戴 青，龔 飛，郁建平

（貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)550025）

藤茶是我國(guó)特有的藥茶兼用植物，富含二氫楊梅素（dihydromyricetin，DMY）等黃酮類物質(zhì)，具有抗炎抗菌、抗氧化、降血糖等作用[1－5]。有研究表明，用藤茶黃酮及二氫楊梅素作飼料添加劑，能有效提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力，增強(qiáng)生產(chǎn)性能、促進(jìn)生長(zhǎng)，可改善動(dòng)物的肉質(zhì)品質(zhì)，作為新型綠色無(wú)公害飼料添加劑具有廣闊的應(yīng)用前景[6－8]，但目前在畜牧業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用水平和廣泛程度還不高。隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；牟粩喟l(fā)展，為了防治畜禽疾病、提高經(jīng)濟(jì)效益，人們?cè)陲暳现刑砑痈鞣N抗生素、激素等添加劑，但長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致許多不良后果，如畜產(chǎn)品中藥物殘留，通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，給人類疾病防治帶來(lái)困難，造成嚴(yán)重安全隱患[6]。因此，研究安全、高效和環(huán)保的新型飼料添加劑具有十分重要的意義。為藤茶資源的合理開(kāi)發(fā)利用以及其在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考依據(jù)，筆者于2014年3—5月進(jìn)行了藤茶中二氫楊梅素對(duì)雞內(nèi)臟器官質(zhì)量及指數(shù)、小腸消化酶活性的影響試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

選用96只體重相近、健康的40日齡貴州瑤山雞，隨機(jī)分為4組，每組3次重復(fù)，每重復(fù)8只雞，試驗(yàn)期70d。試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別在基礎(chǔ)日糧（表1）中添加0.025%、0.05%和0.1%的二氫楊梅素（由貴州大學(xué)生化營(yíng)養(yǎng)研究所植化實(shí)驗(yàn)室提取），試驗(yàn)Ⅳ組（對(duì)照組）只喂基礎(chǔ)日糧，其他飼養(yǎng)管理措施一致。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diets（air dry basis）

1.2 內(nèi)臟器官采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束后隨機(jī)從各組每個(gè)重復(fù)中各選取2只雞稱重，然后放血致死、脫毛，迅速剖開(kāi)腹腔取出心臟、肝臟、腺胃、肌胃、肺、小腸，去出腺胃、肌胃、腸道中的食糜，用吸水紙吸去器官表面水分后稱重。用尺子測(cè)量腸道總長(zhǎng)度，每只雞截取腸道1cm，擠出食糜并用生理鹽水清洗后裝入凍存管于－20℃保存。計(jì)算臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)（相對(duì)質(zhì)量）＝（臟器鮮質(zhì)量／活體質(zhì)量）×100%。

1.3 小腸的消化酶測(cè)定

1.3.1 樣本前處理 準(zhǔn)確稱取腸組織重量，按重量（g）∶體積（mL）＝1∶9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2 500r／min離心10min，分別收集上清液。

1.3.2 蛋白酶測(cè)定 取上清液用生理鹽水稀釋10倍，取樣50μL用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定待測(cè)勻漿蛋白濃度。取3支試管，其中2支為測(cè)定管，1支為空白管，分別在每管內(nèi)加入1.5mL蛋白酶底物應(yīng)用液，37℃預(yù)溫5min，然后在測(cè)定管中各加15μL 樣本，在空白管中加15μL樣本勻漿介質(zhì)。加入樣本的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，混勻后倒入0.5cm 光徑的石英比色皿中，于253nm 處測(cè)定吸光度，記下30s時(shí)的吸光度值A(chǔ)1，將比色皿置于比色槽中不動(dòng)，同時(shí)將比色槽溫度恒定保持在37℃，于20.5 min時(shí)測(cè)定吸光度值A(chǔ)2后計(jì)算酶活力。在pH 8.0 和37℃條件下，1mg蛋白中含有的蛋白酶1 min 使吸光度變化0.003即為1個(gè)蛋白酶活力單位。

