王書玉 竇佳 欒爽 董莉 董煜 錢小平

復(fù)方氨酚烷胺制劑中人工牛黃的薄層鑒別

王書玉 竇佳 欒爽 董莉 董煜 錢小平

目的探討復(fù)方氨酚烷胺制劑人工牛黃中的膽紅素薄層鑒別方法。方法將供試液點(diǎn)于硅膠 G 薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑展開, 晾干, 置日光下檢視。結(jié)果供試品色譜中, 在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上均顯示相同顏色的斑點(diǎn)。253批復(fù)方氨酚烷胺制劑中, 有1批在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上, 無黃色斑點(diǎn), 未檢出膽紅素；若采用原標(biāo)準(zhǔn)中人工牛黃鑒別方法對(duì)該批樣品進(jìn)行鑒別, 呈正反應(yīng)。結(jié)論薄層鑒別法鑒別復(fù)方氨酚烷胺制劑人工牛黃中的膽紅素重復(fù)性好、專屬性強(qiáng), 可作為復(fù)方氨酚烷胺制劑中人工牛黃的鑒別方法。

復(fù)方氨酚烷胺制劑; 膽紅素; 薄層鑒別

復(fù)方氨酚烷胺制劑包括復(fù)方氨酚烷胺片、復(fù)方氨酚烷胺膠囊、小兒復(fù)方氨酚烷胺片及復(fù)方氨酚烷胺顆粒, 其主成分種類(對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因、人工牛黃)、配比(125∶50∶1∶7.5∶5)均一致。其中對(duì)乙酰氨基酚能抑制前列腺素合成, 有解熱鎮(zhèn)痛的作用；金剛烷胺可抗“亞-甲型”流感病毒, 抑制病毒繁殖；咖啡因?yàn)橹袠信d奮藥, 能增強(qiáng)對(duì)乙酰氨基酚的解熱鎮(zhèn)痛效果, 并能減輕其他藥物所致的嗜睡、頭暈等中樞抑制作用；馬來酸氯苯那敏為抗過敏藥, 能減輕流涕、鼻塞、打噴嚏等癥狀；人工牛黃具有解熱、鎮(zhèn)驚作用。上述諸藥配伍制成復(fù)方, 可增強(qiáng)解熱、鎮(zhèn)痛效果, 解除或改善感冒所致之各種癥狀, 主要用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咽痛等癥狀, 也可用于流行性感冒的預(yù)防和治療。國(guó)內(nèi)共有132家藥廠生產(chǎn)該品種的各種制劑, 為國(guó)內(nèi)應(yīng)用范圍最廣的抗感冒藥之一。

為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量, 作者采用薄層鑒別法鑒別人工牛黃中的膽紅素, 該方法重復(fù)性好、專屬性強(qiáng), 簡(jiǎn)便高效,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 材料 儀器：薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)(visualizer, 瑞士CAMAG公司), BP211D 電子天平(Sartorius 公司)。試劑：所用試劑石油醚(30～60℃)、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸、甲苯、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸等(均購(gòu)自安徽安特生物化學(xué)股份有限公司)均為分析純。柱層析硅膠 G、國(guó)產(chǎn)硅膠G 預(yù)制板(均購(gòu)自青島海洋化學(xué)有限公司)及進(jìn)口硅膠G 預(yù)制板(購(gòu)自美國(guó)Merck 公司)。人工牛黃對(duì)照藥材(121197-200903)、膽紅素對(duì)照品(100077-200805)(均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院)；復(fù)方氨酚烷胺片樣品128 批, 復(fù)方氨酚烷胺膠囊樣品110 批, 小兒復(fù)方氨酚烷胺片樣品7批及復(fù)方氨酚烷胺顆粒樣品8批, 共計(jì)253批供試品。

