龔云麒，高小惠，李 瑩，張 偉，楊兆祥

(昆明制藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100)

正交試驗法優(yōu)選杧果葉中芒果苷的閃式提取工藝*

龔云麒，高小惠，李 瑩，張 偉△，楊兆祥

(昆明制藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100)

目的 研究杧果葉中芒果苷的閃式提取工藝。方法 以芒果苷的提取轉(zhuǎn)移率為指標，采用正交試驗設(shè)計，對閃式提取的影響因素進行考察。結(jié)果 閃式提取的最佳工藝是10倍70%乙醇、提取3次、每次提取8 min。結(jié)論 該方法操作簡單，速度快，提取率高，可為杧果葉的開發(fā)利用提供參考。

杧果葉；芒果苷；閃式提??；正交試驗

杧果葉為漆樹科植物芒果(MangiferaindicaL.)的葉，具有止咳、化滯、止癢的功效，主治消渴，疳積，濕疹瘙癢，疣[1]?，F(xiàn)代研究表明芒果葉提取物具有平喘、止咳、祛痰、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用[2]。芒果苷(mangiferin)又名芒果素，知母寧，為杧果葉中的有效成分。研究發(fā)現(xiàn)，芒果苷具有廣泛的藥理活性，包括抗糖尿病、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、解熱、鎮(zhèn)咳、平喘等作用[3]。此外，還有研究表明芒果苷可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平，具有促進腎臟尿酸排泄和保護腎功能作用[4]?？梢娒⒐站哂袕V泛的開發(fā)前景。

芒果苷提取，傳統(tǒng)的提取方法多為有機溶劑回流提取，存在提取時間長、能耗高等問題。近幾年發(fā)展的閃式提取技術(shù)是依據(jù)組織破碎提取的原理，利用適當溶劑在閃式提取器里將物料快速破碎至適當粒度，同時具有高速攪拌、超強振動、負壓滲濾等功能來達到提取目的，具有省時、節(jié)能、有利環(huán)保等優(yōu)勢[5]。本實驗以芒果苷含量為指標成分，應(yīng)用正交試驗，對閃式提取杧果葉中有效成分的工藝條件進行優(yōu)選，以期為提取杧果葉中芒果苷提供新的思路和數(shù)據(jù)支持。

1 儀器和試劑

JHBE-50T型閃式提取器(河南智晶科技有限公司)；步琦R-215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琦公司)；賽多利斯BP-221S型電子天平(德國賽多利斯公司)；Aglient1260高效液相色譜系統(tǒng)(美國安捷倫公司)。干燥杧果葉，購自西雙版納。經(jīng)中科院劉恩德博士鑒定為漆樹科植物芒果Mangifera indica L.的干燥葉。乙腈(美國Fisher公司，色譜純)；乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為 PhenomenexGimin C18(150 mm × 4.6 mm，5μm)；流動相：以0.2%磷酸水溶液-甲醇(70∶30)為流動相；檢測波長為240 nm；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃[6]。理論塔板數(shù)按芒果苷峰計算應(yīng)不低于5000，結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 芒果苷對照品色譜圖

圖2 杧果葉藥材色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芒果苷對照品適量，加80%甲醇溶解，并稀釋制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35kHz)30 min，放冷，稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 標準曲線的制備 精密稱取芒果苷對照品適量，加80%甲醇制成0.354 mg·mL-1的濃溶液，分別精密量取濃溶液適量，用80%甲醇分別稀釋成0.354、0.295、0.236、0.177、0.118、0.0886、0.0591、0.0295 mg·mL-1的對照品溶液，按照確定的色譜條件，分別取10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以芒果苷濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，的回歸方程為y=31133x-12.824，r=0.9999。

2.5 精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率實驗 取芒果苷對照品溶液，重復(fù)進樣6 次，記錄芒果苷峰面積，其RSD為0.28%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

分別精密吸取同一份供試品溶液于制備后0、1、2、4、6、8、10、12 h進樣，測定芒果苷的峰面積，其RSD為0.24%，說明芒果苷對照品溶液在常溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

