於春 李淑英 劉方志 朱加保 程福如

摘要：2009～2010年從安徽省三大棉區(qū)采集病秸稈并分離得到30株棉花黃萎病菌株，通過對其培養(yǎng)性狀的測定發(fā)現(xiàn)，多數(shù)菌株為菌核型，占80.0%，少數(shù)為中間型，占16.7%，而菌絲型僅占3.3%。對感病棉花品種苗期致病程度測定結(jié)果表明，安徽省黃萎病菌株可劃分為強(qiáng)、中、弱3種致病類型，其中致病性強(qiáng)的菌株有7株，占參試菌株的23.3%，中等致病性的菌株有14株，占46.7%，致病性弱的菌株有9株，占30%。研究結(jié)果還表明，不同地區(qū)棉花黃萎病菌株間的致病程度存在較大差異，同一地區(qū)的不同菌株間致病程度也有一定差異。

關(guān)鍵詞：安徽；棉花；黃萎病菌；培養(yǎng)性狀；致病性測定

中圖分類號：S435.621.2.4. 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-3143（2015）01-0018-05

DOI：10.3969/j.issn.2095-3143.2015.01.004

0 引言

棉花黃萎病是一種世界性土傳植物維管束萎蔫病害，危害嚴(yán)重，防治困難。作者通過對安徽省淮北棉區(qū)、江淮棉區(qū)及長江沿江棉區(qū)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所試驗(yàn)基地、東至大渡口、宿松縣和靈璧縣等地棉花黃萎病重病田發(fā)病率高達(dá)100%，局部棉田由于黃萎病危害猖獗而絕收。棉花黃萎病已成為安徽省棉花生產(chǎn)發(fā)展的重大制約因素之一。引起棉花黃萎病的大麗輪技菌（Verticillium dahliae.Kleb.）群體存在著豐富的遺傳多樣性。生態(tài)環(huán)境的不同和病菌本身的變異，常引起黃萎病菌產(chǎn)生生理分化，導(dǎo)致出現(xiàn)新的致病力類型[1-5]。美國Schanrhorst，等[6]根據(jù)大麗輪枝菌在4個鑒別寄主上的癥狀反應(yīng)類型，將世界各地的大麗輪枝菌，劃分為4個致病力類群。宋曉軒，等[7]將河南安陽菌系劃分為3種培養(yǎng)類型。目前，安徽省棉區(qū)黃萎病菌出現(xiàn)強(qiáng)致病力類型，但對安徽省不同區(qū)域來源的棉花黃萎病菌株的致病力類型及其致病力變異情況缺乏系統(tǒng)、深入的研究。為此，作者于2009～2010年從安徽省三大棉區(qū)分離黃萎病菌株，研究其培養(yǎng)特性和致病性分化情況，以期為棉花抗病（耐?。┢贩N在安徽省的合理布局和病害防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病株的分離、純化和保存

對照菌株V151由中國農(nóng)科院棉花所提供，其它供試菌株于2009～2010年先后從安徽省主要棉區(qū)棉花黃萎病秸稈中分離獲得（詳見表1）。對分離的菌株進(jìn)行鑒定，接入查氏培養(yǎng)液23℃振蕩培養(yǎng)7d，用濾紙過濾獲得孢子，采用稀釋平板法對菌株進(jìn)行單孢分離，將單孢分離物于PDA斜面培養(yǎng)并置4℃冰箱保存。

1.2 菌落培養(yǎng)性狀

將斜面菌種菌株平板活化后，隨后接入PDA平板培養(yǎng)14 d，用直徑為0.5 cm的打孔器取菌碟置于PDA平板中心，每皿1塊，接3皿，在23℃恒溫條件下培養(yǎng)15 d后測量菌落直徑，觀察菌落顏色、質(zhì)地和形態(tài)。參照宋曉軒，等[7]的方法，將棉花黃萎病菌分為菌核型、菌絲型和中間型3種培養(yǎng)類型。

1.3 黃萎病菌對感病品種的致病程度測定

采用苗期盆栽土壤接菌法進(jìn)行致病程度測定，供試棉花品種為感黃萎病品種冀棉11。將培養(yǎng)好的黃萎病菌棉籽培養(yǎng)物和無菌土混勻（重量比1︰19），將脫絨催芽后的棉種播在裝有病土的紙杯（高110 mm，直徑80 mm，用報紙卷制而成）中，每杯播8粒種子，每個菌株接種12杯。置人工氣候室相對濕度85%條件下培養(yǎng)，在棉苗長出3～4片真葉時進(jìn)行病情調(diào)查。參照石磊巖，等[2]溫室棉花苗期5級制進(jìn)行病情分級，計算病情指數(shù)。根據(jù)平均病情指數(shù)將病株致病程度劃分為強(qiáng)、中、弱3個類型，即強(qiáng)為平均病指35.1～100、中為平均病指20.1～35.0，弱為平均病指0.1～20.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同棉區(qū)來源棉花黃萎病菌的培養(yǎng)性狀比較

