李 琴 胡春勇 陳剛勝 李孝壁 馬平平

江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222069

HPLC-CAD法測定棕櫚酸中的有關(guān)物質(zhì)

李 琴 胡春勇 陳剛勝 李孝壁 馬平平

江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222069

目的建立了一種高效液相色譜電霧檢測器法（HPLC-CAD）測定棕櫚酸中有關(guān)物質(zhì)的方法。方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）；進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8mL/min，柱溫為35℃，電霧檢測器（CAD），霧化器溫度15℃，氣體壓力35.0psi。結(jié)果在0.44～22.0μg/mL范圍線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r＞0.990（n=6），重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%（n=6），回收率為95.1%～98.3%，RSD為1.7%～3.1%（n=9）。結(jié)論本方法測定簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于測定棕櫚酸中的有關(guān)物質(zhì)。

高效液相色譜；電霧檢測器；棕櫚酸 ；有關(guān)物質(zhì)

棕櫚酸（palmitic acid），又稱軟脂酸、十六（烷）酸，是一種飽和高級(jí)脂肪酸，以甘油脂的形式普遍存在于動(dòng)植物油脂中，在自然界中分布廣泛。目前隨著藥物的不斷發(fā)展，棕櫚酸被大量用到藥品生產(chǎn)上，用來和其他活性藥物結(jié)合并制成制劑，比如棕櫚酸帕利哌酮長效注射劑、維生素A棕櫚酸酯眼用凝膠、鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片等，因此對(duì)棕櫚酸的質(zhì)量控制[1-2]是否有效直接關(guān)系到人們的用藥是否安全、可靠。

由于棕櫚酸沒有紫外吸收，不能通過常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測法進(jìn)行檢測，同時(shí)由于制備的特殊性，棕櫚酸中無法避免的會(huì)有少量的十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸等長鏈烷酸，棕櫚酸的有關(guān)物質(zhì)檢測一直是藥物分析領(lǐng)域的一個(gè)難點(diǎn)。傳統(tǒng)方法采用衍生化法，利用氣相FID進(jìn)行檢查[3-4]，操作比較麻煩、而且準(zhǔn)確度差，對(duì)棕櫚酸的同系物檢測有很大的缺陷。

電霧式檢測器（CAD）又稱荷電氣溶膠檢測器，它基于獨(dú)特的新型設(shè)計(jì)原理[5-6]，HPLC洗脫液經(jīng)霧化器中氮?dú)獾淖饔枚F化，其中分析物液滴在室溫下干燥形成溶質(zhì)顆粒。同時(shí)用于載氣的氮?dú)饨?jīng)過電暈式裝置（含高壓鉑金絲電極）形成帶正電荷的氮?dú)忸w粒，與溶質(zhì)顆粒反向相遇時(shí)經(jīng)碰撞使溶質(zhì)顆粒帶上正電，最后用一個(gè)高靈敏度的靜電檢測器測出帶電溶質(zhì)的信號(hào)電流，由此產(chǎn)生的信號(hào)電流與溶質(zhì)分析物質(zhì)的含量呈正比。該檢測器解決了其他檢測器設(shè)計(jì)原理的一些局限性[7-10]，他的檢測技術(shù)完全不依賴化合物的分子結(jié)構(gòu)，達(dá)到了通用目的，能對(duì)大多數(shù)化合物提供一致響應(yīng)性，同時(shí)能達(dá)到較高的靈敏度和最低檢出限，很容易檢測到納克數(shù)量級(jí)的化合物，并且與液相色譜分離手段聯(lián)用，其重現(xiàn)性、穩(wěn)定性很好，對(duì)于大部分非揮發(fā)性或半揮發(fā)性有機(jī)物能做到準(zhǔn)確的定量分析或半定量分析。因此選擇該檢測器和液相聯(lián)用來檢測棕櫚酸中可能含有的長鏈烷酸等有關(guān)物質(zhì)[11-12]。

1 儀器與試劑

儀器：電子分析天平，梅特勒XS205；美國Thermo Ultimate 3000高效液相色譜儀（DGP-3600泵，WPS-3000TSL自動(dòng)進(jìn)樣器，TCC-3000SD柱溫箱），Corona Ultra CAD電霧檢測器；CHROMELEON 6.8色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國Thermo公司生產(chǎn)；色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）。

試劑：醋酸為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：10000218）；純化水，由江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；乙腈（批號(hào)：I735830418）為色譜純，由德國merk公司生產(chǎn)；四氫呋喃（批號(hào)：10071761）為色譜純，美國Burdick&Jackson公司生產(chǎn)。

2 試驗(yàn)過程與結(jié)果

2.1 色譜條件

照高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱Phenomenex Gemini C18（150mm×4.6mm，3.5μm）；以40mmol/L醋酸溶液為流動(dòng)相A，乙腈-四氫呋喃（95:5）為流動(dòng)相B；進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8mL/min；CAD電霧檢測器條件：霧化器溫度15℃，氣體（氮?dú)猓毫?5.0psi，數(shù)據(jù)采集速率5Hz；進(jìn)樣量為20μL；色譜柱柱溫35℃。

表1 流動(dòng)相梯度程序

2.2 專屬性試驗(yàn)

