李永濤，王川慶

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所，鄭州 450001；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，武漢 430070)

流感病毒逃避宿主天然免疫抗病毒應(yīng)答研究進展

李永濤1，2，王川慶1*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所，鄭州 450001；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，武漢 430070)

流感病毒是一種重要的呼吸道疾病病原，在人群中每年都會造成地方性流行，因其抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行。流感病毒也可在多種動物群體持續(xù)傳播，偶爾可經(jīng)動物感染人類并在人群中傳播和適應(yīng)，一定條件下給人類健康造成潛在的威脅。天然免疫應(yīng)答，特別是干擾素應(yīng)答是機體早期抵御病毒感染的關(guān)鍵屏障；病毒突破這道屏障，才能成功感染宿主。為對抗病毒感染，宿主細胞利用一系列精密的抗病毒策略：利用模式識別受體識別病毒表達的產(chǎn)物，激活一系列信號級聯(lián)反應(yīng)，并導(dǎo)致干擾素等細胞因子的產(chǎn)生；干擾素誘導(dǎo)下游效應(yīng)分子的表達，進而抑制病毒復(fù)制，并輔助機體引發(fā)特異性免疫。在與宿主共進化過程中，流感病毒也形成一套完善的拮抗宿主干擾素通路的策略，使病毒能有效地在宿主細胞中感染和傳播。最近幾年，關(guān)于病毒誘導(dǎo)和調(diào)控宿主天然免疫應(yīng)答的研究取得突飛猛進的發(fā)展，特別是大量研究發(fā)現(xiàn)病毒可以利用各種策略逃避宿主的抗病毒應(yīng)答。因此，本綜述主要介紹流感病毒如何拮抗宿主的干擾素產(chǎn)生而逃避細胞抗病毒應(yīng)答，有助于揭示流感病毒的致病機制和發(fā)現(xiàn)新的抗病毒靶標，從而為防控流感病毒感染奠定基礎(chǔ)。

流感病毒；天然免疫；干擾素；免疫逃避

流感病毒是分節(jié)段的單股負鏈RNA病毒，屬于正黏病毒科，包含8個片段，至少編碼11種蛋白質(zhì)。流感病毒內(nèi)部核心由核蛋白NP和基質(zhì)蛋白M組成，根據(jù)它們抗原性的差異，可分為A、B、C三種類型。其中，A型流感病毒(influenza A virus，IAV)是最重要的病原體，它在人群和動物中呈季節(jié)性流行，很大程度上威脅著人類和動物健康。根據(jù)囊膜表面蛋白血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的抗體反應(yīng)，IAV可再分為16種 HA亞型(H1～H16)和9種NA亞型(N1～N9)，而這些均可從天然宿主水禽體內(nèi)分離出來[1]。在自然界，IAV宿主眾多、分布廣泛，給IAV的進化研究與監(jiān)控帶來了很大困難。IAV與其他病原體最大的區(qū)別是具有宿主泛嗜性，它幾乎可以感染所有家禽、水禽、野禽、水生哺乳動物、馬、牛、狗、豬及人等[2]。在與宿主共進化的過程中，IAV 獲得多種策略來逃避宿主的免疫反應(yīng)，從而在宿主群體中持續(xù)感染，并不時造成流行或大流行，不僅給畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失，而且對人類健康構(gòu)成嚴重威脅[3]。IAV 對宿主致病性的強弱在很大程度上與其逃避宿主抗病毒免疫應(yīng)答能力的強弱有關(guān)，因此，深入理解 IAV 如何逃避宿主抗病毒天然免疫應(yīng)答的策略，不僅有助于揭示 IAV 的致病機制，而且更有利于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標，從而為 IAV 防控奠定基礎(chǔ)。

1 IAV激活干擾素應(yīng)答

病原微生物感染宿主后，宿主細胞通過體內(nèi)廣泛表達的模式識別受體(pattern recognition receptor，PRR)監(jiān)測病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular pattern，PAMP)的存在，PRR被激活后通過招募下游接頭蛋白，觸發(fā)一系列磷酸化或泛素化介導(dǎo)的信號級聯(lián)反應(yīng)，最終活化轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(nuclear factor κB)和干擾素調(diào)節(jié)因子(interferon regulatory factor，IRF)，誘導(dǎo)干擾素(interferon，IFN)和促炎性細胞因子的表達[4]。