1.2 供試品溶液的制備 分別取復(fù)方氨酚烷胺片10片、復(fù)方氨酚烷胺膠囊10粒、小兒復(fù)方氨酚烷胺片10片及復(fù)方氨酚烷胺顆粒10袋, 混勻, 研細(xì), 稱取細(xì)粉(相當(dāng)于人工牛黃30 mg), 加氯仿20 ml超聲提取, 過濾, 濾紙和濾渣用少量氯仿洗滌, 合并濾液和洗液, 室溫?fù)]干, 殘?jiān)寐确? ml攪拌使膽紅素溶解并迅速過濾, 濾紙和濾渣用1 ml氯仿洗滌仍迅速過濾, 合并濾液和洗液作為供試品溶液(避光, 臨用新制)。

1.3 對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液制備 取人工牛黃對(duì)照藥材10.12 mg, 加氯仿1 ml, 超聲處理 10 min, 靜置, 取上清液作為人工牛黃對(duì)照藥材溶液；另取膽紅素對(duì)照品21.33 mg, 加氯仿10 ml溶解, 作為膽紅素對(duì)照品溶液(避光, 臨用新制)。

1.4 空白輔料溶液的制備 選取處方中幾種最常用輔料：滑石粉、硫脲、淀粉、糊精、羧甲淀粉鈉、十二烷基磺酸鈉、吐溫-80、硬脂酸鎂、蔗糖、微晶纖維素、二氧化硅, 稱取適量(約相當(dāng)于3片量), 研細(xì), 按“1.2”項(xiàng)下的處理方法制備,作為空白輔料溶液。

1.5 陰性對(duì)照溶液的制備 依照處方配比, 稱取對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因配制成缺少人工牛黃的陰性樣品, 研細(xì), 按“1.2”項(xiàng)下的處理方法制備,作為陰性對(duì)照溶液。

1.6 試驗(yàn)方法 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010版二部附錄ⅤB)試驗(yàn), 吸取四種制劑的供試品溶液、空白輔料溶液、陰性對(duì)照溶液及人工牛黃對(duì)照藥材、對(duì)照品溶液各10 μl, 分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑, 展開, 取出, 晾干, 立即檢視。

2 結(jié)果

置日光下檢視, 供試品色譜中, 在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上, 顯相同的黃色斑點(diǎn)；空白輔料無干擾；陰性對(duì)照無干擾, 見圖1。4種制劑應(yīng)用本方法主斑點(diǎn)均獲得理想Rf值。253批復(fù)方氨酚烷胺制劑中, 有1批在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上, 無黃色斑點(diǎn), 未檢出膽紅素；若采用原標(biāo)準(zhǔn)中人工牛黃鑒別方法對(duì)該批樣品進(jìn)行鑒別,呈正反應(yīng)。

圖1 4種制劑TLC色譜圖(立即檢視)

3 討論

目前復(fù)方氨酚烷胺制劑中對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、馬來酸氯苯那敏、咖啡因質(zhì)量基本穩(wěn)定, 只是人工牛黃存在問題較大, 因?yàn)槿斯づ｜S價(jià)格昂貴, 且為動(dòng)物藥, 成分繁多,質(zhì)量控制復(fù)雜；而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中, 復(fù)方氨酚烷胺片［1］、復(fù)方氨酚烷胺膠囊［2］僅對(duì)人工牛黃中的膽酸進(jìn)行化學(xué)鑒別, 小兒復(fù)方氨酚烷胺片［3］、復(fù)方氨酚烷胺顆粒［4］僅對(duì)膽酸、豬去氧膽酸進(jìn)行薄層鑒別, 未對(duì)人工牛黃中價(jià)格較貴、治療效果明顯的膽紅素進(jìn)行控制, 給企業(yè)在生產(chǎn)中弄虛作假提供可乘之機(jī), 其手法十分巧妙, 用膽酸代替人工牛黃, 鑒別實(shí)驗(yàn)卻仍可成正反應(yīng), 采用現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)很難發(fā)現(xiàn)。以此不僅蒙騙消費(fèi)者, 尚且能逃過監(jiān)管機(jī)構(gòu)的監(jiān)督。因此, 制定檢驗(yàn)方法,修訂藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn), 對(duì)于確保人民群眾的用藥安全有效非常必要。