將十四烷酸、十五烷酸、棕櫚酸（十六烷酸）、十七烷酸、十八烷酸等，用乙腈溶解并定量稀釋制成每1mL約含0.1mg的混合溶液，進(jìn)入液相色譜儀，各物質(zhì)的分離情況見表2，專屬性圖見圖1。從表和圖中可以看出各雜質(zhì)與棕櫚酸分離良好，說明該方法的專屬性良好。

2.3 定量限與檢測限

在上述色譜條件下，分別精密稱取十四烷酸、十五烷酸、棕櫚酸（十六烷酸）、十七烷酸、十八烷酸少許，置量瓶中，用乙腈溶解，制成儲(chǔ)備液。逐步稀釋儲(chǔ)備液，分別進(jìn)樣至信噪比（峰高／基線噪聲3±1為檢測限，至信噪比10±2為定量限，試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表2 方法專屬性

圖1 方法專屬性色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

按照標(biāo)準(zhǔn)限度濃度配制線性關(guān)系試驗(yàn)溶液，十四烷酸在0.19～9.5μg/mL、十五烷酸在0.17～8.5μg/mL、棕櫚酸在0.44～22.0μg/mL十七烷酸在0.22～11.0μg/mL、十八烷酸在0.20～10.0μg/mL范圍內(nèi)測定結(jié)果線性相關(guān)系數(shù)皆大于0.990，說明本方法線性良好，線性方程及相關(guān)系數(shù)見表4。

表4 回歸方程及相關(guān)系數(shù)

表5 重復(fù)性

2.5 重復(fù)性

精密稱取十四烷酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、十八烷酸適量，用乙腈溶解并定量稀釋制成每1mL約含十四烷酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、十八烷酸各1μg的溶液，作為供試品溶液。按上述色譜條件，連續(xù)六針進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表5。

由表可見，各組分峰面積的RSD＜2.0%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.6 回收率測定

精密稱取十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸各約25mg，置50mL量瓶中，用乙腈溶解稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置100mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)儲(chǔ)備溶液（25μg/mL）。以各烷酸的含量限度（0.1%）的濃度為基準(zhǔn)100%，分別精密量取上述儲(chǔ)備溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、置25mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，分別配制成限度為50%、100%和150%的溶液各三份，作為供試品溶液。另精密稱取十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸適量，用乙腈溶解并定量稀釋制成每1mL各約含1μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密量取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測量峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算回收率，十四烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十八烷酸的平均回收率分別為95.1%、98.3%，96.9%，97.4%，RSD分別為2.3%、1.7%、2.7%、3.1%（n=9），表明該方法檢測棕櫚酸中可能含有的其他同系物含量準(zhǔn)確、可靠。

3 討論

棕櫚酸傳統(tǒng)方法采用衍生化法，利用氣相FID進(jìn)行檢查，操作比較麻煩、而且準(zhǔn)確度差，靈明度底，尤其對(duì)棕櫚酸的同系物檢測有很大的缺陷，本文所建立的方法解決了棕櫚酸中同系物雜質(zhì)測定的難點(diǎn)，由于CAD電霧檢測器不檢測原理不依賴于化合物的分子結(jié)構(gòu)，并且能檢測分析大范圍化學(xué)結(jié)構(gòu)和種類，可以實(shí)際應(yīng)用于絕大多數(shù)非揮發(fā)性或半揮發(fā)性化合物。

本文利用新型CAD電霧檢測器，建立了棕櫚酸有關(guān)物質(zhì)的測定方法，并通過對(duì)的十四烷酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、十八烷酸等棕櫚酸同系物的專屬性考察，充分說明了該方法有良好的專屬性和靈敏度，且系統(tǒng)比較穩(wěn)定，操作方便、簡單。

通過檢測限、定量限，線性范圍、重復(fù)性、回收率等項(xiàng)目的方法驗(yàn)證，說明該新型CAD電霧檢測器的靈敏度高，對(duì)棕櫚酸有關(guān)物質(zhì)的測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠；對(duì)于沒有紫外吸收或紫外吸收比較弱的化合物，新型CAD電霧檢測器無疑是比較好的選擇，它對(duì)該類化合物的檢測較紫外檢測器和ELSD有很明顯的優(yōu)勢。

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Determination of related substances in Palmitic acid by HPLCCAD

LI Qin HU Chunyong CHEN Gangsheng LI Xiaobi MA Pingping

Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Co.Ltd.,Lianyungang 222069,China

ObjectiveTo establish a method for the determination of related substances in Palmitic acid by HPLCCAD.MethodsThe determination was carried out on a Phenomenex Gemini C18(150mm×4.6mm,3.5μm)column with gradient elution.The flow rate was 0.8mL/min,the column temperature was 35℃,and the temperature of atomize with Charged Aersosol detection(CAD)was 15℃,gas was 35.0 psi(house nitrogen).ResultsThere was a good linearity over the range of 0.44-22.0μg/mL with the correlation coefficientr＞0.990(n=6).The RSD for repeatition was less than 2.0%(n=6),The average recovery was 95.1%-98.3% with RSD of accuracy at 1.7%-3.1%(n=9).ConclusionThe accurate and reliable method was applicable for the control of related substances in Palmitic acid.

HPLC;Charged aersosol detection;Palmitic acid;Related substances

R284

B

2095-0616（2015）05-45-04

2014-12-10）