郭立軍，江高峰，李海鵬，李　瓊，劉恩岐，李　潔，

(1.南華大學(xué)附屬郴州市第一人民醫(yī)院，湖南郴州　423000;2.南華大學(xué)藥物藥理研究所，湖南衡陽(yáng)　421001; 3.湘南學(xué)院，湖南郴州　423000;4.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，陜西西安　710061)

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mmLDL對(duì)小鼠腸系膜動(dòng)脈α1受體介導(dǎo)的血管收縮及相關(guān)蛋白表達(dá)影響的研究

郭立軍1，3，江高峰2，李海鵬1，李瓊1，劉恩岐4，李潔1，2

(1.南華大學(xué)附屬郴州市第一人民醫(yī)院，湖南郴州423000;2.南華大學(xué)藥物藥理研究所，湖南衡陽(yáng)421001; 3.湘南學(xué)院，湖南郴州423000;4.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，陜西西安710061)

摘要:目的探討mmLDL對(duì)小鼠腸系膜動(dòng)脈α1受體的作用。方法小鼠尾靜脈注射mmLDL，微血管肌張力描記儀觀察NA引起的小鼠腸系膜動(dòng)脈收縮量效曲線變化，RTPCR、Western blot檢測(cè)α1受體及α2受體表達(dá)。結(jié)果mmLDL引起NA收縮量效曲線明顯增強(qiáng)，表現(xiàn)為E(max)值由生理鹽水(NS)組的(120.75±3.44) %上升為(161.00± 6.87) % (P＜0.01)，pEC(50)值由NS組的(5.65±0.05)上升為(6.20±0.08) (P＜0.01)。α1受體拮抗劑哌唑嗪引起量效曲線的明顯右移，mmLDL引起α1受體mRNA水平、蛋白表達(dá)明顯增加，對(duì)α2受體表達(dá)基本沒(méi)有影響。結(jié)論尾靜脈注射mmLDL上調(diào)小鼠腸系膜動(dòng)脈α1受體。

關(guān)鍵詞:mmLDL;腸系膜動(dòng)脈;α1受體;哌唑嗪;育亨賓;尾靜脈注射

弱氧化低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein，mmLDL)是氧化程度輕微的LDL，脂質(zhì)部分被氧化，載脂蛋白B結(jié)構(gòu)完整，可以損傷內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，促進(jìn)ox-LDL產(chǎn)生。mmLDL是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosderosis，AS)的危險(xiǎn)因子，AS是心腦血管病的重要病理基礎(chǔ)，mmLDL引起AS的致病機(jī)制尚未研究清楚。AS是一種多因素共同參與的慢性炎癥性疾病，內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌細(xì)胞遷移增殖在AS的發(fā)生和發(fā)展中有重要作用。心腦血管疾病與血管收縮功能異常息息有關(guān)，交感神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)血管的活動(dòng)有重要的調(diào)節(jié)作用。交感神經(jīng)興奮釋放去甲腎上腺素，主要通過(guò)興奮血管平滑肌α1受體，引起血管收縮。受體是傳遞生物信息、介導(dǎo)生物效應(yīng)關(guān)鍵因素。受體本身會(huì)因新陳代謝而動(dòng)態(tài)變化，其數(shù)量、親和力和效應(yīng)會(huì)受生理、病理因素的影響而增多或減少。受體的調(diào)節(jié)是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素。有文獻(xiàn)報(bào)道［1－2］，在高血壓大鼠和高血壓患者血管平滑肌α腎上腺素受體的反應(yīng)性增強(qiáng)。研究mmLDL對(duì)在體腸系膜動(dòng)脈α受體的作用，對(duì)闡明mmLDL致病機(jī)制有重要意義。

1　材料與方法

1.1主要試劑LDL，去甲腎上腺素(noradrenaline，NA)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、普萘洛爾(propranolol，Prop)、乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)、哌唑嗪(prazosin)及育亨賓(yohimbine)均購(gòu)于Sigma公司，試劑用超純化水溶解，均用Krebs稀釋，濃度以浴槽中最終藥物的濃度表示。

