李富蘭

（四川理工學(xué)院 材料與化學(xué)工程學(xué)院，四川 自貢，643000）

牛奶營(yíng)養(yǎng)豐富，易消化吸收，是人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢扇鄙俚氖称分?。所以牛奶品質(zhì)的檢驗(yàn)對(duì)于人們的生活具有極大的意義。牛乳中因含有豐富的蛋白質(zhì)，為微生物提供了良好的生長(zhǎng)環(huán)境，極易腐敗變質(zhì)。在牛乳中摻入硫氰酸鈉后可有效抑菌、保鮮及延長(zhǎng)牛乳的保存期。目前，我國(guó)衛(wèi)生部在食品安全方面的工作力度逐漸加大，2008年12月衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》中明確規(guī)定乳及乳制品中的硫氰酸鈉屬于違法添加物質(zhì)[1－2]。

硫氰酸鈉的毒性主要由其在人體內(nèi)釋放的氰根離子引起。氰根離子在體內(nèi)能很快與細(xì)胞色素氧化酶中的三價(jià)鐵離子結(jié)合，抑制該酶的活性使組織不能利用氧而導(dǎo)致人昏迷。另外有報(bào)道稱，由于硫氰酸鹽在人體內(nèi)代謝可形成硫氰酸，可干擾人的甲狀腺功能，導(dǎo)致非缺碘性甲狀腺腫，影響人體正常生理代謝[3]。

對(duì)于硫氰酸鹽測(cè)定方法的研究已有很多的報(bào)道[4－7]，如毛細(xì)管電泳法、高效液相色譜法、離子色譜法等。而分光光度法因其靈敏、精確、快速和簡(jiǎn)便的工作特點(diǎn)，使其在復(fù)雜組分系統(tǒng)中，不需要分離，就可以檢測(cè)出其中所含的極少量物質(zhì)，因此它應(yīng)用于實(shí)際生活中的各個(gè)領(lǐng)域。為快速、簡(jiǎn)便的測(cè)定牛奶中硫氰酸，保證牛奶的質(zhì)量，試驗(yàn)利用硫氰酸鈉與三價(jià)鐵反應(yīng)生成硫氰酸鐵絡(luò)合離子，使溶液呈血紅色來(lái)進(jìn)行測(cè)量，并對(duì)牛奶中可能存在的干擾元素進(jìn)行干擾測(cè)定，確定有無(wú)干擾；最后對(duì)樣品進(jìn)行分析以及回收率測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

牛奶樣品：市售牛奶。

紫外－可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司），AR1140型電子分析天平（梅特勒.托利多儀器上海有限公司），電熱鼓風(fēng)干燥箱DHG－9075A（上海和羽良電子科技有限公司），精密酸度計(jì)PHS－3VCA 型（上海大普儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋DK－98－1型（天津市泰斯特儀器有限公司），玻璃儀器 若 干、鹽 酸 硫 酸 鐵 銨 （NH4Fe（SO4）2·12H2O），雙氧水（H2O2），三氯乙酸（CCl3COOH），硝酸（HNO3），硫氰酸鈉三氯乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取10.000 0g三氯乙酸于干凈燒杯中，用蒸餾水溶解定容至1 000mL。

硫酸鐵銨溶液（100μg／mL）：準(zhǔn)確稱取硫酸鐵銨0.861 1g，用6mol／L 的鹽酸溶液溶解，再用蒸餾水定容至至1 000 mL。硫氰酸鈉儲(chǔ)備液（1 000μg／mL）：準(zhǔn)確稱取硫氰酸鈉1.418 0g，用蒸餾水溶解并定容至1 000mL

硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg／mL）：用移液管吸取10.00mL硫氰酸鈉儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL。所用化學(xué)試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2 最佳條件的選擇

1.2.1 測(cè)定波長(zhǎng) 準(zhǔn)確移取100μg／mL硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液0mL和1.0 mL 于25 mL 比色管中，加入1.0mL 硝酸和1.0 mL 硫酸鐵 銨標(biāo) 準(zhǔn)液，振蕩搖勻，用蒸餾水定容至25mL。以試劑空白作參比，用1cm 比色皿，在400～600nm 下掃描其吸收曲線，確定的硫氰酸鐵最大吸收波長(zhǎng)。

1.2.2 硝酸用量 準(zhǔn)確移取0.50mL硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80mL、1.00 mL、1.20 mL、1.40 mL、1.60 mL、1.80mL和2.00mL 的硝酸，加入1.0mL 硫酸鐵銨標(biāo)準(zhǔn)液，振蕩搖勻，用蒸餾水定容至25mL。以試劑空白作參比，用1cm 比色皿，最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，確定硝酸的最佳用量。

1.2.3 硫酸鐵銨用量 準(zhǔn)確移取0.50mL硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入1.0mL硝酸，分別加入硫酸鐵銨0.30mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、3.00 mL 和4.00 mL，振蕩搖勻，用蒸餾水定容至25mL。以試劑空白作參比，用1cm 比色皿，在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，確定顯色劑的最佳用量。