取已知芒果苷質(zhì)量分數(shù)的藥材9份，加入相應(yīng)對照品溶液適量，制備供試品溶液，并按上述色譜條件進行測定，結(jié)果芒果苷平均回收率為102.4%，RSD%為2.55%，符合實驗要求。

2.6 正交試驗設(shè)計 參考文獻及相關(guān)報道，選用乙醇作溶劑設(shè)計正交試驗。選擇提取次數(shù)、提取時間、溶劑濃度、溶劑倍數(shù)為考察因素，每個因素設(shè)計4 個水平，采用(L1644)進行正交試驗。因素水平見表1。

表1 杧果葉閃式提取工藝研究正交試驗因素水平表

2.7 試驗方法和結(jié)果 分別稱取已知芒果苷質(zhì)量分數(shù)的杧果葉藥材粗粉50 g，根據(jù)因素水平表進行閃式提取，提取器轉(zhuǎn)速固定為2000r/min，提取后減壓抽濾，取濾渣，置干燥箱中干燥，測定濾渣中芒果苷的含量后計算芒果苷的轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表2。將數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果見表3。

表2 芒果苷閃式提取表

表3 方差分析表

F0.05(2，2)=19.00

由上述結(jié)果可看知，以提取轉(zhuǎn)移率為指標，各因素影響的大小依次為A>D>C>B。通過方差分析可知，4個因素中，A具有顯著性影響(P<0.05)，其他因素均不具有顯著影響。經(jīng)正交試驗得出的最佳組合是A3B2C3D1，即10倍70%乙醇、提取3次每次提取8min。

2.8 驗證試驗 稱取杧果葉藥材粗粉3份，每份50 g，按A3B2C3D1提取條件進行3次平行操作，測定芒果苷含量，計算轉(zhuǎn)移率，分別為97.86%，99.23%，98.49%，表明該方法穩(wěn)定可行。

3 討論

從試驗結(jié)果來看，運用閃式提取法對杧果葉中芒果苷進行提取，有效成分幾乎能夠完全被提取，試驗過程使用的溶劑全部為食用乙醇，無毒、廉價且易于回收。閃式提取與傳統(tǒng)加熱回流法相較，不需要加熱，降低了能耗，也減小了資源的浪費，而且保護了有效成分不受溫度的影響。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：(5)80-81.

[2]胡彥君，劉燊，王定勇.芒果葉的化學(xué)成分研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(3)：18-19.

[3]姚風(fēng)艷，孫連娜.芒果苷藥理作用及其結(jié)構(gòu)修飾的研究進展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20(12)：248-252.

[4]胡慶華，張憲，王玨，等.芒果苷促進高尿酸血癥小鼠尿酸排泄和腎功能改善以及調(diào)節(jié)相關(guān)腎臟轉(zhuǎn)運體的作用[J].藥學(xué)學(xué)報，2010，45(10)：1239-1246.

[5]劉延澤.植物組織破碎提取法及閃式提取器的創(chuàng)制與實踐[J].中國天然藥物，2007，5(6)：401-407.

Flash Extraction Process of Mangiferin in Mango Leaves by Orthogonal Test

GONG Yun-qi, GAO Xiao-hui, LI Ying, ZHANG Wei, YANG Zhao-xiang

(DrugInstitute,KunmingPharmaceuticalGroupCo.,Ltd.,Kunming650100,Yunnan)

Objective: To study the flash extraction process of mangiferin in mango leaves. Methods: By taking mangiferin extraction transfer rate as an index, orthogonal experiment was designed to investigate the influence factors of the flash extraction. Results: The optimal process of the flash extraction was 10 times of 70% ethanol, extracted three times and extracted 8 min each time. Conclusion: The method is simple and fast with high extraction rate and can provide a reference for the development and utilization of mango leaves.

mango leaves, mangiferin, flash extraction, orthogonal test

云南省科技計劃(NO：2012BC008).

龔云麒(1981.8-)，男，漢族，云南安寧人，工程師，從事植物有效成分提取分離研究，E-mail：gongyun911@163.com

△通信作者:張偉，Tel：0871-68183902，E-mail：wzhangkm@sohu.com

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2015-03-04)