干擾素是一類低相對分子質(zhì)量、具有多種生物學(xué)活性的細胞因子。根據(jù)來源、序列和生物學(xué)功能等方面來劃分，干擾素分為三大家族，分別是Ⅰ型干擾素(主要包括人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的IFN-α、IFN-β、IFN-ω和IFN-κ，以及在反芻動物中發(fā)現(xiàn)的IFN-τ和小鼠中IFN-ζ等亞家族)、Ⅱ型干擾素(即IFN-γ)以及后來發(fā)現(xiàn)的Ⅲ型干擾素(包括IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3)[5]。目前，在動物疾病防控中，干擾素得到廣泛應(yīng)用。比如，大量的體內(nèi)和體外試驗表明，豬Ⅰ型干擾素對威脅養(yǎng)豬業(yè)的許多病毒性傳染病均具有很好的抑制作用。有人用IFN-α處理豬的細胞，然后感染各種豬的病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了豬細小病毒和輪狀病毒外，其他病毒的復(fù)制都不同程度受到影響，尤其是對水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)和豬流感病毒(swine influenza virus，SIV)等RNA病毒抗病毒效果非常明顯。同樣，也有很多文獻報道了豬的IFN-β抗病毒譜，除了豬輪狀病毒，幾乎所有病毒對IFN-β都比較敏感[6-7]。

干擾素產(chǎn)生以后，并不直接發(fā)揮抗病毒作用，而是結(jié)合在鄰近細胞的相應(yīng)受體——干擾素受體上，并通過下游的JAK-STAT通路激活多種效應(yīng)分子的表達，如干擾素誘導(dǎo)基因(IFN-induced genes，ISGs)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的表達，從而發(fā)揮抗病毒作用。JAK-STAT通路最早是在研究Ⅰ型干擾素信號通路中被發(fā)現(xiàn)的，其激活一個三聚體轉(zhuǎn)錄因子，是由SH2-磷酸酪氨酸介導(dǎo)的異源二聚體STAT1和STAT2，以及結(jié)合的干擾素調(diào)節(jié)因子9(inteferon regulatory factor 9，IRF9)組成。這樣一個三聚體復(fù)合物，經(jīng)活化后進入細胞核與ISGs的啟動子元件(IFN-stimulated response element，ISRE)結(jié)合，共同組成ISGF3(IFN-stimulated gene factor-3 transcription factor complex 3)激活Ⅰ型和Ⅲ型干擾素誘導(dǎo)的下游基因的轉(zhuǎn)錄和表達[8]。

2 IAV逃避干擾素應(yīng)答

盡管干擾素系統(tǒng)具有強大的抗病毒活性，但是也并不能完全控制IAV的感染。在進化過程中，包括IAV在內(nèi)的很多病毒已經(jīng)形成一套完善的拮抗干擾素通路的策略，使得病毒能夠有效地在宿主細胞中感染和傳播。有趣的是，IAV可以表達多種蛋白質(zhì)、利用不同途徑拮抗或逃避干擾素介導(dǎo)的抗病毒應(yīng)答。

2.1 NS1蛋白

作為非結(jié)構(gòu)蛋白，NS1蛋白是IAV表達的最重要也是研究最多的干擾素拮抗蛋白，它可以作用于多個靶點、通過多種方式阻止宿主的干擾素應(yīng)答。NS1蛋白在宿主細胞質(zhì)和細胞核高度表達，并與細胞質(zhì)或細胞核的多種參與干擾素通路的蛋白質(zhì)相互作用，抑制干擾素產(chǎn)生[9]。首先，NS1蛋白利用其氨基端73個氨基酸組成的RNA結(jié)合區(qū)(RNA binding domain)與病毒的雙鏈RNA(dsRNA)結(jié)合，競爭性的抑制dsRNA介導(dǎo)的RLRs(RIG-I-like receptors)、PKR(Protein kinase R)以及OAS(2′-5′oligoadenylate synthetase)的激活?；罨腞LRs、PKR以及OAS對細胞抵抗病毒感染起著非常重要的作用。由于OAS與dsRNA親和力最低，所以NS1與dsRNA的結(jié)合大大降低OAS的激活[10]。有趣的是，NS1還能與PKR互作以及通過結(jié)合并降低TRIM25活性，有效地抑制PKR和RIG-I的激活以及下游干擾素的產(chǎn)生[11]。當(dāng)人為突變流感病毒NS1蛋白的第92位氨基酸(天冬氨酸)，NS1蛋白則喪失了抑制RIG-I泛素化激活的能力，說明該位點在NS1蛋白調(diào)控干擾素通路中至關(guān)重要[12]。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)在鴨的細胞，流感病毒NS1蛋白可以抑制MDA5(melanoma differentiation-associated gene 5)介導(dǎo)的細胞抗病毒免疫應(yīng)答，但是具體機制還有待于進一步研究[13]。

前面提到，當(dāng)細胞被病毒感染時，病毒dsRNA作為激活劑活化PKR，進而誘導(dǎo)抗病毒細胞因子的產(chǎn)生。后來科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一個新的可與PKR互作并激活PKR的蛋白質(zhì)，命名為PACT(PKR-activating protein)[14]。進一步研究發(fā)現(xiàn)PACT還可以通過與RIG-I互作激活RIG-I介導(dǎo)的抗病毒信號通路，證明了PACT在病毒激活干擾素信號通路中必不可少[15]。但是，最近研究發(fā)現(xiàn)，流感病毒可以通過其NS1蛋白與PACT發(fā)生相互作用，干擾PACT與RIG-I以及PKR的互作，最終破壞了二者介導(dǎo)的細胞抗病毒應(yīng)答[16]。

