周碧燕　李友邕　趙麗萍　魏　威

IL13Rα2 SNPs在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

周碧燕李友邕趙麗萍魏威

作者單位:530022 廣西南寧市第一人民醫(yī)院(周碧燕，李友邕，趙麗萍)；510515 南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院(魏威)

【摘要】目的檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者中IL13Rα2 SNPs(rs17095919)的多態(tài)性，并探討其臨床意義。方法收集NSCLC患者96例，另選取同期健康體檢者40例作為正常對(duì)照。SNPs多態(tài)性測(cè)定應(yīng)用Real-Time PCR Taqman分析。結(jié)果NSCLC患者C/C、C/T和T/T基因型頻率分別為22.9%、51.1%和26.0%，對(duì)照組分別為32.5%、30.0%和37.5%，C/C、T/T基因型表達(dá)兩組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而C/T基因型表達(dá)兩組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。C/T基因型表達(dá)與NSCLC患者有無(wú)吸煙、腫瘤分化程度無(wú)顯著相關(guān)(P>0.05)，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同臨床病理分期顯著相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論IL13RA2 SNPs(rs17095919)C/T基因型與NSCLC的易感性密切相關(guān)，在NSCLC的早期診斷以及預(yù)后評(píng)估等方面起一定的作用。

【關(guān)鍵詞】非小細(xì)胞肺癌；IL13α2受體；單核苷酸多態(tài)性

The Polymorphism of IL13Rα2 SNPs in Non-small Cell Lung Cancer and

Its Clinical Significance

ZHOUBiyan，LIYouyong，ZHAOLiping,etal.FirstPeople’sHospitalofNanning,Nanning,530022

【Abstract】ObjectiveTo investigate the polymorphism of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)in non-small cell lung cancer(NSCLC)and its clinical significance.Methods96 patients with NSCLC were enrolled in our study.Another 40 healthy person were usded as a normal control.The genotypes of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)was performed using the Real-Time PCR TaqMan assays.ResultsThe C/C,C/T,and T/T genotypes of IL13Rα2 SNPs(rs17095919)in NSCLC were 22.9%,51.1%,and 26.0%,respectively,and those of the control group were 32.5%,30.0%,and 37.5%,respectively.There had no significant difference in C/C and T/T genotypes between the 2 groups(P>0.05).However,there was significant difference in C/T genotype between the 2 groups(P<0.05).The C/T genotype was not significantly related with smoking and histological grade(P>0.05).However,it was significantly related with lymphatic metastasis,and clinical pathological stage in NSCLC patients(P<0.05).ConclusionIL13RA2 SNPs(rs17095919)C/T genotype may be a susceptibility genotype in NSCLC.The detection of C/T genotype might be used as a mark for diagnosis,estimating the degree of differentiation or prognosis in NSCLC patients.

【Key words】Non-small cell Lung Cancer(NSCLC)；IL13Rα2；Single nucleotide polymorphism(SNP)

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0320～0322)

腫瘤是引起目前人類死亡的主要原因，肺癌(lung cancer)是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率和病死率居最高的惡性腫瘤，流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示其發(fā)病近年來(lái)呈現(xiàn)逐年增加和年輕化的趨勢(shì)[1-2]。非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)是最常見的肺癌類型，占了肺癌病例的80%左右，具有治愈率低、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，是威脅肺癌患者生存的最主要原因[3]。NSCLC的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素共同參與、多階段的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，其中癌基因激活或者抑癌基因失活參與了其中，因此個(gè)體的基因差異性對(duì)肺癌的易感性起了重要的作用[4-5]。IL-13Rα2基因是近幾年來(lái)在腎癌細(xì)胞中分離的一個(gè)癌基因[6]，本研究檢測(cè)了其第七外顯子上一個(gè)SNPs(rs17095919，C256T)位點(diǎn)在NSCLC患者中的多態(tài)性，為NSCLC早期診斷和腫瘤的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1　臨床資料

收集2010年1月至2012年6月本院胸外科手術(shù)切除的NSCLC組織標(biāo)本96例，病例均經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性NSCLC，其中男性62例，女性34例，年齡27～65歲，平均年齡(47.6±12.4)歲，相應(yīng)病例另取外周靜脈血2 ml用于基因組DNA檢測(cè)。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為：Ⅰ期22例、Ⅱ期28例、Ⅲ期25例、Ⅳ期21例。另選取同期體檢者40例作為健康正常對(duì)照，其中男性26例，女性14例，年齡26～64歲，平均年齡(46.1±11.4)歲。兩組在年齡、性別等方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2　主要試劑和儀器

外周血和組織DNA提取試劑盒購(gòu)自大連寶生物公司，熒光定量檢測(cè)(Real-Time PCR)試劑盒購(gòu)自美國(guó)ABI公司，引物以及Taqman探針的合成由深圳華大基因有限公司完成，熒光定量PCR儀(Prism 7900)為美國(guó)ABI公司產(chǎn)品。