α1受體抗體(Proteintech Biotechnology，Inc of USA)、α2受體抗體(American Research Products，Inc.)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗小鼠二抗(Pierce Biotechnology，Inc of USA)，GAPDH單克隆抗體(Proteintech Biotechnology，Inc of USA)。新鮮動(dòng)物組、S 織Y?和B R 細(xì) G 胞re 總en RNA抽提(試 Sh 劑an 盒g(shù)h 、a 通i N 用ov 逆lan 轉(zhuǎn)d錄工具包試劑盒Co.，Ltd.)。

1.2儀器DMT 620M微小血管張力測(cè)定儀(Danish Myo Technology A/S，DMT，丹麥)、Powerlab生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)(AD instruments Co，Australia)、Zeiss-2000系列生物顯微鏡(德國(guó)蔡司光電儀器有限公司)、顯微手術(shù)解剖工具(World Precision Instruments，WPI，美國(guó))，電子天平(BP211D，Startorius公司)、微量移液器(Dragonmed，芬蘭)、HH-2型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)，LG冰箱、優(yōu)普純水機(jī)(成都優(yōu)普純水設(shè)備有限公司)，SWCJ-2FD-超凈無(wú)菌工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)公司)，美國(guó)Bio-RAD電泳儀，MX3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Stratagene，U.S.)，Image Gauge Ver.4.0 (Fuji Photo Film Co.，Ltd，日本)。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組8～11周齡SPF級(jí)的ICR小鼠，體質(zhì)量20～24 g，♀♂各半，從西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)買(mǎi)，動(dòng)物使用許可證編號(hào): SYXK (陜) 2012－005。

實(shí)驗(yàn)組尾靜脈注射mmLDL 1 mg·kg－1，第1次注射開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔12 h重復(fù)1次，在處死動(dòng)物的時(shí)間點(diǎn)不給藥(比如24 h組給藥時(shí)間為0、12 h)，分別于24、48、72、96、120 h將小鼠頸部脫臼處死，濃度累加法加入NA，觀察mmLDL對(duì)血管α受體介導(dǎo)的收縮功能的影響?？疾靘mLDL對(duì)血管α受體作用的量效關(guān)系時(shí)，設(shè)立mmLDL (0.5、1及1.5 mg· kg－1)組。實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組，分別為尾靜脈注射生理鹽水(normal saline，NS)組和LDL組［3］。

1.4血管收縮功能檢測(cè)小鼠脫臼處死，立即取出包含有腸系膜的組織，浸入預(yù)冷的Na+-Krebs液(含mmol·L－1: NaHCO315、NaCl 119、MgCl21.2、NaH2PO41.2、無(wú)水CaCl21.5、KCl 4.6和葡萄糖5.5)中，顯微鏡下剝離血管周圍組織，0.1% Triton X-100血管內(nèi)灌注10 s，去除血管內(nèi)皮，再用緩沖液沖洗10 s，20 μmol·L－1的5-HT預(yù)收縮，當(dāng)乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)引起的舒張率＜10%，認(rèn)為內(nèi)皮已被去除。將處理好的血管切成1～2 mm長(zhǎng)的血管環(huán)，在顯微鏡下穿入兩根直徑為40 μm大小的金屬絲上，一根連接在可調(diào)負(fù)荷張力的微調(diào)裝置上，另一根連接張力換能器，張力換能器與Power-Lab系統(tǒng)相連，詳細(xì)記錄血管環(huán)的收縮曲線。將血管環(huán)放置于充滿Na+-Krebs液的37℃恒溫浴槽中，為使氧飽和，持續(xù)通入含(95% O2+ 5% CO2)的混合氣體，pH保持在7.4左右［4－6］。保持靜息張力為1.5 mN，每隔20 min更換1次Krebs液，平衡1.5 h。加K+-Krebs液(含mmol·L－1: NaHCO315、NaH2PO41.2、CaCl21.5、KCl 63.5、MgCl21.2、NaCl 60、和葡萄糖5.5)以檢測(cè)血管環(huán)的活性，Na+-Krebs液沖洗血管環(huán)3次，重復(fù)上述步驟。兩次K+－Krebs液引起的收縮幅度均大于1 mN并且兩次收縮幅度差在10%以內(nèi)，才可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用Prop (10－9mol·L－1)于浴槽中孵育血管0.5 h阻斷β受體，再濃度累加法加入NA(10－11～10－4mol· L－1)，考察α受體功能。先分別用Prop與不同濃度α1受體拮抗劑哌唑嗪(10－11～10－9mol·L－1)或不同濃度α2受體拮抗劑育亨賓(10－7～10－5mol· L－1)孵育血管0.5 h，再濃度累加法加入NA，分別考察α1和α2受體在NA引起的收縮量效曲線的作用。

