陸才金，蘇東星，吳縣斌，石海英

(南寧市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣西 南寧 530031)

疣狀胃炎組織p16、VEGF表達(dá)及其與Hp的相關(guān)性研究

陸才金，蘇東星，吳縣斌，石海英

(南寧市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣西 南寧 530031)

目的 探討p16蛋白、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在疣狀胃炎(VG)組織中的表達(dá)及其與幽門螺桿菌(Hp)的關(guān)系。方法選取2013年1～9月我院胃鏡室收集并經(jīng)胃鏡確診為VG的胃黏膜活檢標(biāo)本60例和正常胃黏膜活檢標(biāo)本30例，采用免疫組化SP法檢測(cè)VG組織中p16、VEGF的表達(dá)，并判斷有無(wú)Hp感染。采用Spearman相關(guān)性分析方法分析p16、VEGF在VG組織中的表達(dá)與Hp的相關(guān)性。結(jié)果VG的Hp感染率明顯高于正常胃黏膜組織(P＜0.05)；VG組織中p16的表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常胃黏膜組織(P＜0.05)，而VG組織中VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常胃黏膜組織(P＜0.05)；Hp感染與VG組織中p16、VEGF的表達(dá)均呈正相關(guān)(rp16=0.261，rVEGF=0.268，P均＜0.05)。結(jié)論p16、VEGF的表達(dá)及Hp感染均參與了VG的形成發(fā)展過程，p16、VEGF表達(dá)與Hp感染起協(xié)同作用。

疣狀胃炎；p16；VEGF；Hp感染

疣狀胃炎(Verrucous gastritis，VG)是指胃黏膜表面發(fā)生病變而呈疣狀或痘診狀突起的一種慢性胃炎，又稱痘疹狀胃炎和慢性糜爛性胃炎[1]。有研究[2-3]指出，VG與胃癌的發(fā)生及進(jìn)展具有密切關(guān)系，而幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是誘發(fā)VG形成的重要因素之一，同時(shí)也被認(rèn)為是誘發(fā)VG癌變的主要誘因之一，大部分胃炎和胃癌患者均伴有Hp感染發(fā)生。本研究通過檢測(cè)VG和正常胃黏膜組織中p16蛋白、VEGF的表達(dá)及Hp感染發(fā)生情況，研究VG組織中p16蛋白、VEGF的表達(dá)與Hp感染的關(guān)系，以探討p16蛋白、VEGF的表達(dá)與Hp感染在VG的形成發(fā)展過程中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2013年9月我院胃鏡室收集的VG胃黏膜活檢標(biāo)本60例，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)鏡分會(huì)慢性胃炎的內(nèi)鏡分型分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及治療試行意見[4]里VG的內(nèi)鏡診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男性38例，女性22例，年齡21～64歲，平均(44.30±13.48)歲，成熟型VG 32例，未成熟型VG 28例；正常胃黏膜活檢標(biāo)本30例，男性16例，女性14例，年齡22～63歲，平均(43.79±14.28)歲。兩組病例在性別、年齡等一般資料上比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。所有病例均未給予H2拮抗劑、質(zhì)子泵抑制劑等藥物治療和抗Hp感染治療。

1.2 檢測(cè)方法 所有組織均經(jīng)過10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)4 μm厚連續(xù)切片，蘇木精-伊紅染色。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)抑癌基因p16蛋白、VEGF在VG組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)，主要試劑為p16及VEGF兔抗人多克隆抗體、免疫組化試劑盒和DAB試劑盒，均由福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行DAB顯色、蘇木精復(fù)染，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照，已知p16、VEGF表達(dá)陽(yáng)性的胃癌切片代替一抗作為陽(yáng)性對(duì)照。采用尿素呼氣試驗(yàn)及快速尿素酶試驗(yàn)檢測(cè)Hp，主要試劑為尿素14C呼氣試驗(yàn)藥盒(上海欣科有限公司)、胃Hp pH指示劑診斷試劑盒(福建三強(qiáng)生物化工有限公司)，試驗(yàn)操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 (1)p16表達(dá)判定：p16陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，以顯色細(xì)胞數(shù)＞20%判定為陽(yáng)性，以顯色細(xì)胞數(shù)＜20%判定為陰性。(2)VEGF表達(dá)判定：VEGF陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒，以顯色細(xì)胞數(shù)＞25%判定為陽(yáng)性，以顯色細(xì)胞數(shù)＜25%判定為陰性。采用雙盲法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，兩位病理醫(yī)師計(jì)數(shù)差異＞10%時(shí)，需再次計(jì)數(shù)。(3)Hp感染判定：尿素呼氣試驗(yàn)及快速尿素酶試驗(yàn)檢測(cè)均為陽(yáng)性判斷為Hp陽(yáng)性，兩項(xiàng)檢測(cè)均為陰性判斷為Hp陰性，若兩項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果不一致，則需再次鑒定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，兩組間的計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，p16、VEGF在VG組織中的表達(dá)與Hp的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析方法分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VG組及正常胃黏膜組Hp感染情況比較 VG組60例中Hp陽(yáng)性38例，Hp陰性22例，Hp陽(yáng)性率為63.33%；正常胃黏膜組30例中Hp陽(yáng)性8例，Hp陰性22例，Hp陽(yáng)性率為26.67%。VG組Hp陽(yáng)性率明顯高于正常胃黏膜組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.482，P＜0.05)。

