚胎的每一個卵裂球都具有獨立發(fā)育成個體的全能性。母牛懷雙胎是一公一母時，會發(fā)生母犢的異性孿生不孕。而移植通過胚胎的分割技術生產的雙半胚胎，來使母牛懷雙胎，就可以避免異性雙胎現(xiàn)象，從而避免出生的母犢先天性不孕，失去母牛的利用價值現(xiàn)象。

5 性別控制

為了達到人為控制和牛群性比例，人為對胚胎性別鑒定進行了技術研究。對肉牛進行性別控制的實用技術目前有兩種，一種是利用性控精液(分離的X、Y精子)通過人工授精生產體內胚胎或通過體外受精生產體外胚胎；另一種是通過控制母牛的生殖道環(huán)境來控制胚胎的性別。而早期對胚胎進行性鑒別方法有兩種，即通過PCR法或LAMP法對體內外生產胚胎進行性鑒別，然后根據需要選擇移植方案，生產已知性別胚胎。

在肉牛良種擴繁方面，人工授精、胚胎移植等生物技術仍然發(fā)揮著重要作用；同期發(fā)情及定時輸精經技術在規(guī)模化牛場的應用加快了純種擴繁的步伐；胚胎分割、一胎雙犢研究，犢牛超排、犢牛的性別控制給和牛的純種擴繁提供無數(shù)的可能，希望在不遠的將來，該項技術達到應用推廣階段。