趙鵬+施家威+李繼革+徐奮奮+龔文杰+裘立曉

摘 要 建立了基質固相分散技術-氣相色譜串聯(lián)質譜法（MSPD-GC-QQQ-MS/MS）同時測定孕婦血清中22種持久性有機污染物（艾氏劑、狄氏劑、七氯、滅蟻靈、六六六、多氯聯(lián)苯和滴滴涕）的方法。血清樣品與C18吸附劑混合凈化，正己烷溶液洗脫，GC-QQQ-MS/MS測定。采用Agilent J&W DB-35ms（30 m × 0.25 mm ×0.25 μm）分離，正電子離子源（EI+）模式電離，多反應監(jiān)測模式（MRM）下進行測定，外標法定量。結果表明，在1.0～1000.0 ng/mL的范圍內，22種持久性有機污染物的相關系數均大于0.99；在2.0和20.0 ng/mL的添加水平下，所有持久性有機污染物回收率均在75%～115%之間，方法定量限均≤0.15 ng/mL。在比較基質固相分散（MSPD）、液液萃取（LLE）和固相萃?。⊿PE）提取和凈化實際加標血清樣品時，MSPD方法的結果中位數更接近真實值，且離散程度最小。本方法適用于人類血清中多種持久性有機物的定性和定量分析。

關鍵詞 基質固相分散技術； 氣相色譜串聯(lián)質譜； 持久性有機污染物； 血清

1 引 言

持久性有機污染物（Persistent organic pollutants， POPs）是一類半揮發(fā)性有機物質，它之所以被廣泛關注是由于其具有高毒性、持久性、易于生物積累并可以長距離轉移 【1】。早在2005年斯德哥爾摩公約中明確規(guī)定了首批消除的12類持久性有機污染物（艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑、滴滴涕、七氯、氯丹、滅蟻靈、毒殺芬、六氯苯、多氯聯(lián)苯、二噁英和呋喃），由于持久性有機污染物可以通過食物鏈最終累積于人體，并對神經系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及生育系統(tǒng)造成損傷【2】。因此，對持久性有機污染物的監(jiān)測是一項長久且必要的工作。

目前，國際上監(jiān)測人體中持久性有機污染物普遍以血清總脂（Total serum lipid， ng/g lipids）為計量單位。這是因為持久性有機污染物具有親脂性，其含量與血清中的脂含量密切相關【3】。另外，有學者在分析人體血液中有機氯農藥殘留時，發(fā)現當使用體積基準（ng/mL）時，空腹與否對血清中有機氯農藥的水平是有影響的，因此使用血清總脂作為計量單位則使得結果更穩(wěn)定，且更具可比性【4】。

生物組織中持久性有機污染物的提取和凈化方法有很多，目前比較常見的有超聲破碎提取法【5】、微波輔助提取法（MAE）【6，7】、液液萃取法（LLE）【8，9】、固相萃取法（SPE）【10，11】等，其中基質固相分散提取法（MSPD）以其簡便、高效、安全、價格低廉的特點被廣泛用于持久性有機污染物的提取和凈化中【12～14】，它直接利用基質固相分散技術去除待測樣品中的潛在干擾物，所得洗脫液即可直接用于質譜分析。

本研究基于基質固相分散提取（MSPD）的原理，建立適合提取孕婦血清中22種持久性有機污染物的基質固相分散提取法，然后使用GC-QQQ-MS/MS對持久性有機污染物進行定性定量分析，從而為研究區(qū)域人群中持久性有機污染物的分布特點提供技術支持。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀（Palo Alto， CA），7000B三重四極桿串聯(lián)質譜儀（美國Agilent 公司）； 固相萃取裝置（美國Agilent 公司）； HGC-24氮吹儀（天津恒奧公司）； Milli-Q 純水發(fā)生器（美國Millipore 公司）； 高速離心機（上海安亭公司）。

C18吸附劑（50 μm， 美國Agilent公司）； 正己烷、甲醇和丙酮（色譜級，美國TEDIA公司）； ProElut Na2SO4 固相萃取柱（6 mL， 1000 mg， 美國DIKMA公司）； 多氯聯(lián)苯（PCB 28， PCB 30， PCB 52， PCB 73， PCB 101， PCB 118， PCB 138， PCB 153， PCB 155， PCB 180 和PCB 204）購于Dr.Ehrenstorfer公司，純度大于99%； 六六六（HCH-α， β， γ，ε）、艾氏劑（Aldrin）、狄氏劑（Dieldrin）、滅蟻靈（Mirex）、七氯（Heptachlor）、滴滴涕（p，p′-DDE ； p，p′-DDD； p， p′-DDT）均購于農業(yè)環(huán)境保護研究所（100 mg/L， 中國天津）。

