李雯霖　何愛群　卓曉等

[摘要] 目的 探討過敏性結(jié)膜炎患者TGF-β1和IL-17的表達(dá)水平。 方法 對我院治療的過敏性結(jié)膜炎患者和健康人群的TGF-β1和IL-17的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，探討在各型過敏性結(jié)膜炎患者中的表達(dá)強(qiáng)度。 結(jié)果 過敏性結(jié)膜炎患者TGF-β1和IL-17水平高于健康人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），過敏性結(jié)膜炎四個(gè)臨床亞型中TGF-β1和IL-17的表達(dá)水平不一，以春季角結(jié)膜炎表達(dá)水平最高，其次為常年性過敏性結(jié)膜炎和季節(jié)性過敏性結(jié)膜炎，特應(yīng)性角結(jié)膜炎表達(dá)水平最低，但四個(gè)臨床亞型組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 過敏性結(jié)膜炎患者TGF-β1和IL-17 表達(dá)水平高于正常健康人群。TGF-β1和IL-17在各型過敏性結(jié)膜炎患者中表達(dá)強(qiáng)度不同，在春季角結(jié)膜炎表達(dá)水平明顯高于其他類型。

[關(guān)鍵詞] TGF-β1；IL-17；過敏性結(jié)膜炎

[中圖分類號(hào)] R276.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）11-0069-03

[Abstract] Objective To investigate the expression level of transforming growth factor β1 （TGF-β1） and interleukin 17 （IL-17） in patients with allergic conjunctivitis. Methods TGF-β1 and IL-17 expression levels in allergic conjunctivitis patients hospitalized in the authors hospital and a healthy population were detected to explore the expression level in all types of patients with allergic conjunctivitis. Results TGF-β1 and IL-17 levels were significantly higher in patients with allergic conjunctivitis than in healthy population （P<0.01）. Among the four clinical subtypes of allergic conjunctivitis， vernal keratoconjunctivitis had the highest expression level of TGF-β1 and IL-17 in spring， followed by perennial allergic conjunctivitis and seasonal allergic conjunctivitis， and atopic keratoconjunctivitis had the lowest expression level. However， the differences among the four subtypes were not significant （P>0.05）. Conclusion Patients with allergic conjunctivitis have higher TGF-β1 and IL-17 expression levels than normal healthy people. TGF-β1 and IL-17 expression level vary in different subtypes of allergic conjunctivitis， vernal keratoconjunctivitis has higher expression level than other types in spring.

[Key words] TGF-β1； IL-17； Allergic conjunctivitis

變應(yīng)性結(jié)膜炎是眼科門診患者中常見的引起眼部不適的疾病，且反復(fù)發(fā)作，給患者帶來極大的痛苦。因此，對此病的防治已引起眼科同仁的高度重視，但目前其發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，為從根本上治愈變應(yīng)性結(jié)膜炎， 揭示其發(fā)生機(jī)制已成為目前眼科醫(yī)師需要迫切解決的問題。轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）在炎癥和組織修復(fù)等方面都具有重要的調(diào)節(jié)作用。IL-17（Interleukin-17）可以通過促進(jìn)釋放促炎細(xì)胞因子來放大炎癥反應(yīng)，從而誘導(dǎo)自身免疫性疾病及引起慢性變應(yīng)性疾病的發(fā)生。本課題擬研究變應(yīng)性結(jié)膜炎患者血清中TGF-β1和IL-17的水平，從而初步探討TGF-β1和IL-17在其發(fā)病過程中的作用，有望為變應(yīng)性結(jié)膜炎的防治開辟新的途徑。

1 對象與方法

1.1研究對象

實(shí)驗(yàn)組200例，均為2013年6月～2014年6 月我院眼科門診收集的變應(yīng)性結(jié)膜炎患者，年齡11～46 歲，其中男78例，女122例。其中季節(jié)性變應(yīng)性結(jié)膜炎、常年性變應(yīng)性結(jié)膜炎、春季角結(jié)膜炎、特應(yīng)性角結(jié)膜炎均為50例，分別設(shè)為實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4，另選健康人群50例為對照組，年齡15～42歲，男21例，女29例。實(shí)驗(yàn)組臨床癥狀和體征符合各臨床亞型的診斷標(biāo)準(zhǔn)。具有眼部奇癢、畏光、流淚、眼瞼水腫、瞼結(jié)膜乳頭與濾泡增生、球結(jié)膜充血水腫等臨床表現(xiàn)，并有明確的過敏原接觸史，或過敏原雖不明確，但在某一特定的環(huán)境下容易發(fā)病，常伴有哮喘、鼻炎和濕疹等病史。健康對照組均為社會(huì)健康志愿者，眼部均無上述癥狀，檢查眼病無異常，無變應(yīng)性疾病家族史。因巨乳頭性結(jié)膜炎多有配戴軟性角膜接觸鏡史，臨床上少見，未納入研究對象。所有入組的研究對象近1個(gè)月內(nèi)無藥物應(yīng)用史，全身各系統(tǒng)體檢無異常。實(shí)驗(yàn)組與對照組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本文涉及的所有實(shí)驗(yàn)都經(jīng)過患者或家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑

TGF-β1和 IL-17均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測。ELISA 檢測試劑盒購置于晶美生物公司。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。細(xì)胞因子單位為pg/mL。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)組和對照組均常規(guī)采集外周靜脈血8 mL，其中2 mL用于分離血清，-80℃凍存?zhèn)溆谩? mL用肝素抗凝，用于分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。

