劉卓瓊，陳麗麗，楊斯博(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，哈爾濱150001)

急性淋巴細胞白血病患兒骨髓組織中miR-155表達變化及意義

劉卓瓊，陳麗麗，楊斯博
(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，哈爾濱150001)

摘要:目的觀察急性淋巴細胞白血病( ALL)患兒骨髓組織中miR-155表達變化，并探討其臨床意義。方法選擇ALL患兒46例(觀察組)，非血液病兒童17例(對照組)，采用qRT-PCR檢測各組miR-155，并分析miR-155表達與ALL臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果觀察組及對照組miR-155相對表達量分別為( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3 ±1.2)×10－4，兩組比較，P＜0.05。觀察組低危型、中危型、高危型者miR-155相對表達量分別為( 3.30±1.15)× 10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30±2.15)×10－4，兩兩比較，P均＜0.05;治療前及治療第33天miR-155相對表達量分別為( 9.30±4.15)×10－4、( 3.30±0.15)×10－4，兩者比較，P＜0.05。結(jié)論ALL患兒骨髓組織miR-155表達升高，miR-155高表達與兒童ALL的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞:血液疾病;急性淋巴細胞白血病;微小核糖核酸155

急性淋巴細胞白血病( ALL)是兒童最常見的一種惡性腫瘤，是指一類以淋巴母細胞失調(diào)增生和分化異?；蚍只茏?，形成大量非成熟白細胞為特征的快速進展型白血病，約占急性白血病的70%［1］。隨著近幾十年來對白血病治療的深入研究，兒童ALL的生存率有了一定程度的提高，ALL的治愈率已達80%，但仍有約25%的患兒在血液、生殖、神經(jīng)等系統(tǒng)再次發(fā)生病變［2］。近年來更多研究表明，非編碼的miRNA在白血病的發(fā)生、發(fā)展、臨床表現(xiàn)和預(yù)后中均有影響。因此本研究觀察了ALL患兒骨髓組織中miR-155表達變化，并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的ALL患兒46例(觀察組)，男24例，女22 例;年齡5.2～14.8歲，中位年齡9.1歲;＜10歲20例，≥10歲26例。診斷均符合全國小兒白血病會議制定的ALL標準診斷［3］。病理分型為B淋巴細胞性38例，T淋巴細胞性8例;危險度分型［4，5］中低危型20例，中危型16例，高危型10例。另選17例非血液病兒童作為對照組，男9例，女8例;年齡2.8 ～10.3歲，中位年齡8歲。兩組一般資料具有可比性。本研究得到哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準，且所有入組兒童家長均簽署知情同意書。

1.2 miR-155檢測ALL患兒于治療前、治療第33天采集骨髓各3 mL，對照組患兒于入院時采集骨髓3 mL，加入EDTA抗凝保存?zhèn)溆?。TRIzol法提取總RNA，Nanodrop1000檢測總RNA的濃度和純度，將已制備的總RNA置于－80℃保存?zhèn)溆?。取RNA 0.05 g，使用TaqMan MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄。每20 μL反應(yīng)體系包括TaqMan MicroRNA Assay( 20×) 1.00 μL、Product from RT reaction 1.33 μL、

TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL、Nuclease-free water 7.67 μL。將反應(yīng)管編號，每個反應(yīng)管中加入10.0 μL TaqMan 2×Universal PCR Master Mix和7.67 μL Nuclease-free water混勻;每個反應(yīng)管中加入相應(yīng)TaqMan MicroRNA Assay 1 μL;每個反應(yīng)管中加入相應(yīng)RT reaction product;將反應(yīng)管密封，放入PCR反應(yīng)儀，設(shè)置反應(yīng)條件為95℃、10 min，95℃、15 s，60℃、60 s，共50個循環(huán);每次檢測均設(shè)立空白陰性對照、陽性對照，每個標本采用3個復(fù)孔。反應(yīng)完成后，電腦自動得出熔解曲線。以GAPDH為內(nèi)參，所測定的miR-155的相對表達量以2－ΔΔCt表示。1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以珋x±s表示，多組間比較采用Kruskal Wallis H秩和檢驗，兩組間比較采用Wilcoxan秩和檢驗。P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

觀察組及對照組miR-155相對表達量分別為( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3±1.2)×10－4，兩組比較，P ＜0.05。觀察組年齡≥10、＜10歲者miR-155相對表達量分別為( 3.2±0.5)×10－4、( 3.3±0.2)×10－4，男性、女性分別為( 3.8±0.5)×10－4、( 4.2±0.4)×10－4，B淋巴細胞性、T淋巴細胞性者分別為( 1.78±0.17)× 10－4、( 2.30±1.15)×10－4，兩者比較，P均＞0.05。觀察組低危型、中危型、高危型者miR-155相對表達量分別為( 3.30±1.15)×10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30 ±2.15)×10－4，兩兩比較，P均＜0.05;治療前及治療第33天miR-155相對表達量分別為( 9.30±4.15)× 10－4、( 3.30±0.15)×10－4，兩者比較，P＜0.05。

