牛新海，高小煥，殷菁華，束 煒，張 歡

（江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇鎮(zhèn)江212028）

全自動(dòng)生化分析儀中同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶組合測(cè) 定時(shí)，如果分析順序先同型半胱氨酸后腺苷脫胺酶，由于同型半胱氨酸試劑2中含有腺苷脫胺酶酶，會(huì)污染全自動(dòng)生化分析儀的試劑探針。試劑探針清洗不徹底時(shí)，污染的腺苷脫胺酶試劑會(huì)使腺苷脫胺酶試劑在使用后余下的試劑處于緩慢的酶促反應(yīng)過程，緩慢降解腺苷脫胺酶試劑，進(jìn)而影響腺苷脫胺酶試劑穩(wěn)定，影響腺苷脫胺酶的檢驗(yàn)測(cè)定結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 貝克曼AU680全自動(dòng)生化分析儀。同型半胱氨酸檢測(cè)試劑為上海長(zhǎng)征公司產(chǎn)品；腺苷脫胺酶試劑為寧波美康公司產(chǎn)品。同型半胱氨酸檢測(cè)試劑為酶循環(huán)法雙試劑；腺苷脫胺酶檢測(cè)使用的是酶比色法雙試劑。同型半胱氨酸檢測(cè)試劑成分包括試劑1：Tris緩沖液，試劑2：Tris緩沖液，腺苷同型半胱氨酸水解酶、腺苷同型半胱氨酸轉(zhuǎn)甲基酶、腺苷脫胺酶。腺苷脫胺酶檢驗(yàn)需要檢驗(yàn)的成分是腺苷脫胺酶，與同型半胱氨酸試劑成分相同，理論上存在試劑交叉污染的可能。

1.2 方法 攜帶污染試驗(yàn)證明同型半胱氨酸會(huì)對(duì)腺苷脫胺酶檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。命名水平R1 新試劑為A，R2 新試劑為B，并做質(zhì)控（水平結(jié)果為27.6和27，靶值27.7）樣本，試劑正常使用。（1）證明同型半胱氨酸對(duì)腺苷脫胺酶水平檢測(cè)的影響將在第2天和第3天產(chǎn)生明顯影響。試驗(yàn)前期準(zhǔn)備：足量A1、B1試劑，已知濃度的大量混合血清S［已分裝重復(fù)檢測(cè)，同型半胱氨 酸 檢 測(cè) 結(jié) 果 為（15.50±0.19）μmol／L，水 平 結(jié) 果 為（15.60±0.21）μmol／L（檢測(cè)6次所得均值）］。試驗(yàn)操作方案1：檢測(cè)同型半胱氨酸＋水平次數(shù)至10次，記錄結(jié)果數(shù)據(jù)，將試劑A1、B1留存試劑倉中，于第2天、第3天用相同的分裝混合血清測(cè)定腺苷脫胺酶。（2）證明采取糾偏措施有效試驗(yàn)。操作方案2：在進(jìn)行相同的對(duì)照檢驗(yàn)前，設(shè)置儀器相關(guān)參數(shù)，①在添加水平的R2試劑之前，不論什么項(xiàng)目，都用清水清洗試劑針2次，以消除試劑針攜帶造成的交叉污染；②將水平試劑位置和檢測(cè)順序與同型半胱氨酸隔離開來（試劑位相隔9個(gè)位置，檢測(cè)項(xiàng)目間隔4個(gè)項(xiàng)目，替換上新的A2、B2試劑。

2 結(jié) 果

對(duì)照組第1天測(cè)定腺苷脫胺酶均值為（15.61±0.23）U／L，先測(cè)同型半胱氨酸后測(cè)腺苷脫胺酶，測(cè)定腺苷脫胺酶的水平為（17.8±0.31）U／L，以上述試劑進(jìn)行10次測(cè)定腺苷脫胺酶；第2天測(cè)定腺苷脫胺酶水平為（106.9±2.8）U／L。第3天測(cè)定：測(cè)定出其中的腺苷脫胺酶測(cè)定水平為（1 033.0±3.7）U／L。將單獨(dú)測(cè)定腺苷脫胺酶的對(duì)照結(jié)果與按照以上組合順序測(cè)定的結(jié)果做配對(duì)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

采取糾偏措施后，更換新試劑，對(duì)照組第1天測(cè)定腺苷脫胺酶水平為（15.6±0.22）U／L；先測(cè)同型半胱氨酸后測(cè)腺苷脫胺酶的分析順序測(cè)定腺苷脫胺酶水平均為（15.6±0.21）U／L，以上述同型半胱氨酸試劑作為樣品進(jìn)行20次測(cè)定，第2天測(cè)定腺苷脫胺酶水平為（15.6±0.23）U／L。第3天測(cè)定：測(cè)定出其中的腺苷脫胺酶測(cè)定水平均值為（15.5±0.23）U／L。將單獨(dú)測(cè)定腺苷脫胺酶的對(duì)照結(jié)果與按照以上組合順序測(cè)定的結(jié)果做配對(duì)t檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

