逄世峰，李亞麗，許世泉，孫成賀，趙景輝，王英平

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長(zhǎng)春130112)

西洋參不同部位人參皂苷類成分研究

逄世峰，李亞麗，許世泉，孫成賀，趙景輝，王英平*

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長(zhǎng)春130112)

研究西洋參不同部位人參皂苷類成分的變化。采用超高效液相色譜法，測(cè)定西洋參不同部位人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的含量。西洋參地上和地下部位皂苷組成不同，西洋參葉中人參皂苷Rb3含量較高，西洋參根中人參皂苷Rc主要集中于參皮。明確了西洋參不同部位皂苷組成差異，為西洋參資源的合理利用提供理論依據(jù)。

西洋參；不同部位；人參皂苷；超高效液相色譜

西洋參(PanaxquinquefoliusL. )系五加科人參屬植物，原產(chǎn)于北美的加拿大和美國(guó)，是重要的藥用植物，已被廣泛使用。人參皂苷是西洋參中重要的活性成分[1-2]，具有抗腫瘤、抗疲勞、降血糖、提高免疫力，以及改善學(xué)習(xí)記憶能力等多種生物活性和藥理活性[3-4]。西洋參根通常是藥用的主要部位，人參皂苷也分布在植物的其他部位，各部位的人參皂苷含量和組成不盡相同[5-7]，然而對(duì)于參心(木質(zhì)部)和參皮(周皮和韌皮部)中人參皂苷組成研究較少。

目前，很多分析方法用于人參屬植物中人參皂苷的檢測(cè)，高效液相色譜使用最為普遍，然而其分析時(shí)間較長(zhǎng)，一般均超過(guò)60min[8-9]。超高效液相色譜(UPLC)是中藥研究領(lǐng)域發(fā)展的一個(gè)極大促進(jìn)，卓越的分離度和靈敏度更適合于中藥復(fù)雜樣品的分析，同時(shí)減少了溶劑消耗，并極大的縮短了分析時(shí)間[10]。MCI GEL CHP 20P樹(shù)脂用于反相色譜分離，與C18填料相似，適于人參皂苷的富集[11]。

本研究建立了一種快速穩(wěn)定的UPLC-UV檢測(cè)西洋參中人參皂苷方法，對(duì)西洋參莖、葉、主根、須根、蘆頭、根皮、根心中人參皂苷含量和組成進(jìn)行了研究。

1 儀器和材料

超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC(waters公司)；乙腈為色譜純(Fisher)，水為超純水(Millipore)，其他試劑均為分析純；人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

西洋參采自吉林省和龍市，經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所許世泉副研究員鑒定。全部樣品均為4年生西洋參，采集于2013年9月。西洋參的主根、須根、蘆頭、莖、葉被分離，切取主根中部1.5cm小段，分成根皮和根心2部分。全部樣品于50°C烘干至恒重，粉碎，過(guò)60目篩。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1×50mm，1.7μm)，流動(dòng)相乙腈-水(梯度洗脫：0～3min，17%～19%乙腈；3～4min，19%～21%乙腈；4～5min，21%～26%乙腈；5～9min，26%～27%；9～12min，27%～32%乙腈；12～15min，32%～43%乙腈)，流速0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量2μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液。精密稱取8種人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品，配置成含人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd含量分別為1.002mg/mL、2.136mg/mL、0.609 mg/mL、2.586mg/mL、0.651mg/mL、0.663mg/mL、1.272mg/mL、1.890mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液[10-12]。取0.1g的樣品粉末，精密稱定，置于離心管中，加入甲醇1mL，室溫超聲(功率500W，頻率40kHz)提取30min，離心，再重復(fù)提取2次，合并提取液，60°C揮干溶劑，殘?jiān)?0%甲醇水溶解，西洋參葉提取液定容至10mL，其他提取液定容至1mL，備用。

將0.5mL提取液轉(zhuǎn)移至預(yù)先用5mL甲醇和8mL水沖洗過(guò)的MCI小柱(直徑：1.5cm，填料：1g)，用5mL水沖洗，棄去水液，再用5mL甲醇洗脫皂苷，50°C揮干洗脫液，1mL甲醇溶解，過(guò)0.22μm PTFE濾膜，進(jìn)樣分析。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察與定量限(LOQ)、檢測(cè)限(LOD)。將混合對(duì)照品溶液分別用甲醇稀釋1倍、1.5倍、2倍、4倍、150倍，制成一系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。各人參皂苷檢出限(LOD)和定量限(LOQ)由3倍和10倍信噪比計(jì)算而來(lái)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 人參皂苷的線性回歸方程與LOQ，LOD