1.5RT-PCR總的RNA提取使用RNA抽提試劑盒，按照使用說(shuō)明書(shū)提取。檢測(cè)260 nm、280 nm吸光度，考察總RNA濃度和純度。按說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。RT-PCR在MX3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中進(jìn)行，使用基因擴(kuò)增的SYBR Green試劑盒，以cDNA為模版。設(shè)立對(duì)照組，除不加cDNA外，余平行操作。引物根據(jù)基因數(shù)據(jù)庫(kù)應(yīng)用引物表達(dá)-2軟件設(shè)計(jì)，α1受體前引物: 5'-ATCCTCTCGGTGGCCTGTCATC -3';后引物:5'-AGATGGCAGAGAAGGGCA GCAC-3' (115 bp)。α2受體前引物: 5'- AGGTGACACTGACGCTGGTTTG -3';后引物: 5'- AAGAGGTTTTGGGGAGCTTTGAG-3' (121 bp)。管家基因β-actin mRNA，在細(xì)胞內(nèi)連續(xù)恒定表達(dá)，作為mRNA定量的參照。β-actin前引物: 5'- AAGATCAAGATCATTGCTCCTCC -3';后引物: 5'- GACTCATCGTACTCCTGCTTGC-3' (119 bp)。反應(yīng)體系為25 μL，開(kāi)始在95℃反應(yīng)3 min，94℃反應(yīng)12 s，62℃反應(yīng)40 s，完成40個(gè)PCR循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后采用分離曲線分析法以確定PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性。mRNA定量分析采用PCR循環(huán)閾值(CT)比較法，以β-actin的CT值為內(nèi)對(duì)照，計(jì)算α1受體、α2受體mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.6Western blot由于1只小鼠腸系膜動(dòng)脈提取的蛋白不足以開(kāi)展Werstern blot研究，因此，每個(gè)樣本由3根小鼠腸系膜動(dòng)脈組成，加入含有蛋白酶抑制劑的細(xì)胞提取變性緩沖液RIPA裂解液，勻漿。使用BCA蛋白分析試劑盒蛋白定量。提取的蛋白用SDS-PAGE凝膠電泳進(jìn)行分離并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，5%脫脂牛奶(T-TBS緩沖液配置)封閉。一抗α1受體抗體(1∶1 000稀釋)，α2受體抗體(1∶1 000稀釋)和GAPDH抗體(1∶1 000稀釋)，稀釋液為含2%牛血清白蛋白的PBS;二抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗小鼠IgG(1∶5 000稀釋)。圖像經(jīng)Image Gauge Ver.4.0 (Fuji Photo Film Co.，Ltd，日本)，對(duì)光密度進(jìn)行分析，并且均采用自身灰度值校正，以目的基因的條帶灰度與管家基因的灰度比值表示蛋白的表達(dá)水平。

2　結(jié)果

2.1mmLDL的制備將LDL(0.2 g·L－1)置于不含EDTA，含1 μmol·L－1FeSO4磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)中，在4℃透析96 h，再用0.25 mmol·L－1EDTA終止氧化反應(yīng)，生成mmLDL［8－11］。將mmLDL濃縮成1 g·L－1。mmLDL的氧化程度采用硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)法(thiobarbituric acid-reactive substances，TBARS)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，丙二醛樣結(jié)構(gòu)濃度為(10.47± 1.13)μmol·g－1LDL(mmLDL的TBARS檢測(cè)值為5－20 μmol·g－1LDL)。同時(shí)0.8%瓊脂糖膠電泳結(jié)果顯示，mmLDL的電泳遷移率是LDL的1.69倍(倍數(shù)值為1.50－2.00時(shí)為合格)。制備好的mmLDL存放于4℃，避光，兩周內(nèi)用完。

