黃海琴，張廣輝，張曉麗

(1.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 張家口 宣化 075000；2.天津市公安局河西分局物證鑒定所，天津 300060；3.河北北方學(xué)院生命科學(xué)研究中心，河北 張家口 075000)

TNFAIP8和TNFAIP2在乳腺腫瘤中的表達及臨床意義

黃海琴1，張廣輝2，張曉麗3

(1.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 張家口 宣化 075000；2.天津市公安局河西分局物證鑒定所，天津 300060；3.河北北方學(xué)院生命科學(xué)研究中心，河北 張家口 075000)

目的 探討乳腺腫瘤組織中腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(TNFAIP-8)和腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2(TNFAIP-2)的表達及臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測46例乳腺癌及36例乳腺腺瘤組織中TNFAIP8、TNFAIP2表達，分析其與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 乳腺腺瘤組織中TNFAIP8、TNFAIP2的表達與乳腺癌中的表達比較差異有顯著性(P<0.05)；TNFAIP8、TNFAIP2表達水平與年齡、患病部位無相關(guān)性(P>0.05)；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 TNFAIP8家族在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用，TNFAIP8、TNFAIP2有可能成為乳腺癌治療的新靶點。

乳腺腫瘤；腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8；腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2；免疫組織化學(xué)；轉(zhuǎn)移

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(tumor necrosis factor-α-induced protein-8，TNFAIP-8)在細胞凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤細胞增生、侵襲及轉(zhuǎn)移等過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。TNFAIP8家族成員腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2(tumor necrosis factor-α-induced protein-2，TNFAIP-2)是一個新發(fā)現(xiàn)的蛋白分子，通過對T細胞受體和Toll樣受體信號途徑進行負向調(diào)控，進而調(diào)節(jié)機體固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程。TNFAIP-8的多效應(yīng)性及TNFAIP2在維持機體免疫動態(tài)平衡中的調(diào)控作用預(yù)示著TNFAIP8家族在免疫學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究中極具應(yīng)用價值，國內(nèi)外學(xué)者研究TNFAIP-8、TNFAIP-2大多局限于自身免疫性疾病，如：系統(tǒng)性紅斑狼瘡、乙型肝炎及動脈粥樣硬化等[1-2]。我們采用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究TNFAIP-8、TNFAIP-2在乳腺癌及乳腺腺瘤中的表達及其與臨床病理特征的相關(guān)性，探討TNFAIP-2、TNFAIP-8在乳腺疾病發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，以期為免疫治療及靶向治療尋求新的思路。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2013-06—2014-08月手術(shù)切除女性乳腺腫瘤標(biāo)本82例，病理診斷明確，術(shù)前均未做放化療。年齡18～75歲，中位年齡46歲；病理分型：乳腺腺瘤36例，乳腺癌46例。乳腺癌46例中浸潤性導(dǎo)管癌30例，浸潤性小葉癌10例，非浸潤性癌6例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。

1.2 標(biāo)本處理

取大小10 mm×10 mm×4 mm的組織，固定于10%中性甲醛內(nèi)(24 h)，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度5 μm，裱片后37 ℃保存，待染。

1.3 免疫組化染色

應(yīng)用免疫組化SP法(SP試劑盒購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司)進行染色，染色程序嚴格按照試劑盒要求進行，陰性對照用PBS代替Ⅰ抗。切片脫蠟至水，高溫?zé)嵝迯?fù)，3%過氧化氫室溫10 min，PBS沖洗3次，山羊血清孵育10 min，加入Ⅰ抗4 ℃過夜，滴加Ⅱ抗37 ℃水浴孵育30 min，PBS漂洗3次，滴加Ⅲ抗37 ℃水浴孵育30 min，PBS漂洗3次，最后DAB染色，封片。

1.4 免疫組化結(jié)果判定

TNFAIP-2和TNFAIP-8陽性物質(zhì)呈棕黃色主要集中在細胞質(zhì)中，經(jīng)光鏡高倍視野(×400)觀察，凡陽性細胞數(shù)≥10%者為陽性病例，陽性細胞<10%者為陰性病例。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺腫瘤組織中TNFAIP-8、TNFAIP-2的表達

TNFAIP-8、TNFAIP-2在乳腺癌組織中陽性表達率均高于乳腺腺瘤組織中陽性表達率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 乳腺腫瘤組織中TNFAIP-8、TNFAIP-2表達比較 n(%)

2.2 TNFAIP8、TNFAIP2表達與乳腺癌生物學(xué)特征的關(guān)系

TNFAIP8、TNFAIP2在浸潤性乳腺癌內(nèi)陽性表達率均明顯高于非浸潤性乳腺癌(P<0.05)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；但與患者年齡、癌變部位無明顯相關(guān)性(P>0.05)(表2)。

表2 TNFAIP-8、TNFAIP-2陽性表達與乳腺癌生物學(xué)特性的關(guān)系 n(%)