其次，NS1還可以通過抑制細胞核內(nèi)宿主mRNA的加工，進而抑制宿主基因(包括抗病毒基因)表達。其抑制功能主要通過與宿主因子CPSF30(30kDa subunit of the cleavage and polyadenylation factor)的互作以及抑制宿主細胞mRNA由細胞核向細胞質(zhì)轉(zhuǎn)運來實現(xiàn)[17]。一般來講，NS1不但抑制宿主的干擾素表達，還抑制ISGs的表達?，F(xiàn)在已經(jīng)知道了NS1結(jié)合dsRNA和CPSF30的結(jié)構(gòu)，通過人為突變這些結(jié)合位點，構(gòu)建出的重配病毒則喪失拮抗干擾素應(yīng)答的能力。然而，在IAV毒株中，NS1對CPSF30 抑制效應(yīng)并不是保守的，很多病毒沒有結(jié)合CPSF30的能力，如2009年新出現(xiàn)的H1N1大流行病毒(2009/H1N1)。即便如此，2009/H1N1病毒仍能成功感染人并在人群中傳播。需要注意的是，將2009/H1N1病毒人為突變使其獲得與CPSF30結(jié)合的能力，并不能增強其在小鼠上的復(fù)制和致病力[18]。因此，在其他IAV毒株上肯定還存在其他的機制彌補NS1功能的缺乏。

此外，早期有人發(fā)現(xiàn)NS1蛋白可以通過抑制NF-κB活性降低IFN-α和IFN-β的產(chǎn)生，但是具體機制不太清楚[19]。后來，有報道顯示NS1蛋白通過與NF-κB通路中重要激酶IKKα和IKKβ存在相互作用進而阻止這些激酶的磷酸化，最終破壞NF-κB復(fù)合物的入核和下游基因的表達，包括干擾素的產(chǎn)生[20-21]。IAV不但可以在RLRs介導(dǎo)的信號通路中抑制干擾素產(chǎn)生，而且還可以通過JAK-STAT通路阻止干擾素介導(dǎo)的下游信號通路，減弱干擾素誘導(dǎo)的下游效應(yīng)分子的抗病毒作用。具體說來，NS1主要通過降低STAT1、STAT2和STAT3磷酸化水平進而抑制STAT2進入細胞核以及與ISGs啟動子區(qū)DNA序列的結(jié)合，從而抑制了ISGs和干擾素的表達[22]。

最近，研究者發(fā)現(xiàn)人類機體細胞產(chǎn)生的名為DDX21(DEAD box helicase 21)的蛋白質(zhì)可以有效阻斷流感病毒的復(fù)制過程，但是流感病毒產(chǎn)生的NS1蛋白可以反過來阻斷蛋白質(zhì)DDX21的功能并且促進病毒復(fù)制。流感病毒正是利用了NS1蛋白來作為逃避機體天然防御機制的盾牌[23]。

除了可以拮抗干擾素以及下游通路，NS1還參與了病毒感染的其他過程，這也反映出NS1多功能的特點。在病毒感染的不同階段，NS1蛋白如何協(xié)調(diào)諸多功能仍然不清楚，未來這也將是一個有趣的研究方向。

2.2 PB1-F2蛋白

一些IAV毒株的PB1基因具有第二個開放閱讀框，可以編碼由80個氨基酸組成的多肽，即PB1-F2蛋白。PB1-F2也是IAV一個重要的毒力因子，具有獨特的多態(tài)性。比如1918年大流行IAV，其PB1-F2的66位氨基酸由天冬酰胺變成絲氨酸，與其毒力增強密切相關(guān)[24]。當(dāng)PB1-F2的66位氨基酸由N變成S后，病毒拮抗干擾素的能力顯著上升，這也是66位突變后病毒毒力增強的一個原因[25]。后來發(fā)現(xiàn)，PB1-F2有一個線粒體定位信號，通過與線粒體上干擾素通路重要的接頭蛋白——線粒體抗病毒信號蛋白(MAVS，也稱IPS-1、VISA或Cardif)互作以及降低線粒體膜電勢來拮抗RLRs介導(dǎo)的干擾素信號通路[26-27]。有趣的是，也有報道PB1-F2可以抑制宿主的炎癥應(yīng)答，降低NF-κB通路介導(dǎo)的細胞因子(如IL-1β、IL-6和IL-8)的產(chǎn)生[28]。最近，有人進一步證實PB1-F2與IKKβ相互作用，通過未知的機制阻止激活的NF-κB進入細胞核后與相應(yīng)啟動子的結(jié)合，最終降低炎癥相關(guān)細胞因子的產(chǎn)生[29]。