3　討論

miRNA是一類進化上保守、在生命中起重要調(diào)控作用的分子［6］。miRNA是一類由內(nèi)源基因編碼的長度為19～25個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，可以通過調(diào)節(jié)一些信號分子來調(diào)控細胞死亡、增殖、分化、發(fā)育等。miRNA可以調(diào)節(jié)造血功能來影響白血病患者的白細胞數(shù)量、染色體形態(tài)等［7，8］，促進或抑制病情發(fā)展，判斷治療效果［9］。有文獻［10］表明，白血病患者miR-128、miR-146a、miR-155、miR-181a和miR-195表達異常，但6個月治療后表達均有顯著改變。然而，在兒童ALL中有關(guān)miR-155的研究不多。

miRNA可直接調(diào)控細胞的增殖分化或者凋亡，影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸［11］。越來越多的研究表明，miR-155在許多腫瘤中過表達，在致癌過程中起重要作用。在甲狀腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、胰腺癌、肺癌等實體瘤中，miR-155高表達預(yù)示預(yù)后不良。Nikiforava等［12］發(fā)現(xiàn)乳頭狀型、濾泡狀癌型、末分化癌型甲狀腺癌miR-155表達分別上調(diào)9.5、5.5和13.2倍。Habbe等［13］發(fā)現(xiàn)非侵襲性胰腺癌癌前病變-胰管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤組織中miRNA-155高表達。本研究顯示，觀察組miR-155相對表達量高于對照組，且隨著危險程度的升高而增加，隨著治療時間的延長而降低，表明miR-155與兒童ALL危險度和預(yù)后密切相關(guān)。

可見，miRNA不僅可作為ALL等疾病的診斷工具，同時也可作為治療疾病的靶點［14］。

參考文獻:

［1］McCredie M，Williams S，Coates M.Cancer mortality in migrants from the British isles and continental Europe to New South Wales，Australia，1975-1995［J］.Int J Cancer，1999，83( 2) : 179-185.

［2］Bartel DP.MicroRNA: genomics，biogenesis，mechanism，and function［J］.Cell，2004，116( 2) : 281-297.

［3］Richardson BC，Strahler JR，Pivirotto TS，et al.Phenotypic and functional similarities between 5-azacytidine-treated T cells and a T cell subset in patients with active systemic lupus erythematosus ［J］.Arthritis Rheum，1992，35( 6) : 647-662.

［4］Richardson B，Scheinbart L，Strahler J，et al.Evidence for impaired T cell DNA methylation in systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Rheum，1990，33( 11) :1665-1673.

［5］陳純，方建培，黃紹良.SUMS99方案治療兒童急性淋巴細胞白血病的長期療效［J］.中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2007，28 ( 2) : 209-213.

［6］Bartel DP.MicroRNAs: genomics，biogenesis，mechanism，and function［J］.Cell，2004，116( 2) : 281-297.

［7］Slezak-Prochazka I，Durmus S，Kroesen BJ，et al.MicroRNAs，macrocontrol: regulation of miRNA processing［J］.RNA，2010，16( 6) : 1087-1095.

［8］Esau CC，Monia BP.Therapeutic potential for microRNAs［J］.Adv Drug Deliv Rev，2007，59( 2-3) : 101-114.

［9］He L，Thomson JM，Hemann MT，et al.A microRNA polycistron as a potential human oncogene［J］.Nature，2005，435( 7043) :828-833.

［10］Duyu M，Durmaz B，Gunduz C，et al.Prospective evaluation of whole genome MicroRNA expression profiling in childhood acute lymphoblastic leukemia［J］.Biomed Res Int，2014，( 2014) : 967585.

［11］Tang H，Kong Y，Guo J，et al.Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22［J］.Cancer Lett，2013，340( 1) : 72-81.

［12］Nikiforova MN，Tseng GC，Steward D，et al.MicroRNA expression profiling of thyroid tumors: biological signifi-cance and diagnostic utility［J］.J Clin Endocrinol Metab，2008，93( 5) :1600-1608.

［13］Habbe N，Koomtra JB，Mendell JT，et al.MicroRNA miR-155 is abiomarker of early pancreatic neoplasia［J］.Cancer Biol Ther，2009，8( 4) : 340-346.

［14］Mian YA，Zeleznik-Le NJ.MicroRNAs in leckemias : emerging diagnostic tools and therapeutic targets［J］.Curr Drug Targets，2010，11( 7) : 801-811.

收稿日期:( 2015-04-20)

文章編號:1002-266X( 2015) 31-0056-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R720.5

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.022