黨曉鵬，寧明正

(1.陜西金冠牧業(yè)有限公司，陜西西安710018；2.陜西省蒲城縣龍陽畜牧獸醫(yī)站，陜西蒲城715507)

某農(nóng)戶小型種豬場疑似感染偽狂犬病病毒，為了檢測出野毒感染豬，凈化偽狂犬病，提高豬群健康水平，采用PRV gE抗體ELISA檢測試劑盒，對該場免疫了豬偽狂犬病基因缺失疫苗的豬群進行5次野毒感染檢測；同時應用實時熒光PCR檢測試劑盒，對有臨床癥狀的新生仔豬進行PRV病原檢測。經(jīng)過連續(xù)監(jiān)測、綜合防控并適時淘汰，該豬場的PRV野毒感染率降為1.72%，發(fā)病仔豬偽狂犬病毒野毒陽性率均降為零。豬場新生仔豬成活率提高，豬群基本無PRV感染，凈化效果良好。

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一種急性傳染病，我國將其列為二類傳染病。該病在豬群中呈暴發(fā)性流行，母豬和種公豬臨床主要表現(xiàn)為繁殖障礙，新生仔豬多伴有神經(jīng)癥狀，感染率可高達100%；育肥豬感染后表現(xiàn)為慢性癥狀，或呈隱性感染?？祻筒∝i長期帶毒排毒，成為本病的主要傳染源，豬群整體生產(chǎn)性能低下，妊娠母豬以流產(chǎn)、木乃伊、死胎、弱仔增多等為主要癥狀。

農(nóng)戶小型種豬場 （基礎母豬100頭左右）在豬病凈化方面難度較大，豬場衛(wèi)生隔離消毒防疫等設施較差，種豬來源復雜多樣，豬瘟（HC）、豬Ⅱ型圓環(huán)病毒 （PCV2）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬傳染性胸膜肺炎（APP）、副豬嗜血桿菌病（HPS）等混合感染普遍，感染豬及帶毒豬淘汰措施難以執(zhí)行等。但針對豬偽狂犬病的凈化條件目前已基本具備，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接種，二是有可區(qū)分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體的PRV gE抗體ELISA試劑盒和檢測PRV病原的實時熒光PCR檢測試劑盒，在此基礎上結合消毒隔離等生物安全措施，逐步淘汰陽性感染豬，引入陰性種豬，在2～3年的時間里完全可以將豬偽狂犬病徹底凈化。國內(nèi)許多大型規(guī)模化種豬場已經(jīng)據(jù)此方法完成了偽狂犬病的控制與凈化，成功地清除了偽狂犬病。本試驗用PRV gE抗體ELISA檢測試劑盒，對豬場的偽狂犬病野毒感染情況進行抽樣檢測，應用實時熒光PCR檢測試劑盒，對表現(xiàn)有臨床癥狀的仔豬進行實時熒光PRV病原檢測。然后根據(jù)抗體和病原檢測結果制定切實可行的凈化方案。

通過科學嚴格的疫苗接種，連續(xù)對豬群進行5次抽樣檢測，包括PRV gE抗體和疑似病仔豬病原檢測，隔離飼養(yǎng)乃至淘汰陽性豬，加強飼養(yǎng)管理衛(wèi)生消毒等技術措施，使得該豬場的PRV野毒感染率由45.45%逐步降低至1.72%，發(fā)病仔豬偽狂犬病野毒陽性率由48.28%降至0%，基本凈化了偽狂犬病。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

陜西蒲城某種豬場。存欄種公豬7頭，能繁母豬135頭。年出售商品仔豬近2000頭。將豬群分組：哺乳仔豬、保育豬、中大豬、后備母豬、空懷母豬、妊娠母豬及種公豬。種公豬逐只采樣，其他每組分別抽樣20%。

1.2 基因缺失疫苗

采用豬偽狂犬病基因缺失弱毒疫苗(gE、TK基因缺失)。

1.3 檢測試劑盒

偽狂犬病gE缺失ELISA診斷試劑盒，購自武漢科前公司；豬偽狂犬病病毒(gE基因)實時熒光PCR檢測試劑盒，購自北京世紀元亨公司。

1.4 PRV

gE抗體檢測在2014年的3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血樣1次，按照PRV gE抗體檢測試劑盒說明書要求檢測 PRV野毒感染抗體。