1.3.2 TGF-β1和 IL-17檢測方法 使用細(xì)胞裂解儀裂解實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞后，將裂解液低溫高速離心，分裝上清液，-20℃保存。ELISA法檢測血中TGF-β1和IL-17含量。具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，具體步驟如下：①包被：每個(gè)反應(yīng)孔中加0.1 mL用包被緩沖液稀釋的抗體（該抗體的蛋白質(zhì)含量為1～10 μg/mL），4℃過夜，次日用洗滌緩沖液洗滌3遍，每遍3 min。②加樣：在上述已包被的反應(yīng)孔中加一定稀釋的上清液0.1 mL置37℃孵育1 h，然后洗滌，同時(shí)做對照組。③加酶標(biāo)抗體：將稀釋的酶標(biāo)抗體0.1 mL加入各反應(yīng)孔中，37℃孵育1 h，然后洗滌。④加底物液顯色：將臨時(shí)配置的TMB底物溶液0.1 mL加入各反應(yīng)孔中，37℃孵育30 min。⑤終止反應(yīng)：將2M硫酸0.05 mL加入各反應(yīng)孔中終止反應(yīng)。⑥檢測結(jié)果：在ELISA檢測儀上波長450 nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值2.1倍，即為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件建立數(shù)據(jù)庫進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，行t檢驗(yàn)和方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

血中TGF-β1和IL-17的表達(dá)：與對照組比較，各實(shí)驗(yàn)組患者血中TGF-β1和IL-17的表達(dá)均明顯高于對照組，差異具有顯著性（P<0.01）。四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中TGF-β1和IL-17的表達(dá)水平不一，以實(shí)驗(yàn)組3表達(dá)水平最高，其次為實(shí)驗(yàn)組2 和實(shí)驗(yàn)組1，實(shí)驗(yàn)組4表達(dá)水平最低，但四個(gè)臨床亞型組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

變應(yīng)性結(jié)膜炎是一類常見的眼表過敏性疾病，其發(fā)病率高達(dá)20%[1]。該病最主要的癥狀是眼癢，常有結(jié)膜充血、水腫、乳頭和濾泡等體征。臨床多見季節(jié)性變應(yīng)性結(jié)膜炎、春季角結(jié)膜炎、特應(yīng)性結(jié)膜炎和常年性變應(yīng)性結(jié)膜炎，而巨乳頭狀結(jié)膜炎因常與戴角膜接觸鏡史有關(guān)，在臨床較為罕見。

TGF-β家族包括TGF-β的3個(gè)亞型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3），其中TGF-β1是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生長、分化和細(xì)胞周圍基質(zhì)環(huán)境的多功能細(xì)胞因子，存在于氣道上皮、黏膜下層和平滑肌層。TGF-β1 可誘導(dǎo)大量炎性細(xì)胞趨化，還可延長某些免疫炎性細(xì)胞，如T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的存活期，同時(shí)在某些情況下TGF-β可誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的增殖。TGF-β對調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的形成起著關(guān)鍵作用，TGF-β的持續(xù)產(chǎn)生可致細(xì)胞外基質(zhì)的無序沉積，從而導(dǎo)致組織重塑。研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1 在氣道重塑中起重要作用，是氣道重塑中的重要細(xì)胞因子[2，3]，可促進(jìn)其發(fā)生及發(fā)展，從而參與哮喘的發(fā)生，其可能的發(fā)病機(jī)制是在氣道損傷的修復(fù)過程，如果抗原反復(fù)刺激氣道引起持續(xù)的慢性炎癥，可導(dǎo)致TGF-β1持續(xù)過度產(chǎn)生，引起組織纖維化、氣道重建及氣道慢性阻塞[4，5]。另有研究表明，過敏性鼻炎患者鼻黏膜上皮細(xì)胞TGF-β1的免疫活性明顯升高，提示TGF-β1在過敏性鼻炎的發(fā)生發(fā)展過程可能起著重要作用[6，7]。

IL-17是Th17 細(xì)胞的主要效應(yīng)因子[8，9]。目前越來越多的研究證實(shí)IL-17與過敏性哮喘、過敏性鼻炎及特應(yīng)性皮炎等變應(yīng)性疾病的免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在急性氣道炎癥中，IL-17 可以誘導(dǎo)氣道內(nèi)平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生IL-8和嗜酸細(xì)胞活化趨化因子-1（eotaxin-1），這些趨化因子的大量分泌促使中性粒細(xì)胞廣泛浸潤。中性粒細(xì)胞在哮喘發(fā)病中扮演了重要的角色[10，11]，IL-17能夠分別活化NF-κB、p38促分裂原活化蛋白激酶和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶等信號(hào)激酶，誘導(dǎo)大量的化學(xué)介質(zhì)和炎癥趨化因子產(chǎn)生，調(diào)節(jié)嗜酸粒細(xì)胞的功能，放大炎癥反應(yīng)[12]。在過敏性鼻炎組中Th17 細(xì)胞有明顯的表達(dá)，IL-17 水平也明顯增高。Ciprandi等[13]發(fā)現(xiàn)，在持續(xù)性花粉過敏鼻炎中，血清IL-17 表達(dá)水平與鼻炎嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。Larsen等[14]研究證實(shí)，IL-17/Th17參與了特應(yīng)性皮炎發(fā)病的免疫病理過程，包括接觸過敏原時(shí)天然免疫及適應(yīng)性免疫反應(yīng)?？傊壳霸絹碓蕉嗟难芯孔C實(shí)IL-17與過敏性哮喘、過敏性鼻炎及特應(yīng)性皮炎等變應(yīng)性疾病的免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，各型變應(yīng)性結(jié)膜炎患者血中TGF-β1和IL-17的表達(dá)明顯高于對照組，差異具有顯著性（P<0.01）。因此我們推測TGF-β1和IL-17參與了變應(yīng)性結(jié)膜炎的發(fā)生發(fā)展過程，但其作用機(jī)制有待我們進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2014-12-16）