2.2血管環(huán)對(duì)K+的收縮反應(yīng)、動(dòng)脈內(nèi)皮去除及血清oxLDL水平測(cè)定使用mmLDL尾靜脈注射，血管環(huán)對(duì)63.5 mmol·L－1K+的收縮值在各組間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［如: NS組(2.58±0.47) mN，mmLDL組(2.87±0.49) mN，n=8，P＞0.05］。用20 μmol·L－1的5-HT預(yù)收縮血管環(huán)，再用10 mmol ·L－1ACh舒張，舒張率低于預(yù)收縮值的5%，表明內(nèi)皮去除完全。我們對(duì)血清中oxLDL的濃度水平進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，mmLDL組血清中oxLDL濃度水平較生理鹽水組略有升高，但差異無(wú)顯著性［mmLDL組(317±39)μg·L－1，NS組(276±31) μg·L－1，n=8，P＞0.05］。

2.3mmLDL影響α受體介導(dǎo)收縮反應(yīng)的時(shí)效和量效關(guān)系考察mmLDL影響腸系膜動(dòng)脈α受體介導(dǎo)收縮反應(yīng)的時(shí)間－效應(yīng)關(guān)系，實(shí)驗(yàn)組按1 mg· kg－1的劑量尾靜脈注射mmLDL。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，mmLDL提高α受體介導(dǎo)收縮反應(yīng)的作用逐漸增強(qiáng)，表明mmLDL提高血管α受體收縮反應(yīng)的作用呈時(shí)間依賴性。在24 h及48 h，α受體介導(dǎo)收縮量效曲線變化不明顯; 72 h時(shí)，α受體收縮效應(yīng)出現(xiàn)上升，但與NS組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 96h時(shí)，α受體介導(dǎo)的收縮曲線明顯上升伴隨明顯左移;120 h時(shí)，α受體收縮量效曲線與96 h比較略有升高(Fig 1A)?？疾靘mLDL (劑量分別為0.5、1及1.5 mg·kg－1) 96 h后對(duì)腸系膜動(dòng)脈α受體收縮量效曲線的劑量－效應(yīng)關(guān)系，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組中尾靜脈注射mmLDL對(duì)α受體收縮作用的影響隨著劑量增大而加強(qiáng)，表明mmLDL對(duì)血管α受體收縮作用的影響呈劑量依賴性。與對(duì)照組相比，0.5 mg·kg－1劑量組α受體介導(dǎo)的收縮量效曲線出現(xiàn)了升高(P＞0.05) ; 1 mg·kg－1劑量組出現(xiàn)明顯上升;1.5 mg·kg－1劑量組較1 mg·kg－1略有上升，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 1B)。故選擇劑量為1 mg· kg－1、時(shí)間點(diǎn)為96 h來(lái)考察mmLDL對(duì)小鼠腸系膜動(dòng)脈α受體收縮反應(yīng)的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果Emax值由NS組的(120.75±3.44) %上升為mmLDL組的(161.00±6.87) % (P＜0.01)，pEC50值由NS組的(5.65±0.05)上升為mmLDL組的(6.20±0.08) (P＜0.01)，表明量效曲線出現(xiàn)了明顯增高伴明顯左移。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示尾靜脈注射1 mg·kg－1LDL，96 h時(shí)α受體介導(dǎo)的收縮量效曲線與NS組比基本上沒(méi)有改變。

Fig 1 Effects of mmLDL on concentration-contractile curves induced by noradrenalin in a time-dependent(A) and

考察α受體亞型，使用選擇性α1受體拮抗劑哌唑嗪(10－11～10－9mol·L－1)使NA量效曲線平行右移，pA2值在mmLDL組和NS組分別為10.54 ±0.77和9.85±0.64(Fig 2)。選擇性α2受體拮抗劑育亨賓(10－7～10－5mol·L－1)使NA量效曲線平行右移，pA2值在mmLDL組和NS組分別為7.51±0.40和7.13±0.76(Fig 3)。

Fig 2 Concentration-contraction curves of mmLDL (A) and NS (B) in mouse mesenteric arteries induced by noradrenalin (±s，n=8)

2.4mmLDL增加α1受體表達(dá)，不影響α2受體表達(dá)mmLDL引起α1受體表達(dá)增加。尾靜脈注射mmLDL后，α1受體mRNA水平相對(duì)于NS組升高為(603±38) % (P＜0.01) ;α1受體蛋白水平由NS組的0.90±0.02升高為1.31±0.03 (P＜0.01) (Fig 4)。