1.3.3 淀粉酶測(cè)定 取上清液用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，底物緩沖液先于37℃預(yù)溫5 min。取3支試管，其中2支為測(cè)定管，1支為空白管，分別在每管內(nèi)加入0.5mL 底物緩沖液，然后在測(cè)定管內(nèi)分別加0.1mL待測(cè)樣本（空白管內(nèi)不加），混勻，37℃水浴，準(zhǔn)確反應(yīng)7.5 min，取出后沸水滅活，再每管分別加0.5 mL 碘應(yīng)用液。最后，測(cè)定管各加3.0mL蒸餾水，空白管加3.1mL 蒸餾水，混勻，于波長(zhǎng)660nm，1cm 光徑比色，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度后計(jì)算酶活力。組織中1mg蛋白在37℃與底物作用30min，水解10mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)處理軟件中ANOVA 模塊進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan氏法對(duì)各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)臟器官的質(zhì)量及指數(shù)

從表2看出，添加二氫楊梅素試驗(yàn)組的心臟、肺質(zhì)量與對(duì)照組間差異均不顯著，其中，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組的心臟質(zhì)量分別比對(duì)照組高3.93%和13.87%，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅲ組的肺質(zhì)量分別比對(duì)照組高22.57%和7.93%。添加二氫楊梅素試驗(yàn)組的肝臟、胃質(zhì)量均低于對(duì)照組，其中，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組的肝臟質(zhì)量與對(duì)照組間差異顯著，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的胃質(zhì)量分別比對(duì)照組低14.69%、28.81%和15.11%，其中，Ⅰ組、Ⅲ組與對(duì)照組間差異顯著，Ⅱ組與對(duì)照組間差異極顯著。

各組間心臟、肝臟指數(shù)差異均不顯著，肝臟指數(shù)均低于對(duì)照組。胃指數(shù)試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅲ組顯著低于對(duì)照組；試驗(yàn)Ⅱ組顯著低于試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅲ組，極顯著低于對(duì)照組。肺指數(shù)試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組與對(duì)照組間差異均不顯著，但試驗(yàn)Ⅱ組與Ⅰ組、Ⅲ組間差異均顯著（表2）。

2.2 小腸長(zhǎng)度及消化酶活性

從表3看出，添加二氫楊梅素飼喂貴州瑤山雞對(duì)其小腸長(zhǎng)度、消化酶活性有顯著或極顯著影響。腸道長(zhǎng)度試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別比對(duì)照組增加6.30%、13.04%和6.90%，其中，試驗(yàn)Ⅱ組與對(duì)照組間差異顯著，其余各組間差異不顯著。小腸蛋白酶活性試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別比對(duì)照組高65.34%、70.75%和31.98%，其中，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組與對(duì)照組間差異顯著，Ⅲ組與對(duì)照組間差異不顯著，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組間差異均不顯著。小腸淀粉酶活性試驗(yàn)Ⅲ組較對(duì)照組顯著提高30.22%，試驗(yàn)Ⅱ組較對(duì)照組提高16.55%，試驗(yàn)Ⅰ組較對(duì)照組降低8.03%，但與對(duì)照組間差異均不顯著；試驗(yàn)Ⅰ組與Ⅱ組間差異顯著，Ⅰ組與Ⅲ組間差異極顯著。

表2 試驗(yàn)各組貴州瑤山雞的內(nèi)臟器官質(zhì)量和臟器指數(shù)Table 2 The visceral organ weight and organ index of each group of Yaoshan chickens

表3 試驗(yàn)各組貴州瑤山雞的小腸長(zhǎng)度及消化酶活性Table 3 The intestine length and digestive enzymes activity of each group of Yaoshan chickens