先同型半胱氨酸后腺苷脫胺酶的分析順序測(cè)定腺苷脫胺酶。試劑針清洗不干凈易造成試劑間的交叉污染，證明同型半胱氨酸和水平同時(shí)檢測(cè)時(shí)會(huì)對(duì)水平試劑產(chǎn)生污染，且影響隨著時(shí)間增大。生化分析儀檢測(cè)順序必須避免先測(cè)定同型半胱氨酸后再測(cè)定腺苷脫胺酶；在添加水平的R2試劑之前，不論什么項(xiàng)目，都用清水清洗試劑針2次，以消除試劑針攜帶造成的交叉污染。據(jù)試劑配方顯示，同型半胱氨酸試劑中含有大量的腺苷脫胺酶成分。腺苷脫胺酶需要檢驗(yàn)的成分是腺苷脫胺酶，理論上同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶存在試劑交叉污染的可能。

同型半胱氨酸試劑污染腺苷脫胺酶試劑2，相當(dāng)于在腺苷脫胺酶試劑中加入了腺苷脫胺酶，以致產(chǎn)生酶促反應(yīng)過程，緩慢降解腺苷脫胺酶試劑，進(jìn)而影響腺苷脫胺酶試劑穩(wěn)定，導(dǎo)致水平的檢驗(yàn)測(cè)定結(jié)果明顯偏高的錯(cuò)誤。錯(cuò)開設(shè)置同型半胱氨酸、腺苷脫胺酶檢驗(yàn)順序，只能相對(duì)避免試劑污染，由于每天工作量的關(guān)系，如果試劑針清洗不徹底，仍有同型半胱氨酸中腺苷脫胺酶酶分子污染水平試劑的可能。如果儀器分析順序先測(cè)同型半胱氨酸后測(cè)腺苷脫胺酶，那么試劑針清洗不干凈易造成試劑間的交叉污染。正如上面的實(shí)驗(yàn)顯示，同型半胱氨酸試劑會(huì)使腺苷脫胺酶的檢測(cè)結(jié)果顯著升高，污染后腺苷脫胺酶試劑在第2天測(cè)定正常樣本腺苷脫胺酶水平會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果高達(dá)106.9U／L，第3天進(jìn)行測(cè)定正常血清腺苷脫胺酶水平會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果高達(dá)1 033U／L。

AU680全自動(dòng)生化分析儀的工作方式是先測(cè)試一個(gè)標(biāo)本的所有試驗(yàn)項(xiàng)目，再測(cè)試下一個(gè)標(biāo)本。一個(gè)標(biāo)本在所有項(xiàng)目未完成之前，樣品針只吸注同一個(gè)標(biāo)本，而試劑針在不同試劑之間吸注；另外試劑針比樣品針吸注量大幾十倍，沖洗后殘留污染也就更多，所以樣品針不容易污染，而試劑針最容易受到污染。

設(shè)置同型半胱氨酸與腺苷脫胺酶檢驗(yàn)順序時(shí)，中間間隔5～6個(gè)其他項(xiàng)目，在添加水平的試劑之前，不論什么項(xiàng)目，都用清水清洗試劑針2次。通過比對(duì)檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該特殊清洗可有效避免同型半胱氨酸與水平試劑之間的直接接觸。

儀器維護(hù)：按照AU680操作SOP要求，按時(shí)、定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)堅(jiān)持日保養(yǎng)、周保養(yǎng)、月保養(yǎng)；定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；全自動(dòng)生化分析儀標(biāo)本和試劑用量較少，有少量殘存即會(huì)影響測(cè)試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗加樣針及攪拌棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染［1］。

通過同型半胱氨酸試劑攜帶污染對(duì)腺苷脫胺酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，科室組織品管圈進(jìn)行相關(guān)學(xué)習(xí)討論，分別提出雙縮脲試劑對(duì)血清銅測(cè)定的攜帶污染［2］，葡萄糖試劑攜帶污染影響尿酸檢測(cè)［3］，以及其他臨床檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的一些試劑交叉污染現(xiàn)象。

全自動(dòng)生化分析儀的自凈率都是有限的［4］，檢測(cè)試劑排序不當(dāng)就會(huì)出現(xiàn)不可逆轉(zhuǎn)的結(jié)果誤差［5］，容易給臨床造成無效數(shù)據(jù)，影響臨床診療。通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，遇可能發(fā)生試劑交叉污染的項(xiàng)目時(shí)，重點(diǎn)要設(shè)置項(xiàng)目檢驗(yàn)順序和試劑針的清洗。

［1］郭旭.初探全自動(dòng)生化分析儀交叉污染的原因及解決對(duì)策［J］.醫(yī)療裝備，2011，24（5）：83.

［2］汪宇嬰，馮春顏.雙縮脲試劑對(duì)血清銅測(cè)定的攜帶污染探討［J］.中國(guó)誤診學(xué)雜志，2009，9（9）：2084－2085.

［3］張艷超.試劑交叉污染對(duì)尿酸測(cè)定結(jié)果的影響［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2009，28（4）：300－301.

［4］郭杰，蔡忠，張連祥，等.全自動(dòng)生化分析儀的精密度和交叉污染率評(píng)價(jià)［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2004，19（2）：140－142.

［5］韓來新，張團(tuán)結(jié)，劉玉霞，等.總膽固醇試劑對(duì)總膽汁酸測(cè)定有攜帶污染［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，19（1）：51－51