2.3 PB2蛋白

PB1-F2并不是唯一可以定位在線粒體的IAV蛋白質(zhì)。病毒的聚合酶復(fù)合物中另一成員PB2蛋白，也可以定位到線粒體；不過在病毒開始復(fù)制時，PB2主要在細胞核存在。通過系統(tǒng)生物學(xué)分析病毒蛋白質(zhì)與宿主蛋白質(zhì)的相互作用，已經(jīng)揭示了病毒的PB2蛋白也具有干擾素拮抗功能[30]。進一步的研究顯示，與PB1-F2作用機制相似，PB2也是通過與MAVS相互作用進而逃避宿主的干擾素抗病毒應(yīng)答[31]。同樣有趣的是，一些具備特殊PB2蛋白的病毒的聚合酶活性非常高，復(fù)制速度很快，因此可以間接逃避宿主的干擾素應(yīng)答[32]。最近，本實驗室趙宗正等[33]發(fā)現(xiàn)PB2蛋白第588位氨基酸由T突變?yōu)镮可以增強2009/H1N1 IAV拮抗宿主干擾素應(yīng)答的能力，進而導(dǎo)致病毒毒力的顯著增強。

2.4 病毒編碼的其他蛋白質(zhì)

流感病毒的NS1、PB1-F2和PB2蛋白并不是僅有的可以拮抗宿主干擾素應(yīng)答的蛋白質(zhì)。最近，S.Liedmann等通過比較兩株對干擾素誘導(dǎo)能力不同的流感病毒的基因差異，發(fā)現(xiàn)流感病毒編碼的聚合酶蛋白PB1和PA也能夠參與調(diào)節(jié)宿主的干擾素產(chǎn)生水平，暗示PB1和PA可能也是潛在的干擾素拮抗蛋白[34]。

IAV的M2蛋白是一個小分子離子通道跨膜蛋白，在病毒膜融合過程中參與病毒核糖核蛋白的有效脫殼。最近，有人發(fā)現(xiàn)，M2蛋白可以干擾宿主的自噬過程[35]。病毒感染過程中，Toll樣受體(TLRs)的激活離不開細胞自噬，提示M2蛋白可能利用這個機制抑制TLRs通路的激活和干擾素的產(chǎn)生。但是，這也需要進一步的證實。

我們知道，除了編碼公認的11個蛋白質(zhì)，流感病毒還可以編碼PA-X、PA-N155、PA-N182和N40等其他幾個非結(jié)構(gòu)蛋白[36]。雖然這些蛋白質(zhì)只是在流感病毒復(fù)制過程中短暫出現(xiàn)，但是它們是否如NS1蛋白一樣，也參與病毒逃避宿主的天然免疫抗病毒應(yīng)答，仍需要進一步探索。

2.5 利用宿主因子

從已有的文獻資料看，多數(shù)研究聚焦病毒編碼的蛋白質(zhì)如何拮抗宿主的天然免疫應(yīng)答，很少涉及到病毒利用宿主因子逃避細胞抗病毒應(yīng)答，因此這方面的研究進展是很緩慢的。事實上，除了利用病毒自身合成的蛋白質(zhì)直接拮抗干擾素，病毒還巧妙地利用特異性的細胞負調(diào)控因子來降低干擾素的抗病毒效果[22，37]。比如，IAV感染導(dǎo)致SOCS(suppressors-of-cytokine-signaling)蛋白上調(diào)表達，SOCS蛋白主要參與拮抗干擾素信號通路。此外，IAV還可以誘導(dǎo)細胞PKR抑制蛋白P58(IPK)的表達，間接抑制PKR激活。這個過程需要病毒誘導(dǎo)的P58蛋白從HSP40解離。最近，K.Sharma 等[38]發(fā)現(xiàn)，病毒NP蛋白也參與P58解離，因此，可以說NP和NS1蛋白共同抑制PKR激活。LGP2(laboratory of genetics and physiology 2)也是IAV利用宿主拮抗分子抑制干擾素產(chǎn)生的一個手段。LGP2與RIG-I同屬于RLRs家族蛋白，二者在IAV引起干擾素生成后都能上調(diào)表達，但是它們的功能截然相反。RIG-I是結(jié)合病毒RNA誘導(dǎo)干擾產(chǎn)生的主要的模式識別受體，在細胞抗病毒免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用；相反，LGP2卻是一個拮抗干擾素產(chǎn)生的負調(diào)控分子，因為其缺乏結(jié)合病毒RNA的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，而只有一個抑制結(jié)構(gòu)域，所以在病毒感染過程中抑制了干擾素的產(chǎn)生[39]。有些IAV毒株在感染過程中誘導(dǎo)LGP2上調(diào)表達，間接輔助病毒逃逸細胞免疫應(yīng)答。

