佘亞輝，韓媛媛，周光庭，賈芳巖

（亳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽 236800）

梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)

佘亞輝，韓媛媛，周光庭，賈芳巖

（亳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽 236800）

目的對(duì)ELISA法聯(lián)合化學(xué)發(fā)光法用于特異性梅毒抗體檢測(cè)的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法選取2014年1月至2014年4月于該院皮膚性病科就診患者，共628例。對(duì)患者血清采用ELISA法進(jìn)行初篩，再將檢測(cè)結(jié)果在復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)（0.5＜S/CO＜3）的樣本用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)檢，然后與梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）法平行測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果TPPA法檢測(cè)為陽(yáng)性的標(biāo)本為171例；ELISA法檢測(cè)符合該科梅毒陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本共162例，另外還有15例處于該科梅毒。經(jīng)化學(xué)發(fā)光法進(jìn)一步復(fù)檢，陽(yáng)性結(jié)果為9例，陰性結(jié)果為6例，并且此聯(lián)合檢測(cè)法得到的171例陽(yáng)性結(jié)果與TPPA法陽(yáng)性結(jié)果完全吻合。結(jié)論ELISA法與化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果與TPPA有很好的一致性。

化學(xué)發(fā)光法； 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定； 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)

梅毒是一種性傳播疾病，近年來(lái)感染率有上升的趨勢(shì)，但是由于技術(shù)原因，梅毒螺旋體尚不能進(jìn)行體外培養(yǎng)，而且在顯微鏡下也不宜觀察，因此目前梅毒螺旋體檢測(cè)主要還是以實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)為主要手段，血清學(xué)檢測(cè)又分非特異性和特異性梅毒螺旋體抗體檢測(cè)兩種，非特異抗體實(shí)驗(yàn)主要以RPR和TRUST為主，雖然方便、快速，但是特異性不高，因此目前主要作為抗梅治療之后的療效觀察和確認(rèn)新近感染及復(fù)發(fā)的目的。梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）為主，前者為初篩實(shí)驗(yàn)，后者為確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，化學(xué)發(fā)光法相對(duì)于上述兩種傳統(tǒng)方法學(xué)來(lái)說(shuō)是一種具有全自動(dòng)、定量、快速等特點(diǎn)的特異性抗體新檢測(cè)方法［1－2］。本文以TPPA結(jié)果為參考，ELISA法聯(lián)合化學(xué)發(fā)光法結(jié)果與其比較，進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2014年4月至亳州市人民醫(yī)院皮膚性病科就診的患者（年齡3～73歲，平均年齡33.2歲）血液標(biāo)本共628例，其中來(lái)自男性的標(biāo)本415例，來(lái)自女性的213例，標(biāo)本于室溫放置1h后離心分離血清，于－20℃保存。

1.2 儀器與試劑 ELISA檢測(cè)儀器為深圳愛(ài)康尤瑞納斯120全自動(dòng)酶免儀；化學(xué)發(fā)光儀器為美國(guó)雅培Architect i2000化學(xué)發(fā)光儀。ELISA試劑盒由英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司提供；TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供；化學(xué)發(fā)光試劑及定標(biāo)液均為美國(guó)雅培I2000定量檢測(cè)配套試劑。所有試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 方法

1.3.1 TPPA檢測(cè) 根據(jù)試劑盒操作說(shuō)明操作，陽(yáng)性以在U型培養(yǎng)板上聚集成散在樣判定。

1.3.2 化學(xué)發(fā)光檢測(cè) 試劑為雅培化學(xué)發(fā)光儀配套原裝試劑，根據(jù)試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行操作及結(jié)果判斷。

1.3.3 梅毒螺旋體抗體的ELISA檢測(cè) 對(duì)于結(jié)果處于本科室梅毒復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)范圍（0.5＜S/CO＜3）內(nèi)的結(jié)果進(jìn)一步采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)檢。S/CO≤0.5判斷為陰性，S/CO≥3判斷為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，方法間的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