2.2 VG組織及正常胃黏膜組織中p16、VEGF的表達(dá)比較 VG組織中p16的表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常胃黏膜組織，而VG組織中VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常胃黏膜組織，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 VG組織及正常胃黏膜中p16、VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率比較[例（%）]

2.3 VG Hp感染與p16、VEGF表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，VG中Hp感染與VG組織中p16、VEGF的表達(dá)均呈正相關(guān)(rp16= 0.261，rVEGF=0.268，P均＜0.05)，見表2。

表2 VG Hp感染與P16、VEGF表達(dá)的相關(guān)性[例（%）]

3 討論

VG特點(diǎn)是再發(fā)性或持續(xù)性胃黏膜多發(fā)性疣狀隆起或痘疹狀病灶，病變部位一般呈糜爛、凹陷，多發(fā)于胃竇部[5]。目前臨床認(rèn)為VG的發(fā)生發(fā)展與Hp感染、過敏、胃酸分泌異常、膽汁反流等相關(guān)，其中Hp感染是導(dǎo)致VG發(fā)生發(fā)展的最重要因素[6]。有研究[7]提出，Hp感染參與VG形成與發(fā)展過程的作用機(jī)制可能是通過釋放某些致病因子作用于胃黏膜，進(jìn)而使胃黏膜發(fā)生損傷、充血水腫、點(diǎn)狀壞死、局部隆起增生、凹陷、片狀糜爛等病變，從而導(dǎo)致胃部炎癥反應(yīng)的發(fā)生。據(jù)文獻(xiàn)[8]報(bào)道，VG合并Hp感染的發(fā)生率可高達(dá)75.0%。本研究對(duì)VG組織與正常胃黏膜組織的Hp陽(yáng)性率進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)VG組織中的Hp陽(yáng)性率為63.33%，明顯高于正常胃黏膜的Hp陽(yáng)性率，與肖晨等[9]研究結(jié)果相一致，提示Hp感染在VG的發(fā)生與發(fā)展過程中起著較重要的作用。

p16基因是一種新型抑癌基因，在多種腫瘤細(xì)胞株中存在高頻率純合子缺失、突變等現(xiàn)象，其表達(dá)產(chǎn)物p16蛋白可直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞惡性增殖和分裂[10]。有研究提出，p16基因參與了疣狀胃炎發(fā)生發(fā)展過程及向胃癌轉(zhuǎn)變的過程[11]。VEGF是一種可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新生血管生成的因子，主要通過與其受體KDR結(jié)合，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞大量增殖，誘導(dǎo)血管新生[12]，還可通過增加血管通透性，使腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、滲出及擴(kuò)散轉(zhuǎn)移[13]。因此，VEGF異常表達(dá)在促使正常胃黏膜或胃炎向胃癌的轉(zhuǎn)變及胃癌進(jìn)展的過程中起著較重要的作用[14]。本研究對(duì)VG組織及正常胃黏膜組織的p16、VEGF的表達(dá)情況進(jìn)行探討，結(jié)果顯示VG組織的p16表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常胃黏膜，而VEGF表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常胃黏膜，表明p16、 VEGF的表達(dá)均參與的疣狀胃炎的發(fā)生及發(fā)展過程，p16、VEGF異常表達(dá)提示疣狀胃炎具有向胃癌轉(zhuǎn)變的可能性。此外，本研究對(duì)VG組織中p16、VEGF的表達(dá)與Hp感染的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示VG中Hp感染與VG組織中p16、VEGF的表達(dá)均呈正相關(guān)，表明抑癌基因p16、VEGF的表達(dá)與Hp感染具有協(xié)同作用。

綜上所述，p16、VEGF的表達(dá)及Hp感染均參與了VG的形成發(fā)展過程，p16、VEGF表達(dá)與Hp感染具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)VG的形成發(fā)展及其向胃癌轉(zhuǎn)變。

[1]郭愛華,張 清.133例疣狀胃炎的臨床、內(nèi)鏡及病理分析[J].臨床消化病雜志,2013,25(2):106-107.