在 IAV等包膜病毒的病毒顆粒中，除包含病毒編碼的結(jié)構(gòu)蛋白外，還包含來源于宿主細胞的多種蛋白質(zhì)。2008年，M.L.Shaw等[40]首次通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法對在Vero細胞中增殖的流感病毒進行分析，發(fā)現(xiàn)成熟的病毒顆粒結(jié)合有36種宿主蛋白質(zhì)。目前，對這些宿主蛋白在IAV逃逸細胞抗病毒免疫應(yīng)答過程中所起作用的研究還很有限。最近，F(xiàn).Berri等[41]發(fā)現(xiàn)IAV包裝的宿主膜連蛋白Annexin V可以抑制IFN-γ介導(dǎo)的抗病毒應(yīng)答信號。同時，我們和其他研究者均發(fā)現(xiàn)IAV包裝的另外一個宿主蛋白質(zhì)——熱休克蛋白27(HSP27)可以被病毒誘導(dǎo)表達以拮抗宿主的干擾素應(yīng)答，從而逃避機體抗病毒免疫反應(yīng)[42]。我們發(fā)現(xiàn)，流感病毒誘導(dǎo)的HSP27主要通過靶向干擾素信號通路中的TRAF3和TRAF6蛋白，導(dǎo)致二者發(fā)生泛素化降解，從而阻斷干擾素的產(chǎn)生[43]。未來需要系統(tǒng)性篩選還有哪些病毒包裝的宿主蛋白質(zhì)可以幫助病毒逃逸宿主的免疫應(yīng)答，以及揭示這些宿主蛋白質(zhì)通過哪些方式或機制拮抗宿主抗病毒天然免疫應(yīng)答。

2.6 利用宿主蛋白修飾系統(tǒng)

S．Pal等[44]曾經(jīng)開創(chuàng)性地探索IAV與宿主小泛素相關(guān)修飾物(small ubiquitin-related modifier，SUMO)之間的聯(lián)系，首次報道并發(fā)現(xiàn)IAV 的NS1蛋白是該病毒已知的第一個SUMO化修飾的靶蛋白，NS1蛋白的SUMO化修飾豐度非常高。接著，他們又發(fā)現(xiàn)NS1蛋白不但受SUMO1化修飾，而且還受SUMO2/3修飾，并且發(fā)現(xiàn)NS1蛋白219位和70位氨基酸是關(guān)鍵修飾位點。通過拯救不能被SUMO修飾的突變病毒發(fā)現(xiàn)，突變病毒的增殖顯著下降，抑制干擾素信號通路的能力也大大降低，提示NS1蛋白可能利用宿主蛋白SUMO修飾系統(tǒng)獲得最大的逃避機體抗病毒應(yīng)答的能力[45]。最近，中科院上海巴斯德研究所分子病毒課題組發(fā)現(xiàn)流感病毒核蛋白NP同樣利用人細胞的SUMO修飾系統(tǒng)將自身進行翻譯后修飾，同時還找到了調(diào)控NP蛋白SUMO化的特異性E3泛素化酶PIASxa，這對深入揭示流感病毒的致病性和抗病毒治療具有重要意義[46]。

3 干擾素系統(tǒng)對IAV的宿主嗜性和致病性的影響

盡管IAV可以利用不同蛋白質(zhì)在多個層次拮抗細胞干擾素應(yīng)答，但是干擾素仍然是防治急性流感感染的關(guān)鍵策略。有人利用小鼠模型發(fā)現(xiàn)當(dāng)敲除干擾素基因時，IAV的復(fù)制能力和對小鼠的致病力大大提高；而當(dāng)干擾素存在時，則能很好的保護小鼠存活[47]。因此，IAV 對宿主致病性的強弱在很大程度上與其逃避宿主抗病毒免疫應(yīng)答能力的高低有關(guān)。IAV拮抗干擾素的產(chǎn)生都會涉及到與宿主蛋白質(zhì)的相互作用，這種互作很大程度上決定了病毒的宿主嗜性，因為一些毒株在特異性宿主已經(jīng)適應(yīng)以便于抑制干擾素通路相關(guān)的宿主因子。大量研究表明，病毒NS1拮抗干擾素的特征是病毒復(fù)制和持續(xù)感染的前提[48]。并且，NS1不但影響天然免疫，還影響后續(xù)的獲得性免疫?；诜墙Y(jié)構(gòu)蛋白NS1作為IAV最重要的毒力因子，這就可以將NS1基因進行人工突變獲得重配的弱毒株，使之成為有效的候選疫苗[49]。另外，通過靶向抑制NS1蛋白的功能這一策略，可以篩選小分子抗IAV化合物。最近有人鑒定出一個小分子化合物可以阻止NS1蛋白對細胞基因表達的拮抗能力，并且有效抑制IAV的復(fù)制[50]。今后的研究重點可能需要發(fā)掘更多的能夠幫助病毒逃逸細胞抗病毒應(yīng)答的宿主因子，并構(gòu)建一系列相應(yīng)宿主因子基因過表達細胞系，以期發(fā)現(xiàn)更好的細胞株供病毒增殖和疫苗生產(chǎn)。通過以上這些途徑能否開發(fā)出新的疫苗平臺和抗病毒藥物，以便用于IAV的預(yù)防和治療，仍需要后續(xù)的研究來確定。因此，深入理解 IAV 如何逃避宿主抗病毒天然免疫應(yīng)答的策略，不僅有助于揭示 IAV 的致病機制，而且有助于發(fā)現(xiàn)新的抗病毒藥物靶標，從而為 IAV 的防控奠定基礎(chǔ)。

[1] GAMBLIN S J，SKEHEL J J.Influenza hemagglutinin and neuraminidase membrane glycoproteins[J].JBiolChem，2010，285(37)：28403-28409.

