李艷紅，張景皓，李 巍，季 萍△

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，新疆 烏魯木齊 830054，2.上海復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200040）

五味子對(duì)產(chǎn)金屬β－內(nèi)酰胺酶鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌作用研究

李艷紅1，張景皓2#，李 巍1，季 萍1△

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，新疆 烏魯木齊 830054，2.上海復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200040）

目的研究五味子對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌，包括產(chǎn)金屬β－內(nèi)酰胺酶（MBL）細(xì)菌和不產(chǎn)MBL鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌作用。方法對(duì)臨床分離的75株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行初步篩選，然后對(duì)這些菌株進(jìn)行產(chǎn)MBL確證試驗(yàn)；檢測75株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)14種抗菌藥物的耐藥情況；采用體外抑菌試驗(yàn)檢測五味子水煎液對(duì)75株鮑曼不動(dòng)桿菌（包括產(chǎn)MBL和不產(chǎn)MBL鮑曼不動(dòng)桿菌）的MIC。結(jié)果結(jié)果MBL確證試驗(yàn)表明篩選出的50株菌株中，有38株陽性，占試驗(yàn)菌株的76%（38/50）。結(jié)論五味子對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌，特別是產(chǎn)MBL酶的鮑曼不動(dòng)桿菌有一定的抑菌作用，可以將西藥與五味子聯(lián)合應(yīng)用在抗鮑曼不動(dòng)桿菌的治療中。

五味子； 鮑曼不動(dòng)桿菌； 金屬β－內(nèi)酰胺酶

鮑曼不動(dòng)桿菌是目前臨床上較為常見的條件致病菌，研究表明其耐藥性尤其是對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物的耐藥性近年來增加迅速［1］，甚至出現(xiàn)了僅對(duì)多黏菌素敏感而對(duì)其他抗菌藥物均耐藥的菌株［2］，然而現(xiàn)代藥理研究表明，五味子在諸多方面都有較好的效果，如興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)、鎮(zhèn)咳祛痰、強(qiáng)心、降低轉(zhuǎn)氨酶水平、抗菌、抗衰老、抗病毒、興奮平滑肌和促進(jìn)代謝等［3］。本研究選取了75株從臨床標(biāo)本分離得到的鮑曼不動(dòng)桿菌作為研究對(duì)象，對(duì)五味子的抑菌作用進(jìn)行了研究；使用了14種抗菌藥物對(duì)產(chǎn)金屬β－內(nèi)酰胺酶（MBL）和非產(chǎn)MBL的菌株進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)；旨在為臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 25株敏感的鮑曼不動(dòng)桿菌分離自來自新疆烏魯木齊市兒童醫(yī)院的臨床送檢標(biāo)本；50株多重耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌分離自新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心的臨床標(biāo)本。上述臨床標(biāo)本為2013年3～10月門診和住院患者留取的各種標(biāo)本，其中痰液標(biāo)本的43例，尿液13例，分泌物9例，血液6例，腹水3例，腦脊液2例。

1.2 儀器與試劑 使用的儀器主要包括生物梅里埃公司Vitek－2Compact細(xì)菌鑒定儀及配套比濁儀、SHINVALMQ－R全自動(dòng)立式滅菌器（購自山東新華醫(yī)療器械股份有限公司），Sanyo公司NUS430型生物安全柜、DHP－500型電熱恒溫培養(yǎng)箱（北京市樂光明醫(yī)療儀器廠）。肉湯培養(yǎng)基由本中心自行配制。藥敏紙片均購自英國Oxoid公司；陰性鑒定卡GN09、陰性藥敏卡AST－GN09均購自生物梅里埃公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)菌鑒定 試驗(yàn)所用菌株均經(jīng)生物梅里埃公司Vitek－2Compact細(xì)菌鑒定儀鑒定到種；標(biāo)準(zhǔn)菌株為大腸埃希菌ATCC25922。

