童建林 饒常紅 黃渤

本文通過FQ-PCR檢測BALF（Bronchoalveolar lavage fluid）中結(jié)核桿菌-DNA對肺結(jié)核的診斷進(jìn)行分析研究，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2013年12月-2014年11月期間本院收治的肺結(jié)核患者110例作為本次研究的對象，其中男67例，女43例，年齡17~68歲，平均（43.5±2.2）歲。所有患者臨床診斷表現(xiàn)為胸片或胸部CT檢查顯示肺部有病變，肺部單側(cè)或雙側(cè)有斑塊狀或片狀陰影、結(jié)節(jié)等[1-2]。所有患者自愿參與本次研究，且簽訂了知情同意書。

1.2 方法 所有患者均實施纖支鏡檢查、活檢、刷檢，BALF中結(jié)核桿菌-DNA等檢查，且在這些檢查之前，對患者實施血常規(guī)、血凝四項等檢查[3]。檢查中使用到的設(shè)備、儀器主要有：纖支鏡型號為PENTAX，PCR擴(kuò)增儀由美國PE公司提供；熒光檢測儀（DA7600）、DNA提取液、TaG-DNA酶、熒光標(biāo)記引物、定量標(biāo)準(zhǔn)品（TB-DNA濃度：106基因拷貝/μL）由中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供。檢查步驟如下：（1）支氣管鏡檢查：按照支氣管鏡儀器使用說明書，進(jìn)行相關(guān)的操作檢查，并讓患者做好相關(guān)的檢查前準(zhǔn)備，參照患者的X線檢查、CT檢查結(jié)果，在支氣管鏡下對患者的肺部進(jìn)行觀察，如果有可以進(jìn)行活檢的病灶，則使用活檢鉗在病灶上取下3~5塊的組織，使用10%福爾馬林固定后進(jìn)行病理檢驗。一次性細(xì)胞刷對病變部位進(jìn)行涂片、抗酸染色、細(xì)胞學(xué)檢查，生理鹽水支氣管灌洗，收集灌洗液，進(jìn)行BALF結(jié)核桿菌DNA檢查[4-5]。如果在支氣管鏡下沒有發(fā)現(xiàn)可以進(jìn)行活檢的病灶，需要根據(jù)患者的病變位置，刷檢后再進(jìn)行灌洗。（2）BALF結(jié)核桿菌DNA檢查處理：取灌洗液1~1.5 mL，在轉(zhuǎn)速為12 000 r/min的離心機(jī)中離心5 min；取沉淀物，加入無菌生理鹽水1 mL，振蕩混勻，然后在轉(zhuǎn)速12 000 r/min的離心機(jī)中離心5 min；取沉淀物，加入50 mL DNA提取液混勻，在100 ℃恒溫下處理10 min；然后在4 ℃冰箱中冷卻至室溫后，再進(jìn)行12 000 r/min離心5 min，取上清液2μL加入PCR反應(yīng)管，8000 r/min離心數(shù)秒，然后將反應(yīng)管取出放入PCR儀，在PCR反應(yīng)后行熒光FQ-PCR檢測，記錄讀數(shù)。取灌洗液5 mL，離心、沉淀、涂片，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。支氣管鏡無菌鹽水沖洗后，取沖洗液于無菌瓶中，進(jìn)行熒光定量檢查。本次研究中，所有的實驗室檢查步驟中，使用到的試劑均為相應(yīng)的檢查儀器配套試劑，儀器的操作需要嚴(yán)格的按照操作說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) 針對本次研究中各種檢查方法下的結(jié)核桿菌-DNA陽性率進(jìn)行觀察分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 15.0進(jìn)行處理分析，計量資料采用（±s）表示，計數(shù)資料采用 字2檢驗、Wilcoxon檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 熒光FQ-PCR檢測與金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果比較 本次研究中確診為肺結(jié)核的患者有44例，所占的比例為40.00%（44/110）。熒光定量FQ-PCR檢測的BALF肺結(jié)核的敏感度為63.64%，特異度為96.97%，準(zhǔn)確度為83.64%。陽性預(yù)測值=93.33%，陰性預(yù)測值=80.00%，陽性似然比=21.00，陰性似然比=0.37。FQ-PCR檢測BALF中結(jié)核桿菌-DNA結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比較見表1。

表1 熒光FQ-PCR檢測與金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果比較 例

2.2 三種肺結(jié)核診斷結(jié)果比較 FQ-PCR檢測的敏感性明顯高于痰涂片、刷檢涂片，三種方法診斷肺結(jié)核的敏感性比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。隨機(jī)20次對清洗后的支氣管鏡用無菌生理鹽水沖洗，沖洗液實時熒光定量PCR檢測結(jié)果為全陰性。

表2 三種肺結(jié)核診斷結(jié)果比較 例（%）

3 討論

在肺結(jié)核的臨床診斷中，實驗室檢查是重要的手段，通過實驗室檢查，可以將肺結(jié)核疾病的傳染源進(jìn)行明確。傳統(tǒng)的涂片檢查，操作簡單、快速，但是其檢驗的準(zhǔn)確性較差[6]。隨著臨床檢驗技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，F(xiàn)Q-PCR檢驗技術(shù)產(chǎn)生，因其具有精確、簡便、快速等優(yōu)點，所以在臨床檢驗中被廣泛的應(yīng)用[7]。本文FQ-PCR檢測BALF中結(jié)核桿菌-DNA對肺結(jié)核的診斷進(jìn)行了分析研究，結(jié)果顯示FQ-PCR檢測BALF中結(jié)核桿菌-DNA的陽性率明顯的高于涂片、刷檢[8-9]。

在本次研究中熒光定量FQ-PCR檢測的BALF肺結(jié)核的敏感度為63.64%，特異度為96.97%，準(zhǔn)確度為83.64%。陽性預(yù)測值=93.33%；陰性預(yù)測值=80.00%；陽性似然比=21.00；陰性似然比=0.37，顯著優(yōu)于其他檢驗方法的檢查結(jié)果。FQ-PCR檢測BALF中結(jié)核桿菌-DNA的整個檢驗過程密閉進(jìn)行，實現(xiàn)了實時動態(tài)監(jiān)測，有效地減少了檢驗中的污染，減少了假陽性、假陰性的發(fā)生，其臨床診斷準(zhǔn)確性較高。在肺結(jié)核的診斷中，F(xiàn)Q-PCR檢測方法的應(yīng)用自動化程度較高，可以進(jìn)行定性定量檢查，有較高的準(zhǔn)確性、特異性和靈敏性，結(jié)合本次研究的結(jié)果，F(xiàn)Q-PCR檢測在肺結(jié)核的診斷中有較高的應(yīng)用價值，可以進(jìn)行推廣應(yīng)用[10-12]。

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