[2] 王革非，李康生.新世紀流感大流行的思考 [J].生物化學(xué)與生物物理進展，2009，36(8)：945-949. WANG G F，LI K S.Origins and views of the 2009 A/H1N1 influenza pandemic [J].ProcessinBiochemistryandBiophysics，2009，36(8):945-949.(in Chinese)

[3] 趙 樸，鄭玉姝，喬傳玲，等.IAV逃避免疫應(yīng)答的策略[C]∥.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病學(xué)術(shù)研討會，2010. ZHAO P，ZHENG Y S，QIAO C L，et al.The strategy to evade immune response of IAV [C]//The fourth Symposium for swine diseases in the branch of animal infectious diseases.Chinese association of animal science and veterinary medicine，2010.(in Chinese)

[4] 張 煜，鐘 波，楊 艷，等.TLRs與RLRs介導(dǎo)的細胞抗病毒反應(yīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機制 [J].細胞生物學(xué)雜志，2009，31(4)：453-468. ZHANG Y，ZHONG B，YANG Y，et al.Mechanisms and regulations of TLRs- and RLRs-mediated cellular antiviral signaling [J].ChineseJournalofCellBiology，2009，31(4)：453-468.(in Chinese)

[5] 陳 輝，袁正宏.病毒拮抗干擾素的作用[J].微生物與感染，2007，2(2)：107-110. CHEN H，YUAN Z H.Virus antagonizes interferon[J].JournalofMicrobesandInfection，2007，2(2)：107-110.(in Chinese)

[6] AMADORI M，BUGNETTI M，TIRONI D.Induction and characterization of swine β interferon [J].CompImmunolMicrobiolInfectDis，1987，10(1):71-78.

[7] DIAS C C，MORAES M P，SEGUNDO F D，et al.Porcine type I interferon rapidly protects swine against challenge with multiple serotypes of foot-and-mouth disease virus [J].JInterferonCytokineRes，2011，31(2):227-236.

[8] DARNELL J E Jr，KERR I M，STARK G R.JAK-STAT pathways and transcriptional activation in response to IFNs and other extracellular signaling proteins [J].Science，1994，264(5164):1415-1421.

[9] HALE B G，ALBRECHT R A，GARCA-SASTRE A.Innate immune evasion strategies of influenza viruses [J].FutureMicrobiol，2010，5(1):23-41.

[10] MIN J Y，KRUG R M.The primary function of RNA binding by the influenza A virus NS1 protein in infected cells：inhibiting the 2′-5′oligo (A) synthetase/RNase L pathway [J].ProcNatlAcadSciUSA，2006，103(18):7100-7105.

[11] GACK M U，ALBRECHT R A，URANO T，et al.Influenza A virus NS1 targets the ubiquitin ligase TRIM25 to evade recognition by the host viral RNA sensor RIG-I [J].CellHostMicrobe，2009，5(5):439-449.

[12] WEI L，CUI J，SONG Y，et al.Duck MDA5 functions in innate immunity against H5N1 highly pathogenic avian influenza virus infections [J/OL].VetRes，2014，45：66.[2015-2-11].http://www.veterinaryresearch.org/content/45/1/66.

[13] WU N C，YOUNG A P，AL-MAWSAWI L Q，et al.High-throughput identification of loss-of-function mutations for anti-interferon activity in the influenza A virus NS segment[J].JVirol，2014，88(17):10157-10164.

[14] PATEL R C，SEN G C.PACT，a protein activator of the interferon-induced protein kinase，PKR[J].EMBOJ，1998，17(15):4379-4390.

[15] KOK K H，LUI P Y，NG M H，et al.The double-stranded RNA-binding protein PACT functions as a cellular activator of RIG-I to facilitate innate antiviral response [J].CellHostMicrobe，2011，9(4):299-309.

[16] TAWARATSUMIDA K，PHAN V，HRINCIUS E R，et al.Quantitative proteomic analysis of the influenza A virus nonstructural proteins NS1 and NS2 during natural cell infection identifies PACT as an NS1 target protein and antiviral host factor[J].JVirol，2014，88(16):9038-9048.

[17] DAS K，MA L C，XIAO R，et al.Structural basis for suppression of a host antiviral response by influenza A virus [J].ProcNatlAcadSciUSA，2008，105(35):13093-13098.