尾靜脈注射mmLDL后，α2受體表達(dá)幾乎沒(méi)有變化。α2受體mRNA水平由NS組略降低為(89± 3) % (P＞0.05) ;α2受體蛋白水平由NS組的0.76 ±0.04略升高為0.78±0.02 (P＞0.05) (Fig 5)。

Fig 3 Concentration-contraction curves of mmLDL (A) and NS (B) in mouse mesenteric arteries induced by noradrenalin (±s，n=8)

3　討論

mmLDL是AS等心腦血管疾病的危險(xiǎn)因子，AS是一種慢性炎癥性疾病，早期表現(xiàn)為內(nèi)皮損傷，血管平滑肌遷移增殖。近期課題組研究發(fā)現(xiàn)，mmLDL可以上調(diào)離體大鼠冠狀動(dòng)脈和腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮素B (endothelin B，ETB)受體，血管收縮性增強(qiáng)［12－13］;尾靜脈注射mmLDL能損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，損傷血管內(nèi)皮依賴性舒張［3］。我們的研究結(jié)果顯示，mmLDL損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，此作用是AS的誘發(fā)因素; mmLDL上調(diào)血管平滑肌細(xì)胞ETB受體，增加了血管張力，表明mmLDL對(duì)血管平滑肌有影響。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)尾靜脈注射mmLDL可以上調(diào)在體小鼠腸系膜動(dòng)脈的α1受體，我們首次從整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了mmLDL可以對(duì)血管平滑肌受體產(chǎn)生作用。

心腦血管疾病的發(fā)生常常與血管的收縮、舒張功能失調(diào)有關(guān)。交感神經(jīng)興奮，末梢釋放NA，NA激動(dòng)血管平滑肌細(xì)胞膜上的α1受體，強(qiáng)烈收縮血管。血管平滑肌的收縮功能是影響血管阻力的重要因素，危險(xiǎn)因子與機(jī)體相互作用，改變平滑肌的收縮功能，這種變化可能與疾病互為因果，成為疾病的基礎(chǔ)。本研究觀察mmLDL對(duì)在體血管平滑肌的影響，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中去除血管內(nèi)皮，因?yàn)檠軆?nèi)皮可以釋放NO、ET-1等影響血管張力的血管活性物質(zhì)，干擾血管環(huán)張力測(cè)定。使用β受體拮抗劑普萘洛爾孵育血管環(huán)，再濃度累加法加入NA，消除β受體對(duì)收縮曲線的干擾。預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們測(cè)定血清中oxLDL的濃度水平顯示，mmLDL組血清中oxLDL濃度水平較生理鹽水組略有升高，但差異無(wú)顯著性，表明血管平滑肌收縮功能增強(qiáng)與oxLDL無(wú)關(guān)。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)尾靜脈注射mmLDL可以時(shí)間依賴性和劑量依賴性的增加α受體收縮反應(yīng)性。給予劑量為1 mg· kg－1mmLDL，72 h內(nèi)α受體收縮反應(yīng)性逐漸增強(qiáng)，但是與生理鹽水組比差異無(wú)顯著性，96 h后可以引起的NA收縮功能較生理鹽水組明顯增強(qiáng)，量效曲線明顯左移，表明mmLDL增強(qiáng)NA引起血管的收縮功能?？疾歃?受體、α2受體在NA引起收縮反應(yīng)的作用時(shí)，分別在mmLDL組和生理鹽水組加入α1受體拮抗劑哌唑嗪和α2受體拮抗劑育亨賓。在mmLDL組和生理鹽水組，α1受體拮抗劑哌唑嗪的pA2值分別為10.54±0.77和9.85±0.64，α2受體拮抗劑育亨賓的pA2值分別為7.51±0.40和7.13 ? ±0.76，與早期的文獻(xiàn)報(bào)道一致［14］。mmLDL組我們觀察到α1受體拮抗劑哌唑嗪在濃度為10－11? mol ·L－1時(shí)引起量效曲線?的明顯右移，而α2受體拮抗劑育亨賓產(chǎn)生類似作用需要的濃度為10－6mol· L－1，是哌唑嗪濃度的100 000倍，表明mmLDL引起的NA收縮反應(yīng)增強(qiáng)主要是由α1受體介導(dǎo)，這與文獻(xiàn)報(bào)道高血壓患者與α1受體表達(dá)上調(diào)有關(guān)相一致［15］。在RT-PCR和Western blot的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，我們發(fā)現(xiàn)mmLDL能明顯增加的α1受體mRNA水平和蛋白表達(dá)，對(duì)α2受體的蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯影響，這與功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。mmLDL引起α2受體mRNA水平略為降低，可能是由于mmLDL明顯升高α1受體表達(dá)的一種反饋調(diào)節(jié)。結(jié)果顯示mmLDL引起NA收縮量效曲線增強(qiáng)并伴隨明顯左移主要是由于增加了α1受體在血管平滑肌的表達(dá)，增加了α1受體介導(dǎo)的收縮功能。