3.1 樣品前處理 復(fù)方氨酚烷胺制劑處方中對(duì)乙酰氨基酚占比最大, 人工牛黃占比較小, 前者是后者的25倍, 兼之其他幾種組分的干擾, 使直接點(diǎn)樣時(shí)展開斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重且膽紅素濃度太低斑點(diǎn)不清晰；膽紅素見光受熱均易氧化, 在酸液中亦容易降解, 不溶于水, 溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及堿液中, 微溶于乙醇、乙醚, 作者嘗試幾種不同前處理［5,6］方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理, 以期起到既使膽紅素穩(wěn)定又利于濃縮點(diǎn)樣的目的。最終采取靜置揮干氯仿進(jìn)行濃縮, 加少量氯仿溶解并過濾以除去干擾, 展開效果較好。同時(shí)整個(gè)操作過程注意避光。

3.2 展開劑的選擇 作者參考文獻(xiàn)［6-9］分別采用環(huán)己烷:乙酸乙酯∶甲醇∶冰醋酸(10∶3∶0.1∶0.1)、甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)、石油醚(30～60℃)-甲苯-冰醋酸(15∶5∶0.5)、石油醚(30～60℃)-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(20∶3∶5∶1)等展開系統(tǒng)展開。最終以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)為展開劑, Rf值適中, 斑點(diǎn)清晰無干擾, 重現(xiàn)性好。

3.3 薄層板的選擇 分別采用自制硅膠 G 薄層板、國(guó)產(chǎn)硅膠G 預(yù)制板及進(jìn)口硅膠G 預(yù)制板進(jìn)行展開實(shí)驗(yàn), 自制硅膠 G薄層板及國(guó)產(chǎn)硅膠G 預(yù)制板均有拖尾現(xiàn)象, 且在同一塊板上進(jìn)行多批檢樣時(shí)易出現(xiàn)“邊緣效應(yīng)”；進(jìn)口硅膠G 預(yù)制板斑點(diǎn)清晰無拖尾, 在同一塊板上進(jìn)行多批檢樣時(shí)無“邊緣效應(yīng)”, Rf值均勻, 穩(wěn)定性好, 能夠適應(yīng)大批量檢驗(yàn)工作需要。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).第16冊(cè).北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2002:278-279.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(二部).第5冊(cè). 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì), 1996:60-61.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).第13冊(cè).北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2002:128.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).第3冊(cè).北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2002:203-204.

［5］王文瓊, 劉穎, 高華宏, 等.牛黃解毒片等四種制劑中牛黃的薄層鑒別.湖北中醫(yī)雜志, 2004, 26(2):51.

［6］侯惠嬋, 汪杰, 顧利紅.猴棗牛黃散中牛黃的質(zhì)量控制研究.中藥新藥與臨床藥理, 2007, 18(2):123-126.

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010:6.

［8］朱天明, 姚英.薄層色譜法鑒別感冒通片中人工牛黃.江蘇藥學(xué)與臨床研究, 2002, 10(2):11-13.

［9］蘭婉玲, 張羅紅, 徐燕.牛黃解毒片中人工牛黃的薄層鑒別.中藥與臨床, 2010, 1(3):26.

Thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations

WANG Shu-yu, DOU Jia, LUAN Shuang, et al.Dalian City Institute for Drug Control, Dalian 116000, China

ObjectiveTo investigate the bilirubin thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.MethodsThe test liquid was dropped on a silica gel G thin layer plate with methylbenzene-ethyl acetate-glacial acetic acid (10∶1∶0.5) as the developing solvent.It was inspected under sunlight after dried in air.ResultsThe chromatogram of the test liquid contained the same color spots as the reference chromatogram.Among 253 batches of compound acetaminophen alkyl amine preparations, there was 1 batch without yellow spots and no bilirubin on corresponding location of reference substance and reference chromatogram.This sample could show positive reaction under chromatography by primary standard for identifying artificial bezoar.ConclusionThin-layer chromatography has good repeatability and high specificity for identifying bilirubin in artificial bezoar among compound acetaminophen alkyl amine preparations.It can be used as the identification method for artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.

Compound acetaminophen alkyl amine preparations; Bilirubin; Thin-layer chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.181

2014-10-30］

116000 大連市藥品檢驗(yàn)所