徐娜++楊毅梅

摘要：目的 尋找快速鑒別廣州管圓線蟲死活的染色方法。方法 用中性紅、臺(tái)盼藍(lán)和美藍(lán)三種染液對(duì)活或死廣州管圓線蟲幼蟲進(jìn)行染色。結(jié)果 中性紅染液和美藍(lán)染液可以使死亡的廣州管圓線蟲幼蟲染色，活蟲不染色且活力不受染色劑影響；臺(tái)盼藍(lán)染液對(duì)廣州管圓線蟲死、活幼蟲均不染色。結(jié)論 中性紅和美藍(lán)染液可快速鑒別廣州管圓線蟲幼蟲的死活。

關(guān)鍵詞：廣州管圓線蟲；幼蟲；中性紅；臺(tái)盼藍(lán)；美藍(lán)

Experimental Study on Determination of Viability of the Larvae of Angiostrongylus Cantonensis

XU Na，YANG Yi-mei

（Basic Medical College of Dali University，Dali 671000，Yunnan，China）

Abstract：Objective To exploretheprompt methods indeterminationof viabilityof the larvae of Angiostrongylus cantonensis. Methods The larvae of Angiostrongylus cantonensis larvae were stained with neutral red、trypan blue or methylene blue. Results The dead Angiostrongylus cantonensis larvae were observed when stained with neutral red 、methylene blue.The vital larvae were unstained with all three stains.Trypan blue do not staind the larvae neither live or dead.Conclusion Both neutral red and methylene blue staining are prompt method in determination of viability of the larvae of Angiostrongylus cantonensis.

Key words：Angiostrongylus cantonensis；Larvae；Neutral red；Trypan blue；Methylene blue

廣州管圓線蟲病是一種食源性寄生蟲病，主要是由于生食或半生食含有廣州管圓線蟲三期幼蟲的螺螄或被其污染的蔬菜而引起致病。在篩選廣州管圓線蟲的殺蟲藥物時(shí)，常需要迅速而便捷的判斷廣州管圓線蟲的生命狀態(tài)。據(jù)有研究者報(bào)道，用染料對(duì)蟲體進(jìn)行染色可以判斷蟲體的死活[1]，但用于判斷廣州管圓線蟲幼蟲死活的染色方法卻尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)比較3種染色方法，尋找快速鑒別廣州管圓線蟲幼蟲死活的染色方法。

1資料與方法

1.1一般資料 ①中性紅染液：用ph為7.4的PBS緩沖液配制，濃度為0.1%。②臺(tái)盼藍(lán)染液：用ph為7.4的PBS緩沖液配制，濃度為0.4%。③美藍(lán)染液：用95%酒精配制，濃度為1.4%。④廣州管圓線蟲幼蟲：從本實(shí)驗(yàn)室保種福壽螺體內(nèi)獲得。

1.2方法

1.2.1廣州管圓線蟲幼蟲的獲取

1.2.1.1活蟲的獲取 取本實(shí)驗(yàn)室保種福壽螺去殼剁碎后放入鹽酸胃蛋白酶消化液中消化中8h，分別用80目和160目篩子對(duì)消化液進(jìn)行過(guò)濾，取剩余消化液沉淀2h后的沉渣，加適量生理鹽水稀釋，即獲得活性良好廣州管圓線蟲幼蟲的混懸液。

1.2.1.2 死蟲的獲取 吸取活幼蟲沉渣2ml放入離心管，加入2ml生理鹽水，在盛水燒杯中煮沸（95℃）1min。

1.2.2 染色方法

1.2.2.1 活蟲染色 ①中性紅染色：取活廣州管圓線蟲幼蟲混懸液四滴和一滴染液于載玻片上混勻，隨后加蓋玻片放入顯微鏡下觀察1h。②臺(tái)盼藍(lán)染色：取活廣州管圓線蟲幼蟲混懸液九和一滴染液于載玻片上混勻，隨后加蓋玻片放入顯微鏡下觀察1h。③美藍(lán)染色：取活廣州管圓線蟲幼蟲混懸液九和一滴染液于載玻片上混勻，隨后加蓋玻片放入顯微鏡下觀察1h。

1.2.2.2死蟲染色 死蟲染色方法同活蟲染色方法。

2結(jié)果

2.1用0.1%中性紅、0.4%臺(tái)盼藍(lán)和1.4%美藍(lán)三種染液鑒別廣州管圓線蟲幼蟲死活結(jié)果見表1。死亡幼蟲可被0.1%中性紅染料染成紅色或被1.4%美藍(lán)染料染成藍(lán)色，但不能被0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色；活的廣州管圓線蟲幼蟲均不能被這三種染料染色。

2.2從染色時(shí)間上來(lái)看，美藍(lán)染液可以迅速的使死幼蟲著；中性紅使蟲體的著色速度相對(duì)較慢：1min可使大部分死亡幼蟲染色，6min可使全部蟲體染色但染色成都不均，15min可使全部蟲體均勻的染成深紅色。因而，在染色時(shí)間上看，美藍(lán)染液的效率更高。

3討論

廣州管圓線蟲病是近年來(lái)多發(fā)的人獸共患寄生蟲病，嚴(yán)重時(shí)可以導(dǎo)致患者死亡，控制傳染源，選擇有效的殺蟲藥物是防治該病的重要環(huán)節(jié)。在篩選殺蟲藥物時(shí)，往往是通過(guò)蟲體是否死亡來(lái)判斷其藥效，因而簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的判斷蟲體死活是進(jìn)行相應(yīng)研究的前體。而用染色法觀察廣州管圓線蟲幼蟲的死活，尚未見報(bào)道，而染色法來(lái)判斷旋毛蟲、秀麗隱桿線蟲、弓形蟲方面的研究已經(jīng)屢見報(bào)道。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示中性紅與美藍(lán)染液染色，都能較好的檢測(cè)廣州管圓線蟲的死活，實(shí)驗(yàn)室可任選一種。

廣州管圓線蟲死幼蟲能被中性紅和美藍(lán)染液染成紅色或藍(lán)色，兩種染液對(duì)活幼蟲卻均不著色。在顯微鏡下幼蟲的死活極易觀察辨認(rèn)，操作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備，且可靠性強(qiáng)。因而考慮可以將次判斷幼蟲死活的方法進(jìn)行推廣。

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