夏光概 張常華 魏哲威 向臻 朱錦濤 周志軍 何裕隆

?

·論 著·(胃腸道腫瘤專題)

胃癌中CXCL5表達與臨床預(yù)后的關(guān)系

夏光概 張常華 魏哲威 向臻 朱錦濤 周志軍 何裕隆

目的 檢測趨化因子5(CXCL5)在胃癌中的表達，探討其表達與病人臨床病理特征和生存的關(guān)系。方法 收集104例胃癌組織標(biāo)本及其臨床病例資料，采用免疫組織化學(xué)(IHC)檢測胃癌組織中CXCL5的表達。染色后閱片評分，采用卡方檢驗、Log-rank、Kaplan-Meier、Cox回歸模型分析CXCL5的表達與臨床病例特征和胃癌病人預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果 IHC結(jié)果顯示104例胃癌標(biāo)本中有45例(43.2%)CXCL5高表達，癌組織中CXCL5高表達與胃癌病人的TNM分期呈正相關(guān)(P=0.007)，CXCL5高表達組病人預(yù)后顯著低于其低表達組，5年生存率分別為28.7%和62.8%(P<0.001)，Cox回歸模型發(fā)現(xiàn)CXCL5的表達是胃癌病人的獨立預(yù)后因素之一(HR=2.280，CI：1.301～3.998，P=0.004)。結(jié)論 CXCL5是影響胃癌病人預(yù)后的獨立因素，可能與胃癌的進展有關(guān)。

趨化因子5；胃癌；免疫組織化學(xué)；預(yù)后

我國每年胃癌新發(fā)病例與死亡病例約占世界胃癌病例的40%[1]。進展期胃癌病人預(yù)后差，5年生存率仍徘徊在37%[2]。趨化因子5(CXCL5)是一種趨化因子，可以由炎癥細胞(中性粒細胞、巨噬細胞、單核細胞等)分泌，可以促進血管生成及趨化粒細胞的作用。在前列腺癌、肝癌、肺癌等中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CXCL5可以促進腫瘤進展[3-5]。并且還有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境也可以分泌CXCL5而促進腫瘤進展[6]。然而，在胃癌中的相關(guān)研究未見報道。所以本實驗的目的，是通過用免疫組化的方法檢測胃癌中CXCL5的表達，并分析CXCL5表達與胃癌病人臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，初步探討CXCL5在胃癌進展中的作用。

材料與方法

一、標(biāo)本來源

收集2005年12月至2007年12月期間中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸中心手術(shù)切除胃癌標(biāo)本104例，均經(jīng)病例證實為胃癌。104例胃癌病人中，根據(jù)AJCC分期(TNM)，Ⅰ期3例，Ⅱ期33例，Ⅲ期54例，Ⅳ期14例。生存隨訪至2013年12月。

二、主要試劑和儀器

CXCL5兔多克隆抗體(ab9802)購于美國Abcam公司。免疫組化兔鼠通用試劑盒(CW0120A)購于中國康為世紀(jì)公司。

三、免疫組化方法及評分

石蠟切片先放在烤箱中65℃條件下1 h，后轉(zhuǎn)移至二甲苯中10 min 2遍，后用梯度酒精無水乙醇、95%乙醇、75%乙醇進行水化各5 min，最后浸入雙蒸水中5 min，配置好檸檬酸修復(fù)液，將切片浸入修復(fù)液中，高壓鍋煮沸5 min，自然冷卻后，將切片浸入PBS中浸泡2次，每次5 min，后浸入PBST(0.1%Triton)通透10 min，PBS浸泡2次，每次5 min，后用3%雙氧水浸泡20 min，PBS浸泡2次，山羊血清封閉20 min，滴加1抗(1∶100)4℃過夜，滴加二抗孵育30 min，滴加辣根過氧化物酶孵育20 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，最后用中心樹膠封片。采用染色面積評分方法：0分：陽性細胞少于10%，1分：陽性細胞10%～25%，2分：25%～50%，3分：50%～75%，4分：大于75%。兩位病理學(xué)專家進行獨立評分。用ROC曲線計算評分的cut-off值，大于cut-off值為陽性，反之染色則為陰性。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS(17.0版)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。卡方檢驗CXCL5表達與臨床病理特征之間的關(guān)系。生存曲線用Kaplan-Meier方法，組間生存率差異用Log-rank檢驗方法，使用Cox風(fēng)險比例模型做多因素分析。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、CXCL5在胃癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系

在104例胃癌病人中，共45例CXCL5表達陽性，CXCL5的陽性表達率為43.2%。CXCL5表達情況見圖1，癌組織中CXCL5表達呈陽性，而癌旁CXCL5表達呈陰性。進一步行癌組織CXCL5表達與病人臨床病理特征的相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCL5的表達與胃癌病人的TMN分期密切相關(guān)(P=0.007)，而與年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)分型等無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性(表1)。

