劉德美

65例胸腹水細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)的研究和分析

劉德美

目的 探討細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)在胸腹水細(xì)胞學(xué)診斷中對提高腫瘤細(xì)胞陽性率、鑒別細(xì)胞良惡性、確定腫瘤細(xì)胞來源的臨床意義。方法 回顧性分析收集的65例胸腹水涂片、細(xì)胞塊和免疫細(xì)胞化學(xué)診斷, 并結(jié)合相關(guān)臨床病史。結(jié)果 65例胸腹水中有3例涂片中僅見幾個腫瘤細(xì)胞, 而細(xì)胞塊為陰性, 其余62例標(biāo)本涂片與細(xì)胞塊檢查結(jié)果完全相符；其中13例良性病變標(biāo)本細(xì)胞涂片及細(xì)胞塊均未查到腫瘤細(xì)胞或可疑細(xì)胞, 報告陰性；49例可疑陽性標(biāo)本或需鑒定惡性腫瘤細(xì)胞來源的, 通過免疫細(xì)胞化學(xué)均得到準(zhǔn)確結(jié)果。結(jié)論 細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)在胸腹水腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中對細(xì)胞良惡性的鑒別和鑒別組織來源具有良好的應(yīng)用價值, 值得推廣, 但對提高陽性率方面細(xì)胞塊不及普通涂片, 二者相互對照觀察有助于提高判斷結(jié)果準(zhǔn)確性, 對于細(xì)胞塊及免疫細(xì)胞化學(xué)的應(yīng)用應(yīng)注意與臨床資料及細(xì)胞學(xué)形態(tài)相結(jié)合, 做到合理選擇, 合理應(yīng)用。

細(xì)胞塊；免疫細(xì)胞化學(xué)；胸腹水；腫瘤細(xì)胞

近年來, 隨著惡性腫瘤的發(fā)病率逐年升高并有年輕化的趨勢, 腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療已成為醫(yī)療界的重點(diǎn)和難點(diǎn)課題［1］。特別對于漿膜腔積液是唯一體征的就診患者,其細(xì)胞學(xué)檢查則顯得極為重要。因很多惡性腫瘤常僅表現(xiàn)為體腔積液而原發(fā)部位隱匿［2］, 而單靠細(xì)胞形態(tài)很難明確腫瘤細(xì)胞來源和腫瘤細(xì)胞類型, 因此免疫細(xì)胞化學(xué)的檢測對鑒別診斷非常有價值［3,4］。近年來, 隨著細(xì)胞塊及免疫學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展和完善、抗原的純化和抗體制備技術(shù)的提高, 免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)已成為輔助細(xì)胞病理學(xué)診斷的重要方法［5］。本文收集了本院65例胸腹水標(biāo)本, 進(jìn)行普通涂片、細(xì)胞塊及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測分析, 旨在探討細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)在胸腹水腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中對于提高腫瘤細(xì)胞陽性率、鑒別細(xì)胞良惡性、確定惡性細(xì)胞來源的臨床意義, 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 65例送檢標(biāo)本包括胸水47例, 腹水18例,所有標(biāo)本均來自本院2014年1～7月住院及門診患者, 其中男36例, 年齡32～80歲, 平均年齡61.6歲；女29例, 年齡29～81歲, 平均60.1歲。65例中37例具有惡性腫瘤病史, 28例以胸腹水為首發(fā)癥狀, 表現(xiàn)為胸悶、納差、腹脹、肺不張、肺炎、胃潰瘍、冠心病、電解質(zhì)紊亂等, B超或CT檢查顯示胸腹腔積液。

1.2 標(biāo)本處理 將臨床送檢的胸腹水標(biāo)本置于50 ml離心管內(nèi), 2000 r/min離心10 min, 棄取上清液, 取離心后沉淀物或中間層的白膜(有核細(xì)胞層)涂片2張, 95%酒精固定、HE染色；剩余標(biāo)本(如果細(xì)胞量少則需多次離心)加入10%福爾馬林固定液, 離心、用濾紙包裹細(xì)胞團(tuán)、脫水、浸蠟、包埋,制成石蠟細(xì)胞塊, 切片1張, HE染色。

1.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 所用免疫化學(xué)試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司, 方法采用SP法, 所有操作均由經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)技術(shù)人員按說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作完成。本室胸腹水免疫細(xì)胞化學(xué)常用檢測項(xiàng)目有26項(xiàng)。見表1。