Fig 4 Effect of mmLDL on expressions of α1adrenoceptor in mouse mesenteric arteries(±s)

Fig 5 Effect of mmLDL on expressions of α2adrenoceptor in mouse mesenteric arteries(±s)

(致謝:本研究功能學(xué)實(shí)驗(yàn)部分在西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院賀浪沖教授實(shí)驗(yàn)室完成，在此特別感謝。)

綜上所述，尾靜脈注射mmLDL對(duì)腸系膜動(dòng)脈平滑肌有作用，增加了動(dòng)脈α1受體的mRNA水平、蛋白表達(dá)，并且增加小鼠腸系膜動(dòng)脈α受體的收縮反應(yīng)主要由α1受體介導(dǎo)。mmLDL可以通過(guò)上調(diào)α1受體增加血管平滑肌的收縮功能，此作用是否參與了血管平滑肌細(xì)胞遷移到內(nèi)皮下還需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn):

［1］李潔，劉浩，曹永孝，等.高血壓大鼠和高血壓患者血管平滑肌α腎上腺素受體的反應(yīng)性增強(qiáng)作用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2006，41(10) :973－7.

［1］Li J，Liu H，Cao Y X，et al.Hypersensitization of α-adrenoreceptor of artery smooth muscle in hypertensive rats and hypertensive patients［J］.Acta Pharmaceut Sin，2006，41(10) :973－7.

［2］Yan L，Tan X，Chen W，et al.Enhanced vasoconstriction to α1adrenoceptor autoantibody in spontaneously hypertensive rats［J］.Sci China Life Sci，2014，57(7) :681－9.

［3］陳根，秦旭平，李潔，等.弱氧化低密度脂蛋白對(duì)小鼠腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能的影響及機(jī)制［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，48(11) :1657－64.

［3］Chen G，Qin X P，Li J，et al.Minimally modified LDL induced impairment of endothelium-dependent relaxation in mesenteric arteries of mice［J］.Acta Pharmaceut Sin，2013，48(11) : 1657－64.

［4］Cao Y X，He L C，Xu C B，et al.Enhanced transcription of contractile 5-hydroxytryptamine 2A receptors via extracellular signalregulated kinase 1/2 after organ culture of rat mesenteric artery ［J］.Basic Clin Pharmacol Toxicol，2005，96(4) :282－8.

［5］Cao L，Zhang Y，Cao Y X，et al.Cigarette smoke upregulates rat coronary artery endothelin receptors in vivo［J］.PloS One，2012，7 (3) : e33008.

［6］Cao L，Cao Y X，Xu C B，et al.Altered endothelin receptor expression and affinity in spontaneously hypertensive rat cerebral and coronary arteries［J］.PloS One，2013，8(9) : e73761.

［7］Arunlakshana O，Schild H O.Some quantitative uses of drug antagonists［J］.Br J Pharmacol Chemother，1959.，14(1) : 48－58.

［8］Itabe H，Mori M，F(xiàn)ujimoto Y，et al.Minimally modified LDL is an oxidized LDL enriched with oxidized phosphatidylcholines［J］.J Biochem，2003，134(3) :459－65.

［9］Chávez-Sánchezl L，Chávez-Rueda K，Legorreta-Haquet1 M V，et al.The activation of CD14，TLR4，and TLR2 by mmLDL induces IL-1b，IL-6，and IL-10 secretion in human monocytes and macrophages［J］.Lipids Health Dis，2010，9: 117.