[18] HALE B G，STEEL J，MEDINA R A，et al.Inefficient control of host gene expression by the 2009 pandemic H1N1 influenza A virus NS1 protein [J].JVirol，2010，84(14):6909-6922.

[19] WANG X，LI M，ZHENG H，et al.Influenza A virus NS1 protein prevents activation of NF-κB and induction of alpha/beta interferon [J].JVirol，2000，74(24):11566-11573.

[20] RüCKLE A，HAASBACH E，JULKUNEN I，et al.The NS1 protein of influenza A virus blocks RIG-I-mediated activation of the noncanonical NF-κB pathway and p52/RelB-dependent gene expression in lung epithelial cells [J].JVirol，2012，86(18):10211-10217.

[21] GAO S，SONG L，LI J，et al.Influenza A virus-encoded NS1 virulence factor protein inhibits innate immune response by targeting IKK [J].CellMicrobiol，2012，14(12):1849-1866.

[22] JIA D，RAHBAR R，CHAN R W，et al.Influenza virus non-structural protein 1 (NS1) disrupts interferon signaling [J].PLoSOne，2010，5(11):e13927.

[23] CHEN G，LIU C H，ZHOU L，et al.Cellular DDX21 RNA helicase inhibits influenza A virus replication but is counteracted by the viral NS1 protein[J].CellHostMicrobe，2014，15(4):484-493.

[24] SCHMOLKE M，GARCA-SASTRE A.Evasion of innate and adaptive immune responses by influenza A virus [J].CellMicrobiol，2010，12(7):873-880.

[25] CONENELLO G M，TISONCIK J R，ROSENZWEIG E，et al.A single N66S mutation in the PB1-F2 protein of influenza A virus increases virulence by inhibiting the early interferon responseinvivo[J].JVirol，2011，85(2):652-662.

[26] DUDEK S E，WIXLER L，NORDHOFF C，et al.The influenza virus PB1-F2 protein has interferon antagonistic activity [J].BiolChem，2011，392(12):1135-1144.

[27] VARGA Z T，RAMOS I，HAI R，et al.The influenza virus protein PB1-F2 inhibits the induction of type I interferon at the level of the MAVS adaptor protein [J].PLoSPathog，2011，7(6):e1002067.

[28] REIS A L，MCCAULEY J W.The Influenza virus protein PB1-F2 interacts with IKKβ and modulates NF-κB signalling [J].PLoSOne，2013，8(5):e63852.

[29] GRAEF K M，VREEDE F T，LAU Y F，et al.The PB2 subunit of the influenza virus RNA polymerase affects virulence by interacting with the mitochondrial antiviral signaling protein and inhibiting expression of beta interferon [J].JVirol，2010，84(17):8433-8445.

[30] IWAI A，SHIOZAKI T，KAWAI T，et al.Influenza A virus polymerase inhibits type I interferon induction by binding to interferon beta promoter stimulator 1 [J].JBiolChem，2010，285(42):32064-32074.

[31] GRIMM D，STAEHELI P，HUFBAUER M，et al.Replication fitness determines high virulence of influenza A virus in mice carrying functional Mx1 resistance gene [J].ProcNatlAcadSciUSA，2007，104(16):6806-6811.

[32] MEUNIER I，VON MESSLING V.PB1-F2 modulates early host responses but does not affect the pathogenesis of H1N1 seasonal influenza virus [J].JVirol，2012，86(8):4271-4278.

[33] ZHAO Z，YI C，ZHAO L，et al.PB2-588I enhances 2009 H1N1 pandemic influenza virus virulence by increasing viral replication and exacerbating PB2 inhibition of beta interferon expression [J].JVirol，2014，88(4):2260-2267.

[34] LIEDMANN S，HRINCIUS E R，ANHLAN D，et al.New virulence determinants contribute to the enhanced immune response and reduced virulence of an influenza A virus A/PR8/34 variant[J].JInfectDis，2014，209(4):532-541.

[35] GANNAGé M，DORMANN D，ALBRECHT R，et al.Matrix protein 2 of influenza A virus blocks autophagosome fusion with lysosomes [J].CellHostMicrobe，2009，6(4):367-380.

[36] MARC D.Influenza virus non-structural protein NS1：interferon antagonism and beyond [J].JGenVirol，2014，95(Pt12):2594-2611.

[37] PAULI E K，SCHMOLKE M，WOLFF T，et al.Influenza A virus inhibits type I IFN signaling via NF-κB-dependent induction of SOCS-3 expression [J].PLoSPathog，2008，4(11):e1000196.

[38] SHARMA K，TRIPATHI S，RANJAN P，et al.Influenza A virus nucleoprotein exploits Hsp40 to inhibit PKR activation [J].PLoSOne，2011，6(6):e20215.

[39] MALUR M，GALE M JR，KRUG R M.LGP2 downregulates interferon production during infection with seasonal human influenza A viruses that activate interferon regulatory factor 3 [J].JVirol，2012，86(19):10733-10738.