根據(jù)培養(yǎng)性狀的不同，將采自安徽各地的30個棉花黃萎病菌分成3種類型，其中24個為菌核型，占參試菌株的80.0%；有5個為中間型，占參試菌株的16.7%；1個為菌絲型，占參試菌株的3.3%（表2）。

2.2黃萎病菌對感病品種的致病程度測定結(jié)果

采用盆栽土壤接菌接種法測定不同菌株的致病程度，結(jié)果見表3。由表3可知，安徽省不同棉區(qū)來源的30個菌株致病程度有一定差異。具有強(qiáng)致病性的菌株有7株，占23.3%，這些菌株侵染后均表現(xiàn)為發(fā)病早、侵染快，致病性強(qiáng)，棉花植株葉片大量脫落，死苗率高。具有中等致病性的菌株有14株，占46.7%，表現(xiàn)為致病性居中，雖發(fā)病率較高，但落葉、死苗較少。致病性弱的菌株有9株，占30%，侵染后表現(xiàn)為發(fā)病遲緩，侵染慢，致病力弱，一般不造成落葉和形成死苗。

不同地區(qū)的菌株存在著致病程度的差異。如東至大渡口分離的VDZDK-1、VDZDK-2兩個菌株的病情指數(shù)分別為53.14和47.26，均為強(qiáng)致病性菌株；固鎮(zhèn)分離的VGZ-1、VGZ-2兩個菌株的病情指數(shù)分別為24.16和32.57，均為中等致病性的菌株；蕪湖無為分離到的VWW-1、VWW-2和VWW-3三個菌株的病情指數(shù)分別為16.23、17.98和16.32，均為弱致病性菌株。

研究還發(fā)現(xiàn)，同一地區(qū)的不同菌株存在著致病程度差異。其中安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所試驗(yàn)基地分離到的4個菌株，VAQ-1和VAQ-3病情指數(shù)高達(dá)56.24、65.32，屬于致病性強(qiáng)菌株；而VAQ-2、VAQ-4病情指數(shù)分別為31.56、24.62，屬于中等致病性菌株。

3 討論

通過安徽省不同棉區(qū)黃萎病菌對感病品種的致病程度測定，結(jié)果表明，各地黃萎病菌株致病程度存在較大差異，且大多數(shù)黃萎病菌以強(qiáng)致病性和中等致病性菌株為主，共占70.0%。1983年陸家云，等[8]首次報道江蘇有落葉型黃萎病菌株存在后，山東、河北、山西和河南安陽相繼發(fā)現(xiàn)落葉型黃萎病菌株[9-13]。本研究結(jié)果也表明，安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所試驗(yàn)基地、東至大渡口鎮(zhèn)、靈璧縣等3個地點(diǎn)有落葉型的強(qiáng)致病性菌株存在，在這些地區(qū)應(yīng)加強(qiáng)對該病原菌的監(jiān)測和推廣種植抗（耐）病品種。研究結(jié)果還表明，安徽省不同棉區(qū)黃萎病菌菌核型的菌株占多數(shù)。不同棉區(qū)分離到的黃萎病菌微菌核的形態(tài)和菌落特征存在明顯的差異，致病性也有明顯不同。

本試驗(yàn)僅對安徽省三大棉區(qū)的12個產(chǎn)棉市（縣）的棉田黃萎病菌進(jìn)行了研究，采集點(diǎn)覆蓋面不廣，同一地區(qū)取樣也偏少。因此，尚需對安徽省各棉區(qū)棉花黃萎病菌進(jìn)一步研究，全面摸清安徽棉花黃萎病菌致病力類型、分布和變異情況，為棉花抗（耐）病品種在安徽的布局和棉花黃萎病的綜合防治提供決策依據(jù)。

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收稿日期：2014-11-18

基金項(xiàng)目：安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長青年創(chuàng)新基金項(xiàng)目

作者簡介：於春（1982-），男，安徽懷寧人，碩士，助理研究員，從事棉花病蟲害綜合防治研究工作。

通訊作者：程福如（1962-），男，安徽桐城人，大學(xué)，研究員，主要從事棉花病蟲害綜合治理研究工作。