628例就診患者中，ELISA法檢測(cè)為陽(yáng)性的為162例，陽(yáng)性檢出率為25.8%（162/628）；TPPA法檢測(cè)為陽(yáng)性的為171例，陽(yáng)性檢出率為27.2%（171/628）；兩種方法的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)ELISA法檢測(cè)結(jié)果在本科室梅毒復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)（0.5＜S/CO＜3）內(nèi)的結(jié)果（15例）進(jìn)一步采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)檢，得到9例陽(yáng)性結(jié)果和6例陰性結(jié)果，ELISA法與化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合檢出的陽(yáng)性標(biāo)本完全與TPPA法吻合。

3 討 論

梅毒是一種性傳染疾病，是一種復(fù)雜的慢性、系統(tǒng)性性可以侵害人的各種臟器，對(duì)人和社會(huì)的危害極大的疾病，而且因?yàn)槠湫再|(zhì)的特殊性，一旦試驗(yàn)結(jié)果出錯(cuò)，很容積引起家庭糾紛乃至醫(yī)療糾紛［3］，會(huì)對(duì)醫(yī)院、科室造成不良的影響。因此，現(xiàn)在醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室的做法一般都是先用ELISA法進(jìn)行初篩，對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本在第2天再用TPPA法復(fù)檢一次，這樣的做法能很大程度上保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，但是卻延長(zhǎng)了患者等待檢測(cè)結(jié)果的時(shí)間，也增加了檢驗(yàn)人員的工作量。那么如何能夠更好地解決這些問(wèn)題呢？筆者試著采用以下兩種方法來(lái)解決。

一個(gè)方法是采用ELISA法初篩。ELISA試劑盒包被的抗原是根據(jù)基因重組工程進(jìn)行合成的，可檢測(cè)血清中梅毒特異性抗體，在梅毒的各期都有非常高的靈敏度及特異性，而且采用兩步法可以有效避免因血清中抗體效價(jià)過(guò)高而產(chǎn)生的前帶現(xiàn)象［4－5］。但是也存在著一定的缺陷，那就是在梅毒感染的窗口期或老年人、腫瘤患者、孕婦、自身免疫性性疾病等患者的血清檢測(cè)中，會(huì)產(chǎn)生一些檢測(cè)結(jié)果處在臨界值附近的情況。國(guó)內(nèi)外有很多文章都報(bào)道過(guò)老年人，孕婦，癌癥患者的假陽(yáng)結(jié)果的病例［6－8］。有文獻(xiàn)報(bào)道，用同批號(hào)ELISA試劑測(cè)定5 000例健康人血清標(biāo)本和2 000例隨機(jī)選取的HBsAg陽(yáng)性血清標(biāo)本，分別得到陰性和陽(yáng)性參考血清的吸光度均值和標(biāo)準(zhǔn)差，橫軸為吸光度，縱軸為標(biāo)本數(shù)量，使用正態(tài)分布的u檢驗(yàn)，得到“灰區(qū)”的范圍為0.08～0.11［9］；又有文獻(xiàn)報(bào)道，ELISA“灰區(qū)”對(duì)于不同檢測(cè)項(xiàng)目和應(yīng)用的領(lǐng)域、地域的不同，其設(shè)置不能一概而論［10］。因此根據(jù)梅毒性質(zhì)的特殊性，本實(shí)驗(yàn)室結(jié)合自身情況，為了防止漏檢或假陽(yáng)性引起誤檢而造成的不必要的醫(yī)療糾紛制定了稍寬的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)（0.5＜S/CO＜3），檢測(cè)結(jié)果再次范圍內(nèi)的標(biāo)本都需要進(jìn)行復(fù)檢。本研究中有15例經(jīng)ELISA法檢測(cè)，結(jié)果處于復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)的標(biāo)本。經(jīng)化學(xué)發(fā)光復(fù)查結(jié)果為陰性標(biāo)本為6例，其中有3例為60歲以上老人和1例孕婦。