1.3.2 中藥水煎液的制備 取五味子中藥材100g，加水1～2L，浸泡30min后煎煮，煮沸后文火煎30min，經(jīng)100目篩網(wǎng)過濾，相當(dāng)于生藥1g/mL，滅菌后，－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 MBL檢測 從75株鮑曼不動(dòng)桿菌中選出產(chǎn)MBL和不產(chǎn)MBL的菌株。參照文獻(xiàn)［3］，采用頭孢他啶、亞胺培南、頭孢他啶＋EDTA、亞胺培南＋EDTA雙紙片法測定這四種紙片的抑菌環(huán)直徑。加入EDTA的量均為10μL，物質(zhì)的量濃度為500mmol/L。頭孢他啶＋EDTA與頭孢他啶或亞胺培南＋EDTA與亞胺培南抑菌環(huán)直徑之差大于或等于5mm者為MBL確證試驗(yàn)陽性。

1.3.4 五味子體外抑菌試驗(yàn) 采用2倍稀釋法進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)［4］。將收集菌種復(fù)蘇，配制0.5麥?zhǔn)蠁挝痪鷳乙?，取試?50支，分為75組，10支/組。分別向各試管中加入1mL肉湯培養(yǎng)基，再向每組第1支試管中加入1mL五味子水煎液，混勻，倍比稀釋至第9管，即第1～9支試管（試驗(yàn)組）中的五味子水煎液濃度依次為0.500、0.250、0.125、0.063、0.032、0.016、0.008、0.004、0.002g/mL。第10支試管不加五味子水煎液（只加入肉湯培養(yǎng)基）作為陽性對(duì)照組。75組試管中每支加入100μL細(xì)菌懸液。另取5支試管，只加1mL五味子水煎液作為陰性對(duì)照組。將試管置于37℃溫箱，培養(yǎng)24h，次日觀察試驗(yàn)組和對(duì)照組檢測結(jié)果。結(jié)果判定按照2010年美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較選用配對(duì)資料χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MBL的檢測 從75株鮑曼不動(dòng)桿菌挑選50株多重耐藥產(chǎn)MBL的菌株做MBL確證試驗(yàn)，陽性菌株占76%（38/50）。

2.2 產(chǎn)MBL和非產(chǎn)MBL菌株對(duì)抗菌藥物的耐藥情況 見表1。

2.3 五味子體外最小抑菌濃度（MIC） 觀察試管，陽性對(duì)照組試管渾濁，說明有細(xì)菌生長，用“＋”表示；陰性對(duì)照組試管清亮，說明無細(xì)菌生長，用“－”表示。五味子對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC為0.016g/mL，見表2。

3 討 論

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種革蘭陰性桿菌，與人類健康有密切關(guān)系，是社區(qū)獲得性感染的主要細(xì)菌之一［5－6］。這種細(xì)菌是重要的院內(nèi)感染病原體，可出現(xiàn)在肺炎，血液病，傷口感染，腦膜炎等患者中［7－8］。在過去的10年中，鮑曼不動(dòng)桿菌出現(xiàn)多重耐藥的概率也在逐年增加［9－10］。因此，對(duì)其耐藥性的研究也越來越多。本研究用五味子對(duì)產(chǎn)MBL和非產(chǎn)MBL的鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)，旨在為臨床用藥提供參考。

我國中醫(yī)藥歷史悠久，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)中藥有清熱解毒、抗菌等作用［11－13］且具有相對(duì)安全、不良反應(yīng)小、價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點(diǎn)，在抗感染治療中存在巨大的開發(fā)潛力。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行了進(jìn)一步研究，通過體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)五味子水煎液對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC為0.016g/mL。產(chǎn)MBL的鮑曼不動(dòng)桿菌占所研究細(xì)菌株數(shù)的76%。雖然本研究表明五味子對(duì)產(chǎn)MBL的鮑曼不動(dòng)桿菌有一定的抗菌作用，但其在體內(nèi)的抑菌效果究竟如何尚有待研究，還需要進(jìn)一步分析并提取五味子的抗菌活性成分，進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，從而高效地應(yīng)用于臨床產(chǎn)MBL鮑曼不動(dòng)桿菌感染的治療。

由于多重耐藥菌株的大量產(chǎn)生，導(dǎo)致臨床抗菌藥物治療失敗，本研究嘗試采用一種中藥——五味子來進(jìn)行體外抗菌試驗(yàn)。五味子具有資源豐富、價(jià)格低廉、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。將中藥和西藥在抗感染治療中進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用可以最大限度地發(fā)揮中藥在臨床抗菌治療過程中的優(yōu)勢。本研究顯示，五味子對(duì)產(chǎn)和非產(chǎn)MBL的鮑曼不動(dòng)桿菌均有不同程度的抑菌作用。

［1］于亮，王梅，李玉臣，等.2007～2010年泰安醫(yī)院臨床主要病原菌分布及兩種主要非發(fā)酵菌的耐藥分析［J］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2011，5（16）：4766－4769.