表1 常用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測項(xiàng)目

1.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 觀察細(xì)胞涂片的一般情況、細(xì)胞大小、形態(tài)、排列及細(xì)胞核的大小、形態(tài)、核漿比、染色質(zhì)、核仁 、核膜、胞漿等特點(diǎn)并結(jié)合臨床資料, 判定細(xì)胞良惡性。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及判定標(biāo)準(zhǔn)參照診斷細(xì)胞病理學(xué)及細(xì)胞病理學(xué)鑒別診斷彩色圖譜［2,6］, 如良性間皮細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞圓形、邊界清晰或微絨毛、核中心或偏心位、圓形或腎形、核膜邊界清晰、光滑、染色質(zhì)細(xì)顆粒狀、均勻分布、單個或多個微小核仁、漿豐富、淡或濃、外周漸淡。腺癌細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)：胞體大、大小不一、核漿比高、核畸形、核偏位、染色質(zhì)粗糙、深染、胞漿豐富、多有分泌現(xiàn)象、常成團(tuán)或乳頭狀排列等。普通涂片與細(xì)胞塊切片對照觀察, 對發(fā)現(xiàn)可疑細(xì)胞不能明確診斷者或有腫瘤細(xì)胞不能明確來源及腫瘤類型者, 選擇相應(yīng)的免疫細(xì)胞化學(xué)項(xiàng)目進(jìn)一步檢測；對于涂片中僅有幾個腫瘤細(xì)胞, 而細(xì)胞塊中未發(fā)現(xiàn)可疑細(xì)胞者, 不再進(jìn)行免疫化學(xué)檢測。1.5 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果判定 以原始涂片及細(xì)胞塊中細(xì)胞學(xué)形態(tài)為基礎(chǔ), 充分觀察免疫化學(xué)標(biāo)記后的目的細(xì)胞形態(tài),結(jié)合不同抗體標(biāo)記細(xì)胞不同的陽性部位及抗原在組織細(xì)胞分布的不規(guī)則性, 避免假陽性及假陰性, 嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)、準(zhǔn)確判讀免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記結(jié)果。

2 結(jié)果

65例胸腹水中有3例涂片僅見幾個腫瘤細(xì)胞, 而細(xì)胞塊為陰性, 其余62例標(biāo)本涂片與細(xì)胞塊檢查結(jié)果完全相符(占95.4%)；其中13例良性病變標(biāo)本涂片及細(xì)胞塊均未查到腫瘤細(xì)胞或可疑細(xì)胞, 報告陰性；5例可疑陽性及44例需鑒定腫瘤細(xì)胞來源的標(biāo)本, 通過免疫細(xì)胞化學(xué)均明確診斷結(jié)果。

65例標(biāo)本惡性腫瘤細(xì)胞陽性52例(占80.0%), 其中3例因腫瘤細(xì)胞極少, 結(jié)合臨床資料以細(xì)胞涂片結(jié)果報告；其余49例可疑陽性或陽性標(biāo)本根據(jù)各例不同的細(xì)胞形態(tài)及鑒別診斷需要、參考臨床資料, 選擇不同的項(xiàng)目組合, 進(jìn)行相應(yīng)的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測證實(shí)或進(jìn)一步確證為：肺癌27例, 卵巢癌14例, 胃腸道癌5例, 乳腺癌1例, 食管癌1例, 胰腺癌1例, 腎惡性腫瘤1例, 縱隔腫瘤1例, 惡性鞘膜瘤病1例。

52例惡性腫瘤胸腹水中腺癌38例, 占73.1 %；小細(xì)胞癌4例, 占7.7 %；鱗癌3例, 占5.8 %；其他惡性腫瘤5例,占9.6 %；細(xì)胞學(xué)不能明確類型者2例, 占3.8%。

