高 漫，鄒遠(yuǎn)嫵，白廣紅，梁亞萍

（陜西省結(jié)核病防治院檢驗(yàn)科，陜西 西安 710100）

Xpert MTB/RIF Assay在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用

高 漫，鄒遠(yuǎn)嫵，白廣紅，梁亞萍

（陜西省結(jié)核病防治院檢驗(yàn)科，陜西 西安 710100）

目的對(duì)Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌（MTB）方法進(jìn)行臨床研究，評(píng)價(jià)其在結(jié)核病診治中的應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用Xpert MTB/RIF法檢測(cè)結(jié)核患者的MTB，以BACTEC MGIT 960培養(yǎng)法為參考方法，獲得該方法的靈敏度、特異度。結(jié)果

對(duì)123例結(jié)核患者的臨床樣本進(jìn)行Xpert MTB/RIF法檢測(cè)、BACTEC MGIT 960培養(yǎng)及細(xì)菌涂片抗酸染色法檢查，其靈敏度和特異度分別為65.9%、47.2%、31.2%和100.0%、96.0%、100.0%。結(jié)論Xpert MTB/RIF檢測(cè)MTB速度快，靈敏度高，特異度強(qiáng)，對(duì)結(jié)核患者的早期診斷及治療有著重要的意義。

結(jié)核分枝桿菌； Xpert MTB/RIF檢測(cè)； 特異度； 靈敏度

近年來(lái)，結(jié)核病患者數(shù)量呈上升趨勢(shì)，影像學(xué)檢查與細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查是結(jié)核病診斷的主要依據(jù)，但是對(duì)于早期的病例，患者特征不明顯，影像學(xué)檢查難以確認(rèn)，細(xì)菌學(xué)檢查傳統(tǒng)的涂片法與漂浮集菌法陽(yáng)性率低［1］，L－J培養(yǎng)法周期長(zhǎng)［2］。由美國(guó)BD公司生產(chǎn)的BACTEC MGIT 960系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌（MTB）陽(yáng)性率較高、周期較短，但培養(yǎng)周期平均仍需12天左右［3］。為尋求一種特異度強(qiáng)與靈敏度高，檢測(cè)周期短的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)結(jié)核患者早期診斷與治療至關(guān)重要。由美國(guó)Cepheid公司研發(fā)生產(chǎn)的Xpert MTB/RIF方法操作簡(jiǎn)單、快捷，可以在2小時(shí)內(nèi)完成MTB復(fù)合群和利福平耐藥性的檢測(cè)并得出結(jié)果報(bào)告［4］，對(duì)于結(jié)核患者的早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療提供了有效的方法。本研究對(duì)Xpert MTB/RIF檢測(cè)MTB方法進(jìn)行臨床研究，以評(píng)價(jià)其檢測(cè)能力及在結(jié)核病診治中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究的試驗(yàn)組標(biāo)本是收集本院2013年8月至2014年1月肺結(jié)核住院患者灌洗液標(biāo)本123例作為試驗(yàn)組，男性78例，年齡19～75歲，平均年齡47歲；女性45例，年齡20～68歲，平均年齡44歲。對(duì)照組標(biāo)本為收集的本院最終確診為肺結(jié)核以外的肺外結(jié)核患者灌洗液標(biāo)本25例。

1.2 儀器與試劑 Xpert MTB/RIF儀器及試劑由美國(guó)Cepheid公司研發(fā)生產(chǎn)，BACTEC MGIT 960系統(tǒng)及試劑由美國(guó)BD公司研發(fā)生產(chǎn)。

1.3 方法 Xpert MTB/RIF檢測(cè)方法采用GeneXpert檢測(cè)系統(tǒng)，是一種半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR體外診斷技術(shù)，針對(duì)rpoB基因81bp利福平耐藥核心區(qū)間（RRDR）設(shè)計(jì)引物、探針，檢測(cè)其是否發(fā)生突變，進(jìn)而用于診斷患者是否感染MTB，以及是否對(duì)利福平耐藥（rpoB序列存在突變）。操作步驟：灌洗液與試劑按2∶1混合，加入2mL液體到試劑盒內(nèi)，試劑盒放入機(jī)器（手工操作結(jié)束），樣品自動(dòng)洗滌和過(guò)濾，自動(dòng)超聲破碎樣品，釋放核酸，DNA與PCR試劑混合，半巢式熒光定量PCR擴(kuò)增和檢測(cè)，打印結(jié)果。以H37Rv為陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)進(jìn)行Xpert MTB/RIF檢測(cè)、BACTEC MGIT 960培養(yǎng)、涂片抗酸染色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，檢測(cè)結(jié)果采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 試驗(yàn)組123例臨床灌洗液標(biāo)本的檢測(cè) 見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)照組25例肺外結(jié)核患者灌洗液標(biāo)本的檢測(cè) 見(jiàn)表2。