另一個(gè)方法是對(duì)待復(fù)檢標(biāo)本采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)檢。化學(xué)發(fā)光法作為一種新的檢測(cè)方法，從檢測(cè)到結(jié)果判定均由儀器自動(dòng)完成，具有操作方便，人為干擾少的優(yōu)點(diǎn)。雅培I2000化學(xué)發(fā)光法采用的是微粒子免疫技術(shù)來(lái)對(duì)血清或血漿梅毒特異性抗體進(jìn)行測(cè)定，反應(yīng)原理與ELISA相同，只不過(guò)是包被梅毒抗原的載體換為微粒子。反應(yīng)后對(duì)反應(yīng)液的發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)光子強(qiáng)度來(lái)反映血清中梅毒抗體的水平，強(qiáng)度越高說(shuō)明機(jī)體內(nèi)抗體水平越高。作為臨床化驗(yàn)室新引進(jìn)的一種確證實(shí)驗(yàn)，化學(xué)發(fā)光法既能夠檢測(cè)梅毒的IgG抗體又能檢測(cè)IgM抗抗體。其靈敏度和特異性相對(duì)TPPA法都有所提高［11］。對(duì)梅毒抗體的檢測(cè)來(lái)說(shuō)，化學(xué)發(fā)光法是一種可以替代TPPA法的新方法［12］，并且對(duì)弱陽(yáng)性標(biāo)本具有較強(qiáng)的檢出能力，對(duì)于本次實(shí)驗(yàn)，TPPA方法檢測(cè)出的171例陽(yáng)性標(biāo)本，化學(xué)發(fā)光法結(jié)果均為陽(yáng)性，因此兩者之間的符合率較好。其自動(dòng)化程度高，是一種應(yīng)用前景非常好的梅毒抗體的檢測(cè)方法［13］。

綜上所述，對(duì)大中型醫(yī)院來(lái)說(shuō)，采用ELISA法初篩，然后對(duì)可疑標(biāo)本進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢可以防止ELISA法的漏檢及誤診，相對(duì)TPPA方法繁瑣、干擾因素多的缺點(diǎn)，此兩種方法聯(lián)合檢測(cè)不但能夠保證標(biāo)本結(jié)果的準(zhǔn)確而且也能達(dá)到醫(yī)院大批量標(biāo)本的篩查要求。真正做到患者結(jié)果的準(zhǔn)確、及時(shí)地發(fā)放，更符合以人為本、一切為患者服務(wù)的要求［14］。對(duì)于中小型醫(yī)院采用手工ELISA法初篩，再對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行TPPA確證，能達(dá)到同樣的診斷效率。

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Evaluation of combined detection of antibodies specific for syphilis

She Yahui，Han Yuanyuan，Zhou Guangting，Jia Fangyan
（Department of Clinical Laboratory，People′s Hospital of Bozhou City，BoZhou，Anhui 236800，China）

ObjectiveTo evaluate ELISA combined with chemiluminescence in the detection of syphilis specific antibodies.Methods628patients who came to our hospital and treated in dermatology department were recruited in the study from January 2014to April 2014.Patients′serum samples were detected by using ELISA firstly，and then the samples，the test rusults of which were within the recheck standard range（0.5＜S/CO＜3）were retested by using chemiluminescence.And then the results of parallel Treponema pallidum gelatin agglutination test（TPPA）measurement were compared with.ResultsThere were 171cases of TPPA positive samples detected and 162cases meets the positive criteria for syphilis（S/CO≥3.0）in the hospital.In addition to that，15 cases of syphilis detected were within the recheck standard range.In the samples rechecked by using chemiluminescencea，there were 9cases of positive results，and 6cases of negative results.171cases of positive results were detected by the combined method，which were consistent with TPPA.ConclusionThe detection results of ELISA combined with chemiluminescence detection are consistent with that of TPPA.

chemiluminescence； enzyme－linked immunosorbent assay； treponema pallidum particle assay

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.016

A

1673－4130（2015）03－0324－02

2014－10－15）

佘亞輝，男，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)的研究。