二、胃癌中CXCL5的表達與病人預(yù)后的關(guān)系

截至2013年12月，所有隨訪病人中死亡53例，失訪8例。所有病人的中位總生存期為44.7個月。采用單因素生存分析顯示漿膜浸潤、M分期、CXCL5的表達是影響胃癌病人的預(yù)后相關(guān)因素(表2)。CXCL5低表達組5年生存率明顯高于高表達組(62.8%比28.7%，P<0.001)，生存曲線見圖2?；貧w模型多因素生存分析同樣也顯示漿膜浸潤(HR=3.770，CI:1.782～7.975；P=0.001)、M分期(HR=2.267，CI:1.188～4.324；P=0.013)和CXCL5表達(HR=2.280，CI:1.301～3.998；P=0.004)的是影響病人預(yù)后的獨立因素(表3)。

表1 胃癌組織CXCL5表達與病人臨床病理特征的關(guān)系(例)

項目例數(shù)低表達(59例)高表達(45例)P值年齡0．851 <60歲593326 ≥60歲452619性別0．438 男性754134 女性291811腫瘤直徑0．084 <5cm543519 ≥5cm502426Borrmann分型0．140 Ⅰ312 Ⅱ332310 Ⅲ543024 Ⅳ1459組織學(xué)分型0．670 高分化110 中分化331914 低分化703931 未分化000pT分期0．163 T1+T2332211 T3+T4713734pN分期0．001 N025205 N1512922 N21798 N311110M分期0．053 M0855233 M119712pTNM分期0．007 I16133 II16115 III533023 Ⅳ19514

表2 回歸模式單因素生存分析結(jié)果

表3 回歸模式多因素生存分析結(jié)果

圖2 CXCL5高、低表達胃癌病人的生存曲線

討 論

腫瘤新生血管的生成可以促進腫瘤的生長以及轉(zhuǎn)移，CXCL5是一種配體，可以與相應(yīng)的受體CXCR2相結(jié)合，已有文獻報道CXCR2的另一配體CXCL1可以結(jié)合內(nèi)皮細胞上的CXCR2受體，促進管腔形成[7]，我們之前也有實驗證明胃癌細胞分泌的CXCL1可以通過結(jié)合淋巴管內(nèi)皮細胞上的CXCR2受體，激活FAK通路，促進淋巴管形成，從而有利于胃癌的轉(zhuǎn)移[8]。同樣在腫瘤細胞中，也有報道CXCR2的激活可以促進腫瘤中血管的生成以及腫瘤細胞自身的增殖[9-11]，在前列腺等癌中CXCL5可以通過結(jié)合受體CXCR2激活下游的MAPK和PI3K通路，促進腫瘤細胞的增殖以及侵襲遷移[3，11]。最新研究也發(fā)現(xiàn)，CXCL5可以通過激活PI3K/Akt/GSK-3β/Snail路徑，促進肝癌細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)[12]。因此，CXCL5在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，阻斷CXCL5信號通路應(yīng)該可以抑制腫瘤的進展。

本研究中，我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測CXCL5的表達，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CXCL5的陽性表達率為43.2%。進一步分析發(fā)現(xiàn)CXCL5高表達與胃癌淋巴結(jié)分期密切相關(guān)，表明胃癌組織分泌的CXCL5可能也有與CXCL1同樣的作用，通過與淋巴管內(nèi)皮細胞上的CXCR2受體結(jié)合激活FAK通路促進淋巴管的形成，從而促進胃癌淋巴管的轉(zhuǎn)移。同時，我們的分析顯示CXCL5表達的強弱與T分期密切相關(guān)，已有文獻報道CXCR2受體激活可以促進口腔鱗癌細胞和血管內(nèi)皮細胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2和MMP9[13-14]，從另一方面印證著CXCL5可能促進胃癌細胞分泌MMP，從而促進腫瘤細胞的侵襲。對于M分期，由于本實驗中轉(zhuǎn)移病例數(shù)較少，CXCL5的表達并沒有得到統(tǒng)計學(xué)上的相關(guān)。胃癌病人生存分析，多因素和多因素生存分析結(jié)果均顯示CXCL5是影響胃癌病人預(yù)后的因素，CXCL5高表達的胃癌病人預(yù)后差，CXCL5表達是影響胃癌預(yù)后的獨立因素。

綜上所述，本結(jié)果顯示CXCL5在胃癌組織中高表達，CXCL5表達與胃癌病人臨床病理分期和預(yù)后密切相關(guān)，高表達者分期晚、預(yù)后差，提示CXCL5可作為評價胃癌預(yù)后的標(biāo)記物。CXCL5在胃癌發(fā)生發(fā)展中有著重要作用，可能通過促進腫瘤新生血管以及淋巴管的形成來促進腫瘤的進展。

(本文圖1見目次Ⅳ)

1 Ferlay J, Shin HR, Bray F, et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008. Int J Cancer, 2010, 127:2893-2917.