1.3 校正曲線和精密度試驗(yàn)

在7支25mL的容量瓶中分別加入100mg／L硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL和3.00mL，加入最佳硝酸用量和最佳顯色劑用量，振蕩搖勻，用蒸餾水定容至25mL。以試劑空白作參比，用1cm 比色皿，在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以硫氰酸鈉濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。稱取樣品7份，在最佳條件下進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可得試樣中的硫氰酸鈉含量。并計(jì)算相對(duì)偏差RSD。

1.4 牛奶中硫氰酸鹽的測(cè)定

吸取牛奶20.0mL 于100mL 錐形瓶中，加入約60.0mL三氯乙酸溶液，充分搖蕩使樣品分散完全。加入過(guò)氧化氫溶液1.0 mL，在60℃水浴放置5min，冷卻后轉(zhuǎn)入100 mL 容量瓶中，用三氯乙酸溶液定容到刻度，振蕩搖勻過(guò)濾，濾液待用。

準(zhǔn)確移取濾液10.0mL于兩支比色管中，加入1.0mL 硝酸，再加入1.0mL 硫酸鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液，振蕩搖勻，用蒸餾水定容至25mL，按試驗(yàn)方法測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線求出樣品濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 絡(luò)合物的吸收光譜曲線

由圖1可知，隨著檢測(cè)波長(zhǎng)的增大，絡(luò)合物的吸光度也隨之變大，在462nm 處有最大吸收，故選其為試驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

圖1 硫氰酸鐵絡(luò)合物在不同波長(zhǎng)的吸光度Fig.1 Absorbance of ferric thiocyanate complex at different wavelength

2.2 不同HNO3和顯色劑用量的吸光度

由圖2可知，HNO3加入量為1.0～1.5吸光度較高，在1.0mL左右的吸光度最大，故試驗(yàn)添加硝酸1.0 mL 為宜。由圖2 還可知，顯色劑用量在1.0～2.0mL的吸光度平穩(wěn)，當(dāng)硫酸鐵銨為1.5mL時(shí)，吸光度為0.163，繼續(xù)增加其用量，吸光度變化不大，綜合考慮選擇硫酸鐵銨用量為1.5mL。

圖2 HNO3和顯色劑不同用量的吸光度Fig.2 Absorbance of different amount of HNO3 and crystal violet

2.3 校正曲線和精密度

以硫氰酸鈉濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性回歸方程為A＝0.274 3x＋0.001 9，線性相關(guān)系數(shù)R＝0.999 8。稱取樣品7份，在最佳條件下進(jìn)行檢測(cè)，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＝2.38%＜5%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.4 樣品的測(cè)定

按試驗(yàn)最佳方法測(cè)定市售牛奶中的微量硫氰酸鈉，測(cè)得硫氰酸鈉的濃度為0.83μg／mL。

在最佳的操作條件下，采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定牛奶樣品中硫氰酸鈉含量，按試驗(yàn)方法操作，平行測(cè)定5 次。從表中可知，該方法的加標(biāo)回收率為99.0%～101.8%，表明該方法準(zhǔn)確度高，可滿足分析需要。

表 分光光度法測(cè)定牛奶中硫氰酸鈉的回收率Table Recovery rates of sodium thiocyanate in milk measured by spectrophotometric method

3 結(jié)論

試驗(yàn)研究了分光光度法測(cè)定硫氰酸鈉的方法，研究了測(cè)量波長(zhǎng)、酸度、顯色劑加入量等對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響。結(jié)果表明，在硝酸用量為1.0 mL（pH 為5.5）的介質(zhì)中，硫氰酸鈉與三價(jià)鐵反應(yīng)，生成紅棕色絡(luò)合物。該絡(luò)合物在462nm 具有最大吸光度，該分光光度法測(cè)定精度高且快速準(zhǔn)確。

[1]劉 園，鄒 潔.乳品中硫氰酸鹽的來(lái)源及其風(fēng)險(xiǎn)分析[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2013（4）：36－38

[2]謝一平，梁晨曦.淺談食品添加劑與人體健康[J].中國(guó)食品工業(yè)，2009（7）：52.

[3]顧 欣，黃士新，李丹妮，等.乳中硫氰酸鈉對(duì)人類健康的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].中國(guó)獸藥雜志，2010，44（9）：45－49.

[4]王丹慧，高 娃，李 梅.原料乳中硫氰酸鈉摻假定性檢測(cè)方法[J].中國(guó)乳品工業(yè)，2008，36（7）：57－58.

[5]何書美，陳曉燕.硫氰化物測(cè)定法進(jìn)展[J].河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1999，23（3）：388－391

[6]李衛(wèi)群，單勝艷，朱 慧.分光光度法測(cè)定乳與乳制品中硫氰酸鈉的含量[J].中國(guó)食品添加劑，2010（3）：103－104.

[7]吳劍平，顧 欣，李丹妮，等.毛細(xì)管電泳法檢測(cè)牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度[J].中國(guó)乳品工業(yè)，2012（3）：53－56.