[40] SHAW M L，STONE K L，COLANGELO C M，et al.Cellular proteins in influenza virus particles[J].PLoSPathog，2008，4(6):e1000085.

[41] BERRI F，HAFFAR G，LV B，et al.Annexin V incorporated into influenza virus particles inhibits gamma interferon signaling and promotes viral replication [J].JVirol，2014，88(19):11215-11228.

[42] 李 錚，劉曉玲，趙振東，等.熱休克蛋白27增強A型流感病毒NS1對β干擾素的抑制作用[J].生物工程學(xué)報，2012，28(10)：1205-1215. LI Z，LIU X L，ZHAO Z D，et al.Heat shock protein 27 enhances the inhibitory effect of influenza A virus NS1 on the expression of interferon-β [J].ChineseJournalofBiotechnology，2012，28(10)：1205-1215.(in Chinese)

[43] 李永濤，吳舒娟，錢 偉，等.HSP27通過K48泛素化途徑降解TRAF3蛋白負調(diào)控Ⅰ型干擾素信號通路[C]∥.細胞-生命的基礎(chǔ)，中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會，武漢論文摘要集，2013. LI Y T，WU S J，QIAN W，et al.HSP27 negatively regulates type I interferon response by targeting TRAF3 through K48-ubiquitination pathway [C].Cell-the basis of life.National Academic Conference in 2013，Chinese Society for Cell Biology，Wuhan conference abstracts，2013.(in Chinese)

[44] PAL S，ROSAS J M，ROSAS-ACOSTA G.Identification of the non-structural influenza A viral protein NS1A as a bona fide target of the Small Ubiquitin-like Modifier by the use of dicistronic expression constructs [J].JVirolMethods，2010，163(2):498-504.

[45] SANTOS A，PAL S，CHACN J，et al.SUMOylation affects the interferon blocking activity of the influenza A nonstructural protein NS1 without affecting its stability or cellular localization [J].JVirol， 2013，87(10):5602-5620.

[46] HAN Q，CHANG C，LI L，et al.Sumoylation of influenza A virus nucleoprotein is essential for intracellular trafficking and virus growth[J].JVirol，2014，88(16):9379-9390.

[47] MORDSTEIN M，KOCHS G，DUMOUTIER L，et al.Interferon-λ contributes to innate immunity of mice against influenza A virus but not against hepatotropic viruses [J].PLoSPathog，2008，4(9):e1000151.

[49] RICHT J A，GARCA-SASTRE A.Attenuated influenza virus vaccines with modified NS1 proteins [J].CurrTopMicrobiolImmunol，2009，333:177-195.

[50] MATA M A，SATTERLY N，VERSTEEG G A，et al.Chemical inhibition of RNA viruses reveals REDD1 as a host defense factor [J].NatChemBiol，2011，7(10):712-719.

(編輯 白永平)

Evasion of Host Innate Immune Antiviral Responses by Influenza Viruses

LI Yong-tao1，2，WANG Chuan-qing1*

(1.InstituteofPoultryDiseases，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450001，China；2.StateKeyLaboratoryofAgricultureMicrobiology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China)

Influenza virus is an important respiratory pathogen，which can bring endemic infection in people every year，and can cause worldwide pandemic due to its easy variation of antigenicity.Influenza viruses can also spread in a variety of animal populations，transmit occasionally from animal species to the humans and spread in the population，resulting in potential threats to human health under certain conditions.Host innate immune response，especially early interferon response is the body’s first defense barrier against viral infections.Viruses must breakthrough that barrier in order to successfully infect the host.To fight viral infections，the host cells use a range of sophisticated anti-viral strategies：the cells firstly use pattern recognition receptor to recognize viral products，and then activate signaling cascades，leading to a range of interferon and other cytokines；downstream effector molecules are induced by interferons and inhibit viral replication；the activated cytokines contribute to adapted immune response.In the process of co-evolution with the host，influenza virus also develops perfect antagonist strategies to host interferon pathway，which help virus infect the host and spread efficiently in host cell.In recent years，the studies on how virus induces and modulates host innate immune response have made rapid development，and a large study found that the virus can utilize a variety of strategies to evade host antiviral response.Therefore，this review focuses on how influenza virus antagonizes host interferon production and evades cellular antiviral response，which will be contributed to uncover the pathogenicity mechanisms of influenza virus and reveal novel antiviral targets for the prevention and control of influenza infection.

influenza virus；innate immune；interferon；immune evasion

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.003

2014-08-18

河南省高校科技創(chuàng)新團隊支持計劃(14IRTSTHN015)；河南省高?？萍紕?chuàng)新人才支持計劃(14HASTIT022)；華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室開放基金(AMLKF201308)

李永濤(1985-)，男，河南西華人，講師，博士，主要從事畜禽天然免疫研究，E-mail：yongtaole@126.com，Tel：0371-63555516

*通信作者：王川慶，教授，E-mail:wchuanq@163.com

S852.659.5；S852.4

A

0366-6964(2015)04-0526-08