［10］Heusch G.Alpha-adrenergic coronary vasoconstriction in humans ［J］.J Am Coll Cardiol，2010，55(12) : 1278－9.

［11］Li J，Cao L，Xu C B，et al.Minimally modified LDL upregulates endothelin type A receptors in rat coronary arterial smooth muscle cells［J］.Mediators Inflamm，2013，2013:656570.

［12］Li J，Cao Y X，Liu Y，et al.Minimally modified LDL upregulates endothelin type B receptors in rat basilar artery［J］.Microvascul Res，2012，83(2) :178－84.

［13］Li J，Cao Y X，Yang Z Y，et al.Minimally modified LDL upregulates endothelin type B receptors in rat coronary artery via ERK1/2 MAPK and NF-kappaB pathways［J］.Biochim Biophys Acta，2012，1821(4) :582－9.

［14］Li J，Cao Y X，Liu H，et al.Enhanced G-protein coupled receptorsmediated contraction and reduced endothelium-dependent relaxation in hypertension［J］.Eur J Pharmacol，2007，557(2－3) : 186 －94.

［15］林杰，李潔，曹永孝，等.高血壓機(jī)體外周動(dòng)脈G-蛋白偶聯(lián)受體對(duì)縮血管物質(zhì)的反應(yīng)［J］.中華高血壓雜志，2007，15 (7) :587－94.

［15］Lin J，Li J，Cao Y X，et al.Enhanced G-protein coupled receptors mediated vasoconstrictor effect in human and rat arterioles［J］.Chin J Hyper，2007，15(7) :587－94.

Study of α1adrenoceptor-mediated vasoconstriction and protein expressions induced by mmLDL in mouse mesenteric artery

GUO Li-jun1，3，JIANG Gao-feng2，LI Hai-peng1，LI Qiong1，LIU En-qi4，LI Jie1，2
(1.The First People’s Hospital of Chenzhou，University of South China，Chenzhou，Hunan 423000，China; 2.Institute of Drug and Pharmacology，University of South China，Hengyang Hunan 421001，China; 3.Xiangnan University，Chenzhou Hunan 423000，China;4.Xi’an Jiaotong University，Medical College，Xi’an 710061，China)

Abstract:AimTo investigate the effects of mmLDL on the up-regulation of α1receptors in moues mesenteric arteries.Methods Mice tail intravenous injection of mmLDLwasused.Vitrosensitivemyographwasempl-book=833,ebook=98oyed to examine Noradrenaline (NA) induced vascular contraction on mice mesenteric artery，and the mRNA and protein expressions of α1and α2receptors were analyzed by real-time PCR and Western blot，respectively.ResultsmmLDL significantly increased NA induced concentration-contractile curve，and the data of E(max)and pEC(50)were from (122.61±9.40) %and (5.65±0.05) in normal saline (NS) group to (161.01±6.90) % and (6.20±0.08) in mmLDL group (P＜0.01，P＜0.01)，respectively.The α1adrenoceptor antagonist prazosin shifted the concentration-contractile curve induced by NA towards right.After using mmLDL，the mRNA and protein levels of α1adrenoceptor were significantly increased，but the mRNA and protein levels of α2adrenoceptor were not changed.ConclusionTail intravenous injection of mmLDL enhanc? es the vascular expressions of α1adrenoceptors and the contractile effects mediated by α1adrenoceptors.

Key words:mmLDL; mesenteric artery;α1adrenoceptor; prazosin; yohimbine; tail intravenous injection

作者簡(jiǎn)介:郭立軍(1979－)，男，碩士，講師，主治醫(yī)師，研究方向:血管病理學(xué)，E-mail: guolijun54@126.com;李潔(1974－)，女，博士，主任藥師，研究方向:血管藥理學(xué)，通訊作者，E-mail: lijieemail2005@163.com

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81202535) ;郴州市科技局資助項(xiàng)目(No CZ2014015)

收稿日期:2015－02－01，修回日期:2015－03－20

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001－1978(2015) 06－0827－07中國(guó)圖書(shū)分類號(hào): R-332; R322.121; R392.11; R977.6

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.06.018