3 討論

近年來, 隨著細(xì)胞學(xué)特別是細(xì)胞塊技術(shù)的發(fā)展, 免疫化學(xué)技術(shù)在胸腹水細(xì)胞學(xué)診斷中得到了進(jìn)一步的應(yīng)用。魏謹(jǐn)?shù)龋?］報道胸腔積液細(xì)胞塊組陽性率為83.3%(25/30), 高于常規(guī)涂片組46.7%(14/30), 兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而本文對65例胸腹水細(xì)胞塊及免疫細(xì)胞化學(xué)研究顯示, 常規(guī)涂片組(真陽性率80%)敏感度略高于細(xì)胞塊組(真陽性率75%), 提示在提高腫瘤細(xì)胞陽性率方面, 尤其當(dāng)腫瘤細(xì)胞極少時, 細(xì)胞塊并不具優(yōu)勢。對于細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察, 常規(guī)涂片中細(xì)胞形態(tài)舒展, 可觀察細(xì)胞量大, 易于辨認(rèn)；而細(xì)胞塊在制作過程中因脫水固定等程序, 使細(xì)胞體積相對變小, 形態(tài)略有變化,故不及常規(guī)涂片中形態(tài)典型, 但腫瘤細(xì)胞的排列更接近組織學(xué), 便于與組織學(xué)對照, 因此對于細(xì)胞塊中細(xì)胞形態(tài)觀察特別是異型性不明顯的單個腫瘤細(xì)胞的觀察, 應(yīng)與常規(guī)涂片相對照, 二者相互結(jié)合對照觀察可以彌補(bǔ)形態(tài)診斷上的不足。但細(xì)胞塊具有可連續(xù)切片、可重復(fù)性、易于保存、做免疫組化染色定位準(zhǔn)確、陽性率高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)［8-10］是普通涂片無法比擬的。

細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)對于鑒別細(xì)胞良惡性直接體現(xiàn)于對細(xì)胞組織學(xué)來源的推斷。通過免疫化學(xué)標(biāo)記胸腹水中的可疑細(xì)胞為外來細(xì)胞特別是上皮源性的細(xì)胞等, 間接判定良惡性。本文有5例胸腹水發(fā)現(xiàn)可疑細(xì)胞, 通過免疫化學(xué)標(biāo)記明確診斷為癌細(xì)胞, 49例標(biāo)本通過細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)檢測, 明確診斷及組織類型45例(91.8%), 結(jié)合臨床資料符合診斷2例,僅能鑒別良惡性細(xì)胞但不能明確組織類型者2例。這可能與抗體特異性及抗體組合的合理選用有關(guān), 也與免疫細(xì)胞化學(xué)檢測技術(shù)的局限性有關(guān), 有待于進(jìn)一步研究和探索。

關(guān)于抗體組合的合理選用, 一般應(yīng)遵循兩個原則, 一是確定性指標(biāo)與排除性指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用, 二是采用雙標(biāo)的方法。即選擇一組至少兩種互相支持的抗體, 同時再選用反向否定的抗體, 以同時獲得雙重互補(bǔ), 正反兩方面的證實(shí)。同時為避免假陽性和假陰性的發(fā)生, 選擇正確的陽性和陰性對照。因?yàn)榭贵w的相對特異性和一種抗原在同一種腫瘤以及不同腫瘤間的異源性表達(dá), 僅用一種抗體輔助診斷易產(chǎn)生誤差, 故宜選用幾種適當(dāng)?shù)目贵w組合應(yīng)用以提高診斷的敏感性和特異性［9,11］。本文對65例胸腹水細(xì)胞學(xué)診斷研究顯示, 細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)在胸腹水腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中對于細(xì)胞良惡性的鑒別和鑒別組織來源具有良好的應(yīng)用價值, 值得推廣應(yīng)用。但在應(yīng)用過程中必須注意以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ), 與臨床資料相結(jié)合, 合理選擇檢測項(xiàng)目, 做到三者聯(lián)合應(yīng)用, 對于提高細(xì)胞學(xué)診斷水平至關(guān)重要。

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Research and analysis of cell mass immunocytochemistry in 65 hydrothorax and ascite cases

LIU De- mei.Department of Pathology, Shandong Weifang City People’s Hospital, Weifang 261041, China

Objective To investigate clinical significance of cell mass immunocytochemistry in improving positive rate of tumor cell, identifying benign and malignant cells, determining tumor cell source in hydrothorax and ascite cytological diagnosis.Methods A retrospective analysis along with related clinical data was made on hydrothorax and ascite smear, cell mass, and immunocytochemical diagnosis in 65 cases.Results Among 65 hydrothorax and ascite cases, 3 cases of them had very few tumor cells with negative cell mass.The other 62 cases had totally corresponding smear and detection results.There were 13 cases without tumor cell or suspected cell in benign smear and cell mass, with negative report.There were 49 cases had accurate results for suspected positive smear and malignant cell source by immunocytochemistry.Conclusion Cell mass immunocytochemistry provides good application value for identification of benign and malignant cell and tissue source, and it is worthy of promotion.Its positive rate is lower than normal smear in improvement, and their combination can improve accuracy of diagnosis.Combined clinical data and cellular morphology are necessary for cell mass and immunocytochemistry.It is necessary for rational choice and application.

Cell mass; Immunocytochemistry; Hydrothorax and ascite; Tumor cell

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.009

2015-01-30］

261041 山東省濰坊市人民醫(yī)院病理科