申曉慧

摘 要：為了驗(yàn)證蘆薈提取物的抑菌效果，采用濾紙片法、固體稀釋法觀察蘆薈汁對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和黑曲霉的抑菌效果。結(jié)果表明：蘆薈汁對供試菌生長有明顯的抑制作用，但是濾紙片測定法抑菌效果不明顯，固體稀釋法較好，100%的蘆薈汁的抑菌效果較好，50%和70%的蘆薈汁抑菌效果較差。

關(guān)鍵詞：蘆薈；提取物；抑菌作用

中圖分類號：S432 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 論文編號：2014-0055

Abstract： To verify the bacteriostatic effect of Aloe vera extract， the filter paper method and solid dilution method were used to observe the bacteriostatic effect of the aloe juice on Bacillus subtilis， Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Aspergillus niger. The results showed that： the Aloe vera juice inhibited the selected bacteria growth obviously， but the antibacterial effect of filter paper was not obvious， the solid dilution method was better， the bacteriostatic effect of 100% Aloe vera juice was good， the bacteriostatic effect of 50% and 70% aloe juice were poor.

Key words： Aloe； Extraction； Bacteriostasis

0 引言

蘆薈原產(chǎn)于地中海、非洲，為獨(dú)尾草科多年生草本植物，蘆薈中含有許多生物活性物質(zhì)，其活性成分具有抗病毒、抗氧化、抗癌、抑菌、提高免疫力等功能[1-3]，蘆薈的成分非常復(fù)雜，主要化學(xué)成分為蘆薈大黃酚、蘆薈大黃素、蒽醌等物質(zhì)，其中蘆薈大黃素中大黃素甙具有抗炎、抑菌及殺菌等功能[4]。蒽醌等衍生物對多種真菌和細(xì)菌有很強(qiáng)的抑菌作用[5-6]。枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和黑曲霉為食品常見污染微生物，但目前常用的抑菌劑多為化學(xué)防腐劑[7]。長期使用化學(xué)防腐劑會導(dǎo)致病原菌對藥劑產(chǎn)生抗藥性，同時(shí)會造成食品中防腐劑殘留、超標(biāo)，進(jìn)而嚴(yán)重影響人體健康[8]，因此，尋找新型的高效無殘留的天然食品防腐劑是解決食品安全的重要途徑。筆者通過對蘆薈有效成分進(jìn)行提取，研究其對4種常見食品污染菌的抑制作用效果，以期為蘆薈提取物用于食品防腐和抑菌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)于2013年在佳木斯分院多功能分析研究實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

供試蘆薈為庫拉索蘆薈（Aloe vera），購于佳木斯市花卉市場。供試菌種為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和黑曲霉（Aspergillus niger），由佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。供試培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨和PDA培養(yǎng)基。主要儀器設(shè)備有培養(yǎng)箱、離心機(jī)、高壓蒸汽滅菌鍋、托盤天平、冰箱、培養(yǎng)皿等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 蘆薈凝膠原液的制取工藝 剪取新鮮的蘆薈葉片，放到蒸餾水中漂洗，刮去外皮并放到熱水中熱燙，取出放到研缽中搗碎，加入混有水的蛋清，將蘆薈汁的混濁液倒入蓋有8層紗布的燒杯中過濾出雜質(zhì)，將得到的蘆薈汁放到3000 r/min離心機(jī)中離心20min，將得到的蘆薈原汁放到冰箱中低溫保藏，溫度為4～7℃。

1.3.2 蘆薈提取物的抑菌實(shí)驗(yàn)

（1）濾紙片法測定抑菌作用[9-10]。供試菌種經(jīng)斜面活化后，分別用無菌水制成含菌數(shù)為106 cfu/mL的菌懸液。將菌液與培養(yǎng)基混合均勻，倒成平板，冷卻凝固后，在無菌條件下，用鑷子分別夾取滅過菌的直徑6 mm的圓形濾紙片充分蘸取不同濃度（CK、25%、50%、75%、100%）的蘆薈汁放在上述準(zhǔn)備好的各種含菌平皿上，每皿放4片。然后將各平皿放人培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（細(xì)菌37℃培養(yǎng)24 h，霉菌28℃培養(yǎng)48 h），取出后測抑菌圈直徑的大小。