1.3　SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的C和T等位基因檢測(cè)

NSCLC患者的腫瘤組織和血液標(biāo)本以及健康對(duì)照的血液標(biāo)本使用DNA提取試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，提取基因組DNA，按照Real-time PCR試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)SNPs(rs17095919)位點(diǎn)C和T等位基因的表達(dá)情況，引物序列為：5'-ACCTTTGCCGCCAGTCTATCTTAC-3'(sense)，Antisence:5'-TGTCGGGT-TTCATTTGTTGTTTTC-3'(antisense)，反應(yīng)條件：50 ℃，2 min，95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。參照J(rèn)ung等[7]的方法觀察Real-time PCR的反應(yīng)曲線，抬高的擴(kuò)增曲線對(duì)應(yīng)的Taqman探針。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。

2結(jié)果

2.1　NSCLC患者SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的基因型多態(tài)性變化

Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：NSCLC患者腫瘤組織和外周血液中SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的等位基因型一致，其中C等位基因頻率為48.4%，T等位基因頻率為51.6%，健康對(duì)照組中C 、T等位基因的頻率分別為47.5%和52.5%，兩組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，基因型頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，見表1。

NSCLC患者C/C、C/T和T/T基因型頻率分別為22.9%、51.1%和26.0%，對(duì)照組分別為32.5%、30.0%和37.5%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示C/C、T/T基因型表達(dá)兩組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而C/T基因型表達(dá)兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表1。

表1　NSCLC組與對(duì)照組SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的

注：*為與對(duì)照組比較，P<0.05。

2.2　NSCLC患者SNPs(rs17095919)C256T基因型多態(tài)性與其臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性分析

由表2可以看出，C256T基因型表達(dá)與NSCLC患者有無(wú)吸煙、腫瘤分化程度無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同臨床病理分期存在顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

表2　C256T基因型表達(dá)與NSCLC臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

注：*為不同臨床指標(biāo)兩組間比較，P<0.05。

3討論

NSCLC早期診斷困難，發(fā)現(xiàn)腫瘤時(shí)已有超過(guò)40%的患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而且治療手段有限，生存率低，雖然近年來(lái)治療手段的不斷更新，其5年生存率也只有25%～30%[8]。吸煙是NSCLC發(fā)病的一個(gè)公認(rèn)高風(fēng)險(xiǎn)因素，但流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)只有約10%～15%的吸煙者會(huì)發(fā)展成為肺癌，可見從分子生物學(xué)特征研究肺癌的基因、表觀遺傳以及基因表達(dá)等將有助于從本質(zhì)上認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)病機(jī)制和腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，同時(shí)也有利于早期診斷以及個(gè)體化治療的實(shí)施[9]。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它占了已知多態(tài)性的90%以上，一些與肺癌密切相關(guān)的SNP位點(diǎn)已經(jīng)學(xué)者們陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，例如EGFR、VEGFR等[10-11]。IL-13Rα2屬于促紅細(xì)胞生成素受體家族成員，其主要與配體IL-13結(jié)合調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫能力[12-13]，近期的研究發(fā)現(xiàn)IL-13Rα2在一些實(shí)體腫瘤中高表達(dá)[6]，本研究發(fā)現(xiàn)了其第七外顯子上一個(gè)SNPs(rs17095919)位點(diǎn)C256T多態(tài)性變化在NSCLC患者與健康對(duì)照人群之間存在顯著性差異，提示了SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的C256T基因型可能與NSCLC的易感性相關(guān)密切相關(guān)。

基于腫瘤的組織學(xué)類型和臨床表現(xiàn)進(jìn)行的傳統(tǒng)分期對(duì)于判斷預(yù)后、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和指導(dǎo)治療的效果往往并不理想，因此從外顯子基因水平來(lái)判斷患者的病變發(fā)展情況以及預(yù)后的評(píng)估正逐漸成為研究的熱點(diǎn)[3,11]。本研究的結(jié)果顯示了NSCLC患者SNPs(rs17095919)位點(diǎn)的C256T基因型隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期的進(jìn)展而逐漸的增加，提示C256T基因型的檢測(cè)還可以用于患者病情的評(píng)估和預(yù)后的評(píng)價(jià)。

綜上所述，本研究顯示檢測(cè)IL13RA2 SNPs在NSCLC的早期診斷和腫瘤的防治中起到一定的作用，對(duì)于患者的臨床分級(jí)以及預(yù)后評(píng)估等方面具有一定的臨床指導(dǎo)意義。

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(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-08-21修回日期 2014-10-10)

中圖分類號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2015)03-0320-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.002

基金項(xiàng)目：南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：20103132)