蔣 瑩，李 輝

(1.江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，江西 上饒 334000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江西 南昌 330004)

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氧化苦參堿預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其機(jī)制研究

蔣 瑩1，李 輝2

(1.江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，江西 上饒 334000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江西 南昌 330004)

目的：研究氧化苦參堿對大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：通過結(jié)扎左冠狀動脈構(gòu)建心肌缺血再灌注損傷動物模型。將SD大鼠隨機(jī)分為三組：對照組、缺血再灌注組、氧化苦參堿預(yù)處理組。光鏡檢查心肌病理變化，測定血清肌酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)活性含量，測定心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。結(jié)果：氧化苦參堿預(yù)處理組光鏡下心肌細(xì)胞變性壞死程度及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變較之缺血再灌注組顯著減輕；氧化苦參堿預(yù)處理組大鼠血清中CK活性顯著降低(P<0.05)，SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性顯著提高(P<0.05)。結(jié)論：氧化苦參堿對大鼠冠狀動脈結(jié)扎所構(gòu)建的再灌注心肌損傷有顯著保護(hù)作用，可能與改善心肌微循環(huán)以及抗氧化自由基生成、減輕鈣超載等機(jī)制相關(guān)。

氧化苦參堿；缺血再灌注損傷；心肌；細(xì)胞凋亡

心肌缺血再灌注損傷病理學(xué)機(jī)制主要與氧自由基過多、炎癥反應(yīng)、鈣超載以及細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)[1]。氧化苦參堿(oxymatrine，OMT)是從苦參中提取的一種生物堿，具有諸如抗氧自由基等多種生物活性[2]。本實(shí)驗(yàn)擬考察OMT對大鼠心肌缺血再灌注損傷過程的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康SD大鼠30只，雄性，體重(230±10)g，購自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。將其隨機(jī)分為三組：正常對照組(0.9%氯化鈉2 mL，bid×6 d，ip)、缺血再灌注組(I/R，其他處理同前組)、OMT預(yù)處理組(O+I/R；OMT博爾泰力藥業(yè)股份有限公司OMT注射液4g/2m，bid×6 d，ip)。第6天處死損傷模型大鼠。

1.2 試劑

氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)試劑盒(南京建成生物工程有限公司)。

1.3 模型構(gòu)建[3]

通過大鼠心冠狀動脈左前降支結(jié)扎法，構(gòu)建缺血再灌注損傷模型。動物麻醉后氣管插管，呼吸機(jī)支持、自左側(cè)第1至第3肋開胸后暴露心臟，以乳膠片墊底的0號絲線穿過左前降支中上1/3。除對照組不結(jié)扎外所有組別結(jié)扎30 min后，松開結(jié)扎線恢復(fù)灌注。于第6天處死大鼠，取心尖3 mm處心肌標(biāo)本。

1.4 CK、SOD、Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即于左頸總動脈取血5.0mL測定血清CK、SOD活性。結(jié)束后，立即取左室游離心肌組織0.5g，制備組織勻漿，取上清液備用，按試劑盒說明書進(jìn)行測定。心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶用無機(jī)磷測定法。

1.5 心肌組織病理學(xué)觀察

將心肌置于甲醛溶液(90mL·L-1)中固定，石蠟包埋后常規(guī)切片染色，光鏡下觀察病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 OMT對血清CK、SOD，心肌組織中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影響

缺血再灌注組血清CK活性顯著高于正常對照組(P均<0.01)。OMT預(yù)處理組CK顯著低于缺血再灌注組(P<0.05)。與正常對照組相比，缺血再灌注組心肌組織Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性均降低(P<0.05)，OMT預(yù)處理組Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均顯著高于缺血再灌注組(P<0.05)。詳見表1。

2.2 光鏡下病理觀察

正常對照組心肌纖維排列整齊，無變性壞死，無腫脹斷裂，未見其他明顯異常(圖1A)；缺血再灌注組則見片狀心肌細(xì)胞變性壞死，心肌纖維腫脹斷裂(圖1B)；OMT預(yù)處理組心肌組織病變較模型組減輕(見圖1C)。

表1 OMT對血清CK、SOD，心肌組織中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影響

注：與缺血再灌注組比較，#P<0.05。

圖1 大鼠心肌組織病理形態(tài)學(xué) (HE,×400)

3 討論

目前認(rèn)為心肌缺血再灌注損傷是急性心肌梗死后再灌注治療中出現(xiàn)的一種常見病理現(xiàn)象。其主要特征表現(xiàn)為：缺血再灌注后，發(fā)生活性氧增加，鈣超載，引起細(xì)胞因子釋放，啟動凋亡反應(yīng)，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，從而引起心肌細(xì)胞功能喪失，心臟舒縮功能障礙。SOD是一類廣泛存在于動物體內(nèi)的金屬酶，其可清除體內(nèi)在利用氧過程中產(chǎn)生的超氧離子，在生命體的自我保護(hù)系統(tǒng)中起著重要作用[4]。氧化苦參堿可減少缺血再灌注引起的ROS產(chǎn)生，從而抑制胞質(zhì)內(nèi)鈣升高，使Ca2+轉(zhuǎn)移到線粒體減少，抑制線粒體通透轉(zhuǎn)換孔開放和其引起的細(xì)胞色素C和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)釋放，從而抑制誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，至于氧化苦參堿抗凋亡的具體信號傳導(dǎo)途徑及機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，氧化苦參堿對大鼠冠狀動脈結(jié)扎所構(gòu)建的再灌注心肌損傷有顯著保護(hù)作用，其可能與改善心肌微循環(huán)，以及抗氧自由基生成、減輕鈣超載等機(jī)制相關(guān)，可能是通過其抗凋亡作用來實(shí)現(xiàn)的。

[1] ZHAO Z Q，MONIS C D，BUDDE J M，et a1.Inhibition of myocardial apoptosis reduces infarct size and improves regional contractile dysfunction during reperfusion[J].Cardiovas Res，2003(59):132.

[2] 孫文基，謝世昌. 天然藥物成分定量分析[M]. 第1版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2003.

[3] 桂敏，翟宏穎. 菟絲子黃酮對心肌缺血再灌注損傷大鼠Bcl-2、Caspase-3表達(dá)的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2012,32(2):343.

[4] 商蕾，王玲，孫宏麗,等.氧化苦參堿對大鼠急性心肌缺血保護(hù)作用的研究[J]. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,39(2):124-127.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2015-04-06

蔣瑩(1980-)，女，江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)樯韺W(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0012-01

10.11954/ytctyy.201517006