結果判定：在酶標儀上測各孔OD630nm值。試驗成立條件是陰性對照孔平均OD630nm值與陽性對照孔平均OD630nm值之差≥0.4。

S=樣品孔OD630nm值，N=陰性對照孔平均OD630nm值。

若S/N比值≤0.6，樣品判為PRV抗體陽性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,該樣品必須重測，如果結果相同，則過一段時間后重新采集血樣進行檢測。

若S/N比值＞0.7,樣品判為PRV抗體陰性。

1.5 PRV核酸檢測

對疑似PR發(fā)病仔豬剖檢，采集淋巴結組織，處理后用豬偽狂犬病病毒(gE基因)實時熒光PCR檢測試劑盒進行病原檢測，操作方法按照試劑盒說明書進行。

結果判斷：被檢樣品ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴增曲線為PRV野毒陽性，被檢樣品30＜Ct＜37并出現(xiàn)特定的擴增曲線，需要重新取樣提取DNA，擴增后進行結果判定，如仍為可疑，則判定為陽性；被檢樣品ct值＞37時，判定為陰性；對于某些未呈現(xiàn)S型曲線，但本底值較高的樣品，判為陰性。

1.6 免疫程序

2014年3月以來，選用豬偽狂犬病基因缺失弱毒疫苗(gE、TK基因缺失)進行全群免疫。仔豬3日齡滴鼻免疫，8周齡再肌注免疫1次；種公母豬每3個月免1次，后備母豬配種前免疫2次。

1.7 綜合防控措施

加強豬場管理，嚴格門禁制度，人員車輛出入豬場必須嚴格消毒。對豬舍飼養(yǎng)設施設備、豬場內(nèi)外環(huán)境進行定期消毒。所有死亡豬只，流產(chǎn)胎兒及死胎等，進行焚燒深埋等無害化處理。加強豬場的環(huán)境衛(wèi)生和滅鼠、滅蚊工作，禁止在豬場飼養(yǎng)其他動物。根據(jù)免疫監(jiān)測情況對陽性豬只進行隔離飼養(yǎng)或淘汰。由于初期豬群陽性率較高，豬場老板從經(jīng)濟角度考慮不同意一次性淘汰過多，而是先淘汰發(fā)病豬，帶毒豬繼續(xù)監(jiān)測觀察；后期陽性率較低時清除陽性豬。 堅持自繁自養(yǎng)，健康豬與帶毒豬嚴格隔離飼養(yǎng)。選用優(yōu)質(zhì)配合飼料，飲水清潔衛(wèi)生，糞尿污物及時清洗，圈舍定期消毒。

2 結果

2.1 PRV

gE抗體檢測結果見表1。豬群gE野毒抗體的陽性率由首次檢測的45.45%降至第5次檢測的1.72%，說明豬群偽狂犬病野毒抗體逐步降低，凈化初步成功。最后一頭陽性帶毒豬建議豬場盡快淘汰，半年后應再復查一次。

表1 PRV gE野毒抗體檢測結果

2.2 PRV核酸檢測結果見表2

表2 PR病毒核酸檢測結果

在凈化之初，對有臨床癥狀的仔豬進行PRV野毒實時熒光PCR檢測，結果表明豬場新生仔豬及保育豬群呈現(xiàn)感染狀態(tài)，陽性率達48.28%。采取凈化方案后，豬群健康狀況趨于良好。第2次檢測時，發(fā)病仔豬群偽狂犬病野毒陽性率已降至27.78%；到2015年3月，仔豬群抽樣結果顯示陽性率已經(jīng)為0%，且再無新的偽狂犬病仔豬出現(xiàn)。

3 討論

我國預防豬偽狂犬病主要采取免疫接種的方式，首選疫苗為豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗。偽狂犬病gE抗體ELISA檢測試劑盒能區(qū)分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，通過檢測可判斷豬只是否感染偽狂犬病野毒。豬偽狂犬病病毒(gE基因)實時熒光PCR檢測試劑盒可對病料進行病原檢測。通過五次連續(xù)監(jiān)測結果表明，農(nóng)戶小型種豬場在實施科學免疫接種的基礎上，結合抗體和病原檢測，嚴格隔離、淘汰、凈化，完全能夠清除野毒感染,使種豬場成為偽狂犬病陰性豬場。