王雅琦

(哈藥集團(tuán)制藥六廠，黑龍江 哈爾濱 150056)

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墓頭回總黃酮提取工藝研究

王雅琦

(哈藥集團(tuán)制藥六廠，黑龍江 哈爾濱 150056)

目的：探討墓頭回總黃酮的最佳提取工藝。方法：采用超聲提取法提取墓頭回中的總黃酮，采用比色法測定總黃酮含量，以總黃酮得率為指標(biāo)，考察乙醇濃度、料液比和超聲時間對墓頭回總黃酮提取率的影響，利用響應(yīng)面分析法確定墓頭回總黃酮的最佳提取工藝。結(jié)果：墓頭回總黃酮的最佳提取工藝為：加30倍量的60%乙醇超聲提取20min。結(jié)論：該提取工藝得率高、操作簡便，具有周期短、精度高等優(yōu)點，可用于工業(yè)化大生產(chǎn)。

墓頭回；總黃酮；提取工藝

墓頭回為敗醬科敗醬屬植物異葉敗醬或糙葉敗醬的根莖和根，性涼，味苦、微酸澀，根及全草入藥用，具有燥濕止帶、收斂止血、清熱解毒的功效，主治赤白帶下、泄瀉痢疾、瘡瘍腫毒等[1]。近年來國內(nèi)外學(xué)者對墓頭回中黃酮類化合物的藥理作用進(jìn)行了研究，在抗腫瘤、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等[2]方面取得了顯著進(jìn)展。超聲波輔助提取法是提取天然成分的常用方法[3]。目前關(guān)于墓頭回總黃酮的最佳提取工藝研究報道較少，本文采用響應(yīng)面分析法，考察影響提取效果的主要因素，確定最佳提取工藝條件，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-2600紫外-可見分光光度計、KQ5200超聲清洗器、電子分析天平等。

1.2 試藥

槲皮素(批號：100081-201481)，購于中國食品藥品檢定研究院；墓頭回，購于安徽亳州；其他試劑均為分析純。

2 方法學(xué)考察

2.1 對照品溶液制備

精密稱取槲皮素對照品7.3mg，置于25mL容量瓶中，加適量60%乙醇，超聲片刻使之溶解，加60%乙醇定容至刻度，得濃度為0.292mg/mL的對照品溶液，備用。

2.2 供試品溶液制備

稱取1.0g墓頭回藥材粗粉，加20mL 60%乙醇超聲提取20min，過濾，用60%乙醇定容至25mL容量瓶中，得濃度為40mg/mL的供試品溶液，備用。

2.3 最大吸收波長確定

精密吸取對照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”項下顯色方法操作，于200～800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，確定其最大吸收波長為480nm。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加60%乙醇至6mL，加5% NaNO2溶液1.0mL，放置6min，加10%Al(NO3)3溶液1.0mL，放置6min，加10%NaOH溶液10mL，定容至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑作空白對照，于480nm處測定吸光度。以吸光度(y)為縱坐標(biāo)，以樣品濃度x為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=0.265 5x+0.025 3，r=0.999 0。結(jié)果表明：槲皮素在0.012～0.047mg范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”項下方法測定吸光度，平行測定6次，計算得吸光度RSD為0.25%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一對照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”項下方法，分別于放置30、60、90、120、150、180min后測定吸光度，計算得RSD為1.49%，表明樣品溶液在180min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

精密吸取同一供試品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”項下方法測定吸光度，平行測定6次，計算得RSD為0.21%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取9份已知總黃酮含量的藥材粉末，隨機分為3組，各組分別精密加入已知含量80%、100%、120%的槲皮素對照品，按照供試品制備方法制備樣品溶液，于“2.4”項下顯色條件測定總黃酮含量，計算得加樣回收率為99.0%，RSD為1.67%。

3 單因素考察

3.1 乙醇濃度考察

稱取1g墓頭回藥材粗粉5份，固定超聲時間為20min、料液比為1∶20，分別采用濃度為40%、50%、60%、70%、80%的乙醇提取，測定其吸光度，結(jié)果見圖1。乙醇濃度選取40%、50%和60%作為提取工藝優(yōu)化的3個水平。

圖1 吸光度響應(yīng)面分析

3.2 料液比考察

稱取藥材(過60目篩)適量，固定超聲時間為20min、乙醇濃度為60%，分別用料液比為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50進(jìn)行提取，測定其總黃酮含量，選擇三個最佳的料液比進(jìn)行考察，分別為1∶10、1∶20、1∶30。

3.3 超聲時間考察

稱取藥材(過60目篩)適量，固定乙醇濃度為60%、料液比為1∶20，分別超聲提取10、20、30、40、50min，測定其總黃酮含量，選擇3個最佳的超聲時間進(jìn)行考察，分別為10、20、30min。

3.4 提取工藝優(yōu)化

根據(jù)Box-Benhnken的中心組合實驗設(shè)計原理，綜合單因素實驗結(jié)果，在選定溫度為25℃的前提下，選擇乙醇濃度、料液比和超聲時間3個因素作為自變量設(shè)計響應(yīng)面分析實驗，分別以A、B、C表示，每個自變量的低、中、高水平分別以-1、0、1 進(jìn)行編碼，以墓頭回總黃酮提取得率作為響應(yīng)值Y，結(jié)果見表1。采用Design-Expert軟件對表1結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面回歸分析，得擬合方程：含量=-370.01175+10.83762×A+8.29930×B+2.89508×C-0.025875×A×B-0.10223×A2-0.12781×B2-0.076280×C2。由方差分析可知，擬合方程有較高的擬合度，理論最佳提取工藝為：加30倍的60%乙醇超聲提取20min，藥材有效成分能最大程度地溶出。

表1 響應(yīng)面分析實驗結(jié)果

注：共有17 個實驗，其中12 個為析因?qū)嶒灒?個為中心實驗，以估計誤差。

4 討論

傳統(tǒng)的數(shù)理統(tǒng)計方法往往采用正交設(shè)計或均勻設(shè)計，可同時考慮多種因素，尋求最佳因素水平組合，但其不能在給出的整個區(qū)域中找出因素和響應(yīng)值之間明確的函數(shù)表達(dá)式，即回歸方程，因而無法找到整個區(qū)域中因素的最佳組合和響應(yīng)值的最優(yōu)值。響應(yīng)面分析方法是通過中心組合實驗研究幾種實驗因素間交互作用的一種回歸分析方法，具有試驗次數(shù)少、周期短、回歸方程精度高等優(yōu)點，并可從圖形方面分析尋求最優(yōu)考察因素值。

本實驗采用響應(yīng)面分析法對墓頭回總黃酮提取工藝進(jìn)行研究，實驗所確定的提取工藝具有提取得率高、操作簡便、成本較低等優(yōu)點，為墓頭回總黃酮提取工藝的優(yōu)化及墓頭回植物資源的開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

[1] 蔡光先.湖南藥物志[M].長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社,2004:4857-4859.

[2] 江蘇醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1986.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2015-07-12

王雅琦(1979-)，女，黑龍江省哈藥集團(tuán)制藥六廠主管藥師，研究方向為藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及工藝。

R384.1

A

1673-2197(2015)22-0030-02

10.11954/ytctyy.201522012