2.3.2 精密度試驗(yàn)。取同一濃度的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，進(jìn)樣量2μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算得人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的RSD分別為0.28%、0.3%、0.68%、0.42%、0.67%、0.26%、0.77%、0.27%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一西洋參根供試品溶液，室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、12 h 按上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 峰面積的RSD分別為2.03%、1.47%、1.38%、1.67%、2.26%、2.77%、1.72%，表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一份西洋參根樣品，精密稱取6份，按供試品溶液的制備方法處理，進(jìn)樣分析，測(cè)得人參皂苷Rg1平均含量1.61mg/g，RSD 2.38%，人參皂苷Re平均含量10.45mg/g，RSD 1.24%，人參皂苷Rb1平均含量14.57mg/g，RSD 1.16%，人參皂苷Rc平均含量1.01mg/g，RSD 2.35%，人參皂苷Rb2平均含量0.14mg/g，RSD 3.51%，人參皂苷Rb3平均含量0.19mg/g，RSD 3.97%，人參皂苷Rg1平均含量2.11mg/g，RSD 2.47%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取已知含量的西洋參根樣品粉末6份，添加一定量的人參皂苷對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 人參皂苷加樣回收率(n=6)

2.3.6 樣品測(cè)定。照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法操作，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定樣品，結(jié)果見(jiàn)表3，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 西洋參不同部位UPLC色譜圖

注：A：標(biāo)準(zhǔn)品；B：西洋參根；C：西洋參須根；D：西洋參蘆頭；E：西洋參參皮；F：西洋參參心；G：西洋參葉；H：西洋參莖；1：Rg1；2：Re；3：Rf；4：Rb1；5：Rc；6：Rb2；7：Rb3；8：Rd。

表3 西洋參不同部位人參皂苷含量

注：表中數(shù)據(jù)為3株植物測(cè)定結(jié)果平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，-為未檢出，+為未達(dá)定量限。

由表3可知，西洋參各部位人參皂苷組成和含量各不相同。西洋參葉中人參皂苷含量較高，與人參地下部位皂苷組成不同，人參皂苷Rb3、Rd、Re、Rb2是西洋參葉中主要皂苷，西洋參莖中皂苷含量較低，以人參皂苷Rb3、Rd為主，而西洋參地下部位中Rb1、Re、Rd是主要皂苷。

3 討論

與人參不同，西洋參各部位均未檢出人參皂苷Rf，且西洋參根中Re含量大約是Rg1的5倍，因此Rf、Re/Rg1被用來(lái)區(qū)別人參和西洋參[13]，然而，Erin等[14]報(bào)道美國(guó)馬里蘭州存在相反化學(xué)型西洋參資源，但在國(guó)產(chǎn)西洋參中并未見(jiàn)報(bào)道。西洋參須根中Rc含量較高，與Zhang等[7]研究結(jié)果相一致，這可能與須根中參皮所占比例較大，人參皂苷Rc又主要集中于參皮有關(guān)。因此，人參皂苷Rc含量有望用于區(qū)別西洋參主根與須根。西洋參葉中含有大量人參皂苷Rb3，與Wang等[15]研究結(jié)果相一致，但與Yang等[16]研究結(jié)果存在較大差異，可能與品種和生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。 現(xiàn)代藥理研究表明：西洋參不同部位藥理功效不同，其功效作用主要來(lái)自于西洋參的皂苷類成分[17-18]，因此對(duì)不同部位中所含的皂苷類成分進(jìn)行系統(tǒng)的對(duì)比分析，進(jìn)而獲得不同部位人參皂苷類成分的組成和含量，可以指導(dǎo)西洋參資源的合理利用，并為西洋參的深度開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

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Investigation of Ginsenosides in Different Parts ofPanaxquinquefolius

Pang Shifeng, Li Yali, Xu Shiquan, Sun Chenghe, Zhao Jinghui, Wang Yingping*

(Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，CAAS，Changchun 130112)

Ginsenosides in different parts ofPanaxquinquefoliusL. were investigated. The study was conducted with ultra performance liquid chromatography, To compare the content of ginsenoside Rg1,Re,Rb1,Rc,Rb2,Rb3,Rd in different parts of American Ginseng. Composition of ginsengsides from the ground and underground parts of plant are different, The content of ginsengside Rb3in leaf is the higher, and a great amount of ginsenoside Rc in the root concentrate on the cortex. We clearly revealed the constitute and differences of ginsenosides in different parts of American ginseng, which provides a theoretical basis for rational use of American ginseng resources.

PanaxquinquefoliusL.; Different parts; Ginsenosides; UPLC

2014-11-06

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2011BAI03B0106)；吉林省醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(xiàng)資金(YYZX201136)

逄世峰(1983-)，男，助理研究員，主要從事藥用植物質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，E-mail：psf5295@sohu.com；*

S567.5+1

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.02.001