（2）固體稀釋法[11-12]。在無菌條件下，將培養(yǎng)基配制成含蘆薈汁濃度分別為50%、70%、100%，倒平板，凝固后，將供試的菌懸液均勻涂抹在平板上，倒置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔12 h觀察菌落的生長情況，并記數(shù)。

（3）最小抑菌濃度（MIC）的測定[13-14]。將蘆薈汁配制成濃度為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的抑菌液，培養(yǎng)基冷去后按每皿平均加2 mL菌液計(jì)算，倒入各培養(yǎng)皿，待培養(yǎng)皿凝固后，每皿再加入0.2 mL菌懸液，均勻涂抹在凝固的培養(yǎng)基上。恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。以不長菌的蘆薈汁最低濃度為最小抑菌濃度（MIC）。

2 結(jié)果與分析

2.1 濾紙片法測蘆薈汁抑菌效果

采用濾紙片法測定不同濃度蘆薈汁對食品污染菌的抑制作用，結(jié)果如表1所示，并沒有出現(xiàn)抑菌圈。其原因可能是濾紙片所吸附的蘆薈汁的有效濃度太低，抑菌效果不明顯所致。

2.2 固體稀釋法測蘆薈汁抑菌效果

由表2可知，隨著蘆薈汁濃度的增加，菌落數(shù)逐漸減少，其中，不同濃度下對大腸桿菌的抑制效果均表現(xiàn)為最好，隨著時(shí)間的延長，菌落數(shù)雖呈逐漸增加趨勢，但隨著濃度的增加，蘆薈汁提取液對所供試病菌仍有明顯抑制作用，抑制大小順序?yàn)椋捍竽c桿菌>枯草芽孢桿菌>黑曲霉>金黃色葡萄球菌。

2.3 蘆薈汁的最低抑菌濃度

由表3可以看出，蘆薈汁對大腸桿菌、金色葡萄球菌的MIC為100%，對枯草芽孢桿菌的MIC為90%，只有對黑曲霉的MIC為50%，說明蘆薈汁由于對供試菌種的不同而抑制作用也不同，蘆薈汁需要在濃度較高時(shí)才能對大部分供試菌具有明顯的抑制效果。

3 結(jié)論

（1）固體稀釋法可以明顯的看到蘆薈汁的抑菌效果，即100%蘆薈汁的抑菌效果最好，而50%和75%菌落生長較旺盛。

（2）蘆薈汁的抑菌濃度較高，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的MIC為100%。

（3）通過對蘆薈汁抑菌作用的研究，可以看出蘆薈提取物對黑曲霉的生長有明顯的抑制作用，可通過進(jìn)一步試驗(yàn)研究其對其他食品污染霉菌的抑制效果，并進(jìn)一步開發(fā)出食品抑霉劑。

4 討論

（1）濾紙片上由于只沾取了微量的蘆薈汁抑菌成分，結(jié)果不明顯，可能是由于蘆薈液中具有抗菌成分的蘆薈素A含量太低，所以抑菌效果不明顯，故該法不適用。這與前人研究結(jié)果相同[15]。

（2）通過對MIC分析可知，蘆薈汁對黑曲霉的生長有明顯的抑制作用，這與古麗斯瑪依·艾拜都拉在3種蘆薈汁的抑菌活性及其影響因素研究中的論述結(jié)果相同[16]。蘆薈汁對所供試的其他污染菌需要高濃度的提取液。此外通過直接對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以觀察蘆薈的抑菌效果以及比較出蘆薈汁在多大濃度上對細(xì)菌的生長有較明顯抑制作用，故該法是實(shí)驗(yàn)中較理想的方法。

（3）本研究主要是以食品污染菌為供試靶標(biāo)，利用對人體無毒并具有很好功效的蘆薈汁來進(jìn)行抑菌研究，旨在為無毒無害食品防腐劑的研究開發(fā)以及開發(fā)蘆薈商品提供理論依據(jù)，筆者只是采用了一些常規(guī)的試驗(yàn)方法，對于蘆薈的抑菌原理還有待于進(jìn)一步研究。

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