[2]陳 潔,朱海杭,徐永居,等.疣狀胃炎與胃癌的關(guān)系探討[J].中國(guó)內(nèi)鏡雜志,2014,20(3):333-336.

[3]杜建新,馬洪德.疣狀胃炎與幽門螺桿菌感染關(guān)系分析[J].西南軍醫(yī),2013,15(4):435-436.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡分會(huì).慢性胃炎的內(nèi)鏡分型分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及治療的試行意見[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,2004,21(1):77-78.

[5]劉春龍,肖陽(yáng)娥,周大元,等.疣狀胃炎893例臨床及胃鏡分析[J].中國(guó)內(nèi)鏡雜志,2011,17(10):1107-1108.

[6]卜煜鋒,張曉海,桑旭東,等.疣狀胃炎的胃鏡及病理結(jié)果分析[J].中國(guó)內(nèi)鏡雜志,2011,17(7):692-694,698.

[7]丁世華,劉 俊,王建平,等.疣狀胃炎與胃癌的關(guān)系探討[J].海南醫(yī)學(xué),2010,21(9):11-12.

[8]郭 銳,王 萌.幽門螺桿菌感染與疣狀胃炎的相關(guān)性研究[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志：內(nèi)科版,2007,30(10):62-63.

[9]肖 晨,蘇東星,潘志剛,等.P16蛋白在疣狀胃炎、胃癌的表達(dá)和幽門螺桿菌感染的臨床意義[J].廣西醫(yī)學(xué),2011,33(3):277-279.

[10]仰麗麗,文 劍.p16和p21在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥,2014,40(5):538-540.

[11]丁世華,劉 俊,舒 晴,等.抑癌基因PTEN及P16蛋白在疣狀胃炎及胃癌組織中的表達(dá)及意義[J].世界華人消化雜志,2010,18 (19):2047-2049.

[12]卜煜鋒,張曉海,張洪濤,等.HIF-1α、VEGF在疣狀胃炎中的表達(dá)及意義[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2011,40(9):141-143.

[13]張 成,高廣榮,李 達(dá),等.PAR-2、VEGF和CD34在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(11):1773-1776.

[14]陳 潔,朱海杭,徐永居,等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體KDR在疣狀胃炎及胃癌組織中的表達(dá)及意義[J].世界華人消化雜志, 2013,21(21):2031-2037.

Expression of p16,VEGF in verrucous gastritis tissue and the correlation with Helicobacter pylori infection.

LU Cai-jin,SU Dong-xing,WU Xian-bin,SHI Hai-ying.Department of Gastroenterology,Nanning Second People's Hospital,Nanning 530031,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo observe the expression of p16 protein,vascular endothelial growth factor(VEGF) in verrucous gastritis(VG)tissues and its relationship withHelicobacter pylori(Hp)infection.MethodsSixty gastric mucosal biopsy specimens from patients diagnosed as VG by gastroscopy and 30 normal gastric mucosal biopsy specimens were collected,which were tested for the expression of p16,VEGF by immunohisto-chemical SP method and detected for Hp infection.The relationship between the expression of p16,VEGF in VG tissues and Hp infection was analyzed by Spearman correlation analysis.ResultsThe rate of Hp infection in VG tissues was significantly higher than that of normal gastric mucosa(P＜0.05).The rate of positive expression of p16 in VG tissues was significantly lower thanthat of normal gastric mucosa tissues(P＜0.05),and the rate of positive expression of VEGF in VG tissues was significantly higher than that of normal gastric mucosa tissues(P＜0.05).The expression of p16,VEGF was positively correlated with Hp infection in VG tissues(rp16=0.261,rVEGF=0.268,P＜0.05).ConclusionThe expression of p16,VEGF and Hp infection is involved in the process of formation and development of VG,with synergistic action.

Verrucous gastritis;p16 protein;VEGF;Hp infection

R573.3

A

1003—6350（2015）08—1117—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.08.0400

2014-10-09)

南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：200501083C）

陸才金。E-mail:2471728309@qq.com