2 Ajani JA, Bentrem DJ, Besh S, et al. Gastric cancer, version 2.2013: featured updates to the NCCN Guidelines. J Natl Compr Canc Netw, 2013,11:531-546.

3 Begley LA, Kasina S, Mehra R, et al. CXCL5 promotes prostate cancer progression. Neoplasia, 2008,10:244-254.

4 Kowalczuk O, Burzykowski T, Niklinska WE, et al. CXCL5 as a potential novel prognostic factor in early stage non-small cell lung cancer: results of a study of expression levels of 23 genes. Tumour Biol, 2014，35:4619-4628.

5 Xu X, Huang P, Yang B, et al. Roles of CXCL5 on migration and invasion of liver cancer cells. J Transl Med, 2014,12:193.

6 Garcia-Gomez A, De Las Rivas J, Ocio EM, et al. Transcriptomic profile induced in bone marrow mesenchymal stromal cells after interaction with multiple myeloma cells: implications in myeloma progression and myeloma bone disease. Oncotarget, 2014,5:8284-8305.

7 Miyake M, Goodison S, Urquidi V, et al. Expression of CXCL1 in human endothelial cells induces angiogenesis through the CXCR2 receptor and the ERK1/2 and EGF pathways. Lab Invest, 2013,93:768-778.

8 Xu J, Zhang C, He Y, et al. Lymphatic endothelial cell-secreted CXCL1 stimulates lymphangiogenesis and metastasis of gastric cancer. Int J Cancer, 2012, 130:787-797.

9 Lee YS, Choi I, Ning Y, et al. Interleukin-8 and its receptor CXCR2 in the tumour microenvironment promote colon cancer growth, progression and metastasis. Br J Cancer, 2012,106:1833-1841.

10Sharma B, Nawandar DM, Nannuru KC, et al. Targeting CXCR2 enhances chemotherapeutic response, inhibits mammary tumor growth, angiogenesis, and lung metastasis. Mol Cancer Ther, 2013,12:799-808.11Verbeke H, Geboes K, Van Damme J, et al. The role of CXC chemokines in the transition of chronic inflammation to esophageal and gastric cancer. Biochim Biophys Acta, 2012, 1825:117-129.

12Zhou SL, Zhou ZJ, Hu ZQ, et al. CXCR2/CXCL5 axis contributes to epithelial-mesenchymal transition of HCC cells through activating PI3K/Akt/GSK-3beta/Snail signaling. Cancer Lett, 2014, pii: S0304-S3835.

13Khurram SA, Bingle L, McCabe BM, et al. The chemokine receptors CXCR1 and CXCR2 regulate oral cancer cell behaviour. J Oral Pathol Med, 2014,43:667-674.

14Li A, Varney ML, Valasek J, et al. Autocrine role of interleukin-8 in induction of endothelial cell proliferation, survival, migration and MMP-2 production and angiogenesis. Angiogenesis,2005 8:63-71.

Expression and prognostic role of CXCL5 in gastric cancer

XiaGuanggai,ZhangChanghua,WeiZhewei,XiangZhen,ZhuJintao,ZhouZhijun,HeYulong.

DepartmentofGastrointestinalSurgery,FirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China

Correspondingauthor:ZhangChanghua,Email:zhchangh@mail.sysu.edu.cn

Objective To evaluate the CXCL5 expression and its prognostic role in gastric cancer.Methods The expression of CXCL5 in gastric cancer was detected by immunohistochemistry (IHC). And association between the expression of CXCL5 and clinicopathological characteristics was analyzed among 104 gastric cancer patients.Results The expression of CXCL5 was detected in 45 cases (43.2%). CXCL5 expression was significantly associated with TNM stage (P=0.007). Overall survival in low CXCL5 expression group was significantly higher than that in the high CXCL5 expression group (62.8% vs 28.7%,P<0.01). CXCL5 expression was an independent prognostic factor according to multivariable Cox-regression survival analysis (HR=2.280, CI: 1.301-3.998;P=0.004).Conclusions CXCL5 may be a predictive prognostic biomarker for gastric cancer. And it has probably important roles in the development of gastric cancer.

CXCL5; Gastric caner; Immunohistochemistry; Prognosis

國家自然科學(xué)基金(No.81272643,81272637)

510080 廣州，中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科 中山大學(xué)胃癌診治中心

張常華，Email: zhchangh@mail.sysu.edu.cn

R735.2

A

10.3969/j.issn.1003-5591.2015.01.008

2015-01-08)