3 討 論

試驗(yàn)組結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），Xpert MTB/RIF檢測(cè)方法靈敏度高于BACTEC MGIT 960方法與涂片抗酸染色法。對(duì)照組顯示，Xpert MTB/RIF檢測(cè)方法與“金標(biāo)準(zhǔn)”BACTEC MGIT 960方法和涂片抗酸染色法特異度強(qiáng)［5］，BACTEC MGIT 960方法對(duì)照組中的1例陽(yáng)性確認(rèn)為試驗(yàn)過(guò)程中造成的污染。

MTB生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，涂片抗酸染色法陽(yáng)性率低但其成本低，操作簡(jiǎn)單，適用于基層醫(yī)院；BACTEC MGIT 960系統(tǒng)培養(yǎng)陽(yáng)性的菌株還需進(jìn)一步鑒定是NTM或MTB，為MTB才能進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，為NTM則不能進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，且成本高，適用于大醫(yī)院；Xpert MTB/RIF最大程度簡(jiǎn)化MTB檢測(cè)，且不受NTM影響［6］，將BACTEC MGIT 960需至少3周才能完成的MTB及其利福平耐藥監(jiān)測(cè)縮短為2小時(shí)［7］，且一次完成，操作簡(jiǎn)單、易學(xué)，手動(dòng)時(shí)間不超過(guò)5分鐘，檢測(cè)結(jié)果不會(huì)因人而異，整個(gè)檢測(cè)在一個(gè)密閉環(huán)境中進(jìn)行，對(duì)操作者和周?chē)h(huán)境安全，成本與BACTEC MGIT 960成本相當(dāng)。對(duì)于手動(dòng)操作過(guò)多的試驗(yàn)，Xpert MTB/RIF的操作在很大程度上避免了標(biāo)本的污染和交叉感染，有效防止了假陽(yáng)性或污染的出現(xiàn)。Xpert MTB/RIF完全整合了傳統(tǒng)PCR檢測(cè)所需的三個(gè)步驟，又將樣品準(zhǔn)備、擴(kuò)增、定量檢測(cè)進(jìn)行統(tǒng)一，只需樣品準(zhǔn)備，核算提取、核酸擴(kuò)增、序列檢測(cè)都是儀器內(nèi)進(jìn)行，無(wú)需特殊實(shí)驗(yàn)室，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單。

缺點(diǎn)是Xpert MTB/RIF檢測(cè)依賴于樣品中存在的MTB數(shù)目，正確采集、處理和存放標(biāo)本，才能獲得可靠的結(jié)果。Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性不一定表示存在有生命力的MTB，經(jīng)抗菌藥物治療后MTB DNA可能仍存在，BACTEC MGIT 960培養(yǎng)陽(yáng)性的前提是標(biāo)本中存在有生命力的MTB［8］，所以，Xpert MTB/RIF不能作為評(píng)估治療成功或失敗的指標(biāo)，但Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率高于BACTEC MGIT 960，且檢測(cè)所需時(shí)間僅為2小時(shí)，臨床可根據(jù)患者病情選擇檢測(cè)方法。

［1］ 錢(qián)雪琴，吳文娟，盧水華.采用快速離心沉淀法檢測(cè)初診肺結(jié)核患者痰內(nèi)抗酸桿菌［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（1）：141－142.

［2］吳學(xué)兵，陸彬，桂曉虹，等.液體MGIT培養(yǎng)法在結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用評(píng)估［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28（3）：211－214.

［3］梁亞萍，高漫.BACTEC MGIT 960用于結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng)的初步評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，12（6）：521－522.

［4］ 張治國(guó)，歐喜超，孫倩，等.利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性的研究［J］.中國(guó)防癆雜志，2013（1）：13－16.

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［6］唐神結(jié)，胡忠義.結(jié)核病臨床診治進(jìn)展年度報(bào)告：2012年第一部分結(jié)核病臨床診斷［J］.中國(guó)防癆雜志，2013，6（6）：405－426.

［7］范齊文，郭建，張慧漲，等.M/XDR－TB的快速分子檢測(cè)和耐藥特征分析［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2011，31（12）：1133－1137.

［8］ 中國(guó)防癆協(xié)會(huì)臨床專業(yè)委員會(huì).結(jié)核病臨床診治進(jìn)展年度報(bào)告（2012年）：第一部分結(jié)核病臨床診斷［J］.中國(guó)防癆雜志，2013，35（6）：405－426.

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.058

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2014－09－24）