［2］ 楊莉，韓立中，孫景勇，等.多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中僅黏菌素敏感菌株的分子流行病學(xué)研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2006，86（9）：592－595.

［3］ 可成友，康宏玲，高珍，等.北五味子主要成分測定方法的研究進(jìn)展［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17（4）：754－756.

［4］ 陳澤慧，田應(yīng)彪，李丹丹，等.五味子、石榴皮等中藥對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌體外的抑菌作用［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31（15）：1248－1251.

［5］ 張景皓，肖明霞，季萍.黃芩、黃連、五味子對(duì)5種多重耐藥菌抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.新疆醫(yī)學(xué)，2012，42（2）：4－7.

［6］Peleg AY，Seifert H，Paterson DL.Acinetobacter baumannii：emergence of a successful pathogen［J］.Clin Microbiol Rev，2008，21（3）：538－582.

［7］Kempf M，Rolain JM.Emergence of resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii in Europe：clinical impact and therapeutic options［J］.Int J Antimicrob Agents，2012，39（2）：105－114.

［8］Kim BN，Peleg AY，Lodise TP，et al.Management of meningitis due to antibiotic－resistant Acinetobacter species［J］.Lancet Infect Dis，2009，9（4）：245－255.

［9］Luna CM，Aruj PK.Nosocomial acinetobacter pneumonia［J］.Respirology，2007，12（6）：787－791.

［10］Oteo J，García－Estébanez C，Miguelá?ez S，et al.Genotypic diversity of imipenem resistant isolates of Acinetobacter baumannii in Spain［J］.J Infect，2007，55（3）：260－266.

［11］Rolain JM，Roch A，Castanier M，et al.Acinetobacter baumannii resistant to colistin with impaired virulence：a case report from France［J］.Infect Dis，2011，204（7）：1146－1147.

［12］Almeida AA，F(xiàn)arah A，Silva DA，et al.Antibacterial activity of coffee extracts and selected coffee chemical compounds against enterobacteria［J］.J Agric Food Chem，2006，54（23）：8738－8743.

［13］田應(yīng)彪，陳澤慧，楊名慧，等.16種中藥水煎液對(duì)MRSA和MSSA體外抑菌試驗(yàn)觀察［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29（11）：897－899.

Antibacterial activity of Schisandra to metallo－β－lactamase－producing Acinetobacter baumannii in vitro

Li Yanhong1，Zhang Jinghao2#，Li Wei1，Ji Ping1△
（1.Center for Clinical Laboratory，the first Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Xinjiang Urumqi 830054，China；2.Department of Clinical Laboratory，Huadong Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai 200040，China）

ObjectiveTo investigate the antibacterial activity of Schisandra to Acinetobacter baumannii including metallo－β－lactamase（MBL）－producing and non－MBL－producing stains in vitro.Methods75strains of Acinetobacter baumannii were preliminary screened for clinical isolates of MBL－producing strains，to which confirmatory tests of MBL producing were performed.Drug sensitivities of the Acinetobacter baumannii to 14antibacterial drugs were tested.In vitro antibacterial tests was adopted to determine the MIC of schisandra to 75strains of Acinetobacter baumannii（including MBL and non－MBL－producing Acinetobacter baumannii）.ResultsMBL confirmatory test showed that among the 50strains selected 38strains were positive accounted for 76%（38/50）.ConclusionSchisandra has some antibacterial effect on Acinetobacter baumannii especially MBL－producing Acinetobacter baumannii，and can be combined with western medicine in the treatment of Acinetobacter baumannii infection.

Schisandra； Acinetobacter baumannii； metallo－β－lactamase

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.008

A

1673－4130（2015）03－0306－02

2014－12－08）

李艷紅，檢驗(yàn)技師，主要從事微生物檢驗(yàn)方面的研究?！?/p>

，Email：jiping4847860＠163.com。#共同第一作者。