3 結(jié)論與討論

1）二氫楊梅素（DMY）對(duì)雞內(nèi)臟器官的影響。內(nèi)臟器官是各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場(chǎng)所，健康及生長(zhǎng)良好的內(nèi)臟器官是肉雞快速生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，只有當(dāng)內(nèi)臟器官得到充分發(fā)育，才能為肌肉等養(yǎng)分消耗器官的物質(zhì)合成奠定基礎(chǔ)[9]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于DMY 對(duì)雞心、肝、胃、肺等器官指數(shù)及發(fā)育的影響研究較少，且主要集中于對(duì)免疫器官的影響方面。試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加DMY 組雞的心臟、肺質(zhì)量與對(duì)照組間均無(wú)顯著差異，與張繼東等[10]研究桂皮型中草藥添加劑對(duì)雞心臟等器官的影響結(jié)果一致。但本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加0.05%和0.1%的DMY 可顯著降低雞的肝臟質(zhì)量，0.025%、0.1%的DMY 可顯著降低雞的胃質(zhì)量，0.05%的DMY 可極顯著降低胃質(zhì)量。原因可能是DMY 加快食糜在胃腸道中的消化速度，減小了胃腸道的消化負(fù)擔(dān)。

臟器質(zhì)量及指數(shù)能近似反應(yīng)動(dòng)物的生理狀況及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)程度。臟器指數(shù)可從另一側(cè)面反應(yīng)產(chǎn)肉性能，指數(shù)越小則意味著更高的產(chǎn)肉可能[11－12]。試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加DMY 對(duì)雞心臟、肝臟和肺指數(shù)無(wú)顯著影響，但添加0.025%和0.1%的DMY 可顯著降低胃指數(shù)，0.05%的DMY 可極顯著降低胃指數(shù)，表明日糧中添加DMY 可影響雞消化器官的生長(zhǎng)發(fā)育。劉麗等[13]研究日糧水平對(duì)雞內(nèi)臟器官質(zhì)量及指數(shù)的影響發(fā)現(xiàn)，臟器指數(shù)與活體質(zhì)量間呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)性大小依臟器不同而有所差異。而本試驗(yàn)中各臟器指數(shù)并不完全與活體質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)，這可能與試驗(yàn)雞品種和飼養(yǎng)環(huán)境等不同有關(guān)。在屠宰過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，各組雞的心、肝、胃和肺的形狀和顏色無(wú)明顯差異。

2）二氫楊梅素（DMY）對(duì)雞小腸消化酶活性的影響。雞腸道的消化吸收能力主要取決于腸道內(nèi)壁的面積，面積越大，吸收能力越強(qiáng)[14]。試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加不同水平的DMY 均可增加雞的腸道長(zhǎng)度，能在一定程度上增加腸道內(nèi)壁的面積，進(jìn)而提高消化、吸收能力，其中添加0.05%組與對(duì)照組間差異顯著。日糧添加DMY 均能提高雞的小腸蛋白酶活力，其中添加0.025%、0.05%組與對(duì)照組間差異顯著，說(shuō)明DMY 能刺激雞腸道消化腺分泌更多的蛋白酶，從而使雞更好地分解腸道內(nèi)的蛋白類營(yíng)養(yǎng)成分，進(jìn)而有助于雞對(duì)飼料蛋白的消化吸收，提高飼料利用率。而添加0.05%、0.1%組的小腸淀粉酶活力比對(duì)照組高，其中0.1%組與對(duì)照組間差異顯著。淀粉酶活力提高則可使禽類更好地消化吸收飼料中的淀粉類營(yíng)養(yǎng)成分，提高飼料利用率。

3）綜上所述，藤茶二氫楊梅素添加量以0.05%最為適宜，與對(duì)照組相比，能降低肺質(zhì)量及指數(shù)（P＞0.05），顯著降低肝臟質(zhì)量（P＜0.05），極顯著降低胃質(zhì)量及指數(shù)（P＜0.01），增加小腸淀粉酶活力（P＞0.05），顯著增加小腸長(zhǎng)度和蛋白酶活力（P＜0.05）。在貴州瑤山雞基礎(chǔ)日糧中添加0.05%的藤茶二氫楊梅素可降低內(nèi)臟器官質(zhì)量及指數(shù)，增強(qiáng)消化道的消化、吸收能力，從而提高飼料利用率，促進(jìn)雞的生長(zhǎng)。

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