2.2 標準溶液配制

準確稱取11 種多氯聯(lián)苯標準品各1.0 mg 于10 mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并定容，配成濃度為100 mg/L的標準儲備液，于

18 ℃密封保存。分別吸取22種持久性有機污染物各50 μL 于5.0 mL棕色容量瓶中，正己烷定容，配制成混和標準儲備溶液，于4 ℃密封保存，待用。

2.3 色譜條件和質譜條件

色譜： Agilent J&W DB-35ms 色譜柱（30 m × 0.25 mm ×0.25 μm），程序升溫： 初始溫度70 ℃，保持2 min，然后以20 ℃/min升溫至180 ℃，再以10 ℃/min升溫至280 ℃并保持5 min； 進樣口溫度：260 ℃，進樣口壓力：195.39 kPa （氦氣， 99.999%），恒壓模式，采用不分流模式，加標血清樣品色譜圖及某孕婦血清樣品圖譜見圖1。

稱取1.0 g C18吸附劑置于玻璃研缽中，加入0.5 mL甲醇碾磨、活化C18吸附劑。然后吸取0.5 mL 血清樣品于研缽中，用玻璃棒將血清與活化的C18吸附劑碾磨混合均勻，并將得到的勻質物填入空柱，使用6 mL 5%丙酮-水溶液清洗并抽干，之后將ProElut Na2SO4固相萃取柱與上述自制小柱連接，最后用4 mL正己烷將目標化合物洗脫，洗脫液在50 ℃條件下，氮氣吹干，使用200 μL正己烷溶解殘留物，待測。endprint

2.5 血清總脂的計算

血清總脂（TSL）一般可由甘油三酯（Tg）和膽固醇（TC）計算獲得 ＼表2 22種持久性有機污染物線性關系以及方法回收率和定量限

3.4 MSPD， LLE和SPE方法應用的比較

為了比較MSPD、LLE和SPE 3種方法在檢測血清中持久性有機污染物的應用， 分別采用本研究建立的基質固相分散（MSPD）-氣相色譜串聯(lián)質譜法、Yao等【17】建立的液-液萃取-氣相色譜串聯(lián)質譜法和Bergonzi等【10】建立的固相萃?。⊿PE）-氣相色譜串聯(lián)質譜法開展加標回收率實驗和精密度實驗。以實際血清樣本中所添加上述11種多氯聯(lián)苯為例，經計算加標∑PCBs（ng/mg lipid）的真實值為3.482 ng/mg lipid。通過比較3種方法計算所獲得的中位數，本方法所得數值與真實值最接近，且數據離散程度最小。圖3顯示3種方法測得加標樣品中∑PCBs（ng/mg lipid）均小于真實值，另外，加標回收和精密度的實驗結果顯示。

圖3 采用3種檢測方法計算所得∑PCBs（ng/mg lipid， n=5）的分布情況

Fig.3 Distribution of ∑PCBs mean concentrations （ng/mg lipid， n=5） with the three methods

每個箱圖中三角形代表各自的中位數，箱體上下兩端代表25%和75%百分位數，直線標注為真實值。

Each box shows the median as a triangle， the 25th and 75th percentiles as a box. The straight line marks the actual concentration.

本方法和Bergonzi等【10】采用的方法測得的22種持久性有機污染物回收率分別為76.1%～114.1%和74.3%～122.2%，精密度分別為4.3%～12.6%和5.1%～17.6%，Yao等【17】 采用的方法（液-液萃取-氣相色譜串聯(lián)質譜法）運用于加標血清檢測時部分多氯聯(lián)苯和六六六單體回收率幾乎為零。綜上所述，本方法與上述液液萃取和固相萃取相比，克服了冗長的耗時和大量試劑的耗費，并且通過破壞復雜生物樣本結構，增加生物樣本與吸附材料的接觸表面積，促使固相吸附材料與生物樣本產生相互作用力，從而實現目標化合物的高效提取和分離【13】。

3.5 實際樣品分析

對38份孕婦血清樣品進行分析，每份樣品平行測定3次，其中艾氏劑、狄氏劑、滅蟻靈和滴滴涕在此次檢測中均未檢出（見表3）。32份孕婦血清樣品中檢出有β-HCH或PCBs單體，其中β-HCH平均濃度為474 ng/g lipid，低于Masuda等【18】在日本調查的結果（564 ng/g lipid）； 而∑PCBs的平均濃度為118 ng/g lipid，低于Voorspoels等【19】在比利時的調查結果（237 ng/g lipid），但高于Tan等【2】在新加坡的調查結果（29 ng/g lipid）。

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