注：與浸潤性癌比較*P<0.05(χ2=6.25,χ2=12.96)；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較#P<0.05(χ2=4.36,χ2=10.59)

3 討 論

TNFAIP-2是腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白(tumor necrosis factor-α-induced protein，TNFAIP)家族成員之一，主要參與血管生成、細胞分化等[3]。近幾年研究發(fā)現(xiàn)TNFAIP-2在多種腫瘤組織中均有表達，有學(xué)者[4]利用免疫組織化學(xué)方法研究TNFAIP-2在鼻咽癌及癌旁正常組織中的表達，發(fā)現(xiàn)TNFAIP-2在腫瘤細胞中高表達，采用多變量分析進一步表明，TNFAIP-2是鼻咽癌預(yù)后的獨立因素。也有學(xué)者[5]研究表明MIR-184可以調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤中TNFAIP-2的表達，能抑制膠質(zhì)瘤進展，所以MIR-184可作為膠質(zhì)瘤治療的新靶點。本研究中發(fā)現(xiàn)TNFAIP-2在乳腺癌中呈高表達，其陽性表達率高于乳腺腺瘤，尤其在浸潤性乳腺癌中的陽性表達率高于非浸潤性癌，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，說明TNFAIP-2過度表達的腫瘤細胞分化差，有更強的分裂增殖能力，易于發(fā)生轉(zhuǎn)移，這與TNFAIP-2在其他腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用類似。

TNFAIP-8具有重要的生物學(xué)作用，對細胞凋亡具有負性調(diào)節(jié)作用，主要通過TNF-α信號通路發(fā)揮作用[6]。研究表明TNFAIP-8與腫瘤細胞關(guān)系密切，聞強等[7]通過免疫組織化學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)TNFAIP-8在正常胃黏膜組織無表達，在胃癌組織陽性表達率為26%，表明TNFAIP-8在胃癌發(fā)生、發(fā)展、分化中均起重要作用，TNFAIP-8可能參與胃癌發(fā)生、侵襲、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。Yang M等[8]運用免疫組織化學(xué)和蛋白印跡方法分析了TNFAIP-8在胃腺癌中的表達情況，TNFAIP8過度表達，與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Lauren分型顯著相關(guān)，TNFAIP8的表達是腸型胃腺癌獨立預(yù)后的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)良惡性腫瘤中TNFAIP-8表達情況與以上研究結(jié)論較一致,在乳腺癌組織中的表達遠高于乳腺腺瘤，表明TNFAIP-8在乳腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用。TNFAIP-8的表達在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示TNFAIP-8與乳腺癌預(yù)后有關(guān)。

綜上，TNFAIP-8、TNFAIP-2在乳腺癌組織中異常表達，在乳腺癌發(fā)生和演化中起著重要作用，并與乳腺癌組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示TNFAIP-8、TNFAIP-2可成為評估乳腺癌預(yù)后的一個重要指標(biāo)及腫瘤治療的新靶點，具體分子機制有待進一步研究闡明。

[1]Xi W,Hu Y,Liu Y,et al.Roles of TNFAIP-2 in hepatitis B virus-induced hepatic inflammation in humans and mice[J].Mol Immunol,2011,48(9-10):1203-1208.

[2]Gus-Brautbar Y,Johnson D,Zhang L,et al.The anti-inflammatory TNFAIP-2 is an inhibitor of the oncogenic Ras[J].Mol Cell，2012,45(5):610-618.

[3]李濤，李敏，姬新穎，等.腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白家族與疾病的關(guān)系[J].細胞與分子免疫學(xué)雜志，2014，30(4)：433-436.

[4]Chen L C，Chen C C，Liang Y，et al．A novel role for TNFAIP-2:Its correlation with invasion and metastasis in nasopharyngeal carcinoma[J]．Mod Pathol，2011，24(2):175-184.

[5]Cheng Z,Wang H Z,Li X.MicroRNA-184 inhibits cell proliferation and invasion,and specifically targets TNFAIP-2 in glioma[J].J Exp Clin Cancer Res，2015,26;34:27.

[6]蔣麗娜，姚詠明.腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8家族的研究進展[J].中華損傷與修復(fù)雜志：電子版，2011，6(2)：268-278.

[7]聞強，廖洪鋒，袁思波，等.TNFAIP-8在胃癌組織中表達的研究和臨床意義[J].免疫學(xué)雜志，2012，28(2)：181-184.

[8]Yang M,Zhao Q,Wang X,et al.TNFAIP-8 overexpression is associated with lymph node metastasis and poor prognosis in intestinal-type gastric adenocarcinoma[J].Histopathology，2014,65(4):517-526.

[責(zé)任編輯：李薊龍]

河北省科技廳項目(No.13277750D)

黃海琴(1982-)，女，河北蔚縣人，主管護師。

張曉麗(1972-)，女，醫(yī)學(xué)碩士，副教授，主要從事腫瘤細胞生物學(xué)方面研究。

R 735.2

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2015.04.017

來稿日期：2015-06-12