張 莒 ，何 楊 ，徐遠航 ，馮亞坤 ，彭 西 *，袁施彬

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，四川 溫江 611130；2.西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川 南充 637000）

紅嘴相思鳥別名紅嘴玉、相思鳥、紅嘴綠觀音,是馳名中外的觀賞鳥類，是一種以昆蟲為主食的雜食性鳥類[1]。紅嘴相思鳥飼養(yǎng)困難，不易存活，且近年來隨著野外捕捉量過大而致數(shù)量驟減，《瀕危野生動植物種國際公約》（CITES）于2007年將其列為國家II級保護動物。

本試驗對幼齡紅嘴相思鳥的小腸各段進行了顯微觀察，旨在填補紅嘴相思鳥小腸形態(tài)學(xué)研究的空白，為紅嘴相思鳥的種群保護提供基礎(chǔ)研究資料。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 1、5、9日齡育雛期紅嘴相思鳥幼鳥以及成年紅嘴相思鳥各3只，均來源于西華師范大學(xué)紅嘴相思鳥人工馴繁實驗室。

1.1.2 試劑 HE染色的主要試劑：苦味酸、蘇木素、伊紅、甲醛、95%酒精、無水乙醇、二甲苯、石蠟、冰醋酸、明礬、氧化汞、中性樹膠。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 切片機、一次性刀片、顯微照相系統(tǒng)、光學(xué)顯微鏡、恒溫干燥箱、電子天平、電熱恒溫水溫箱。

1.2 實驗方法

1.2.1 HE染色 分別取1、5、9日齡紅嘴相思鳥幼鳥以及成年紅嘴相思鳥的十二指腸、空腸和回腸于4%多聚甲醛溶液中固定24h以上，脫水包埋；采用連續(xù)切片（切片厚度5μm）進行改良HE法[2]染色，中性樹膠封片，然后于光學(xué)顯微鏡下觀察十二指腸、空腸和回腸的常規(guī)組織學(xué)結(jié)構(gòu)。

1.2.2 測定指標(biāo) 采用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察，Nickon 3CCD顯微數(shù)碼照相系統(tǒng)采集圖像，并用Image Pro Plus 5.0圖像分析軟件測量小腸各段的絨毛高度、隱窩深度和肌層厚度。每只鳥每個組織取5張切片，每張切片隨機取5個視野在4×10倍視野下測量。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)均用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以平均數(shù)（）±標(biāo)準差（SD）表示[3]；用單因素方差分析法比較不同日齡間的差異顯著性。

2 結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

2.1 常規(guī)形態(tài) 紅嘴相思鳥的小腸分為十二指腸、空腸、回腸，小腸管壁由黏膜、黏膜下層、肌層和漿膜層4層構(gòu)成，小腸黏膜上有環(huán)行的皺襞、腸絨毛和小腸腺。絨毛長，但無中央乳糜管，小腸腺短，黏膜下層薄。腸絨毛是腸上皮和固有層共同向腸腔突出形成的細小突起，相思鳥的腸絨毛多呈指狀、葉狀或柱狀，在十二指腸和空腸分布最密，向后則逐漸減少變稀疏。與其他鳥禽相似，相思鳥的黏膜下層無十二指腸腺。

2.2 腸道各層的變化規(guī)律 同日齡不同腸段的消化道組織學(xué)比較中，腸絨毛高度、隱窩深度、肌層厚度及絨毛隱窩比值都呈現(xiàn)出十二指腸＞空腸＞回腸的趨勢；同腸段不同日齡的消化道組織學(xué)比較中，十二指腸、空腸、回腸的腸絨毛高度、隱窩深度以及肌層厚度隨著日齡的增加而增長，絨毛高度與隱窩深度的比值則呈現(xiàn)下降的趨勢。詳細數(shù)據(jù)及差異性比較見表1。

3 討論

紅嘴相思鳥腸段較短，約為體長的0.94倍，藍翅希鹛和灰胸藪鹛的腸道分別為體長的0.85倍和0.94倍[4]。紅嘴相思鳥與藍翅希鹛和灰胸藪鹛同為雜食性鳥類，可見該類鳥腸道短，盲腸不發(fā)達，無明顯的消化優(yōu)勢[5]。紅嘴相思鳥的腸絨毛無中央乳糜管，與環(huán)頸雉、東方白鸛和禽類相同[6-8]，各腸段未見腸絨毛分支現(xiàn)象，與西北冠鶴、環(huán)頸雉[6，9]不同，但與非洲鴕鳥[10]相同。

3.1 腸絨毛高度對紅嘴相思鳥消化功能的影響 紅嘴相思鳥與其他禽類一樣，小腸是消化和吸收營養(yǎng)的主要器官。小腸具有吸收和分泌兩種功能，吸收是絨毛的主要功能，而腸腺則具有分泌能力。研究結(jié)果顯示：同日齡下，紅嘴相思鳥的腸絨毛高度以十二指腸最高，其次為空腸，回腸最短；同腸段下，腸絨毛高度隨著日齡的增長而增加，且5日齡與1日齡相比絨毛高度成倍數(shù)增長。腸絨毛的數(shù)量、長度和形態(tài)結(jié)構(gòu)在很大程度上決定了消化道的消化和吸收功能強弱[11-12]，當(dāng)小腸絨毛的高度下降或形狀發(fā)生變化時[13-14]，就會減少絨毛單位面積內(nèi)吸收細胞的數(shù)量，降低消化吸收的功能。Pluske et al.[15]也證實絨毛更高的豬能消耗更多的飼料。

表1 紅嘴相思鳥小腸各層的變化規(guī)律（±SD） μm

注:同列比較，上標(biāo)不同大寫字母表示相同日齡不同腸段間差異極顯著（P<0.01），標(biāo)不同小寫字母表示相同日齡不同腸段間差異顯著（P<0.05）；同行比較，上標(biāo)不同大寫字母表示相同腸段不同日齡間差異極顯著（P<0.01），不同小寫字母表示相同腸段不同日齡間差異顯著（P<0.05）。

項目 腸道1日齡5日齡腸絨毛高度 十二指腸217.8±5.980AaDd 9日齡 雌 雄490.2±11.67AaCc空腸169.7±11.69BbDd 537.3±16.21AaBb 606.3±27.50AaAa 588.6±15.30AaAa 318.1±21.38BbCc回腸82.74±12.00CcDd 396.9±26.84BbBb 483.±24.66BbAa 458.7±22.92BbAa 141.7±7.101CcCc隱窩深度 十二指腸37.29±6.551AaCd 216.0±8.435CcBb 337.3±12.76CcAa 325.7±9.514CcAa 95.13±8.528AaBc空腸36.44±10.83AaCc 126.1±8.375AaBb 253.8±30.61AaAa 237.9±12.57AaAa 86.12±8.751AaBb回腸24.62±7.101AaDd 104.±3.179ABbBb 183.±15.52BbAa 164.9±15.80BbAa 52.00±1.729BbCc肌層厚度 十二指腸37.73±10.01AaBc 81.77±15.95BcBb 152.34.223BbAa 137.2±12.101BcAa 55.79±8.793AaAb空腸35.07±8.420AaBc 66.24±5.349AaAa 74.22±8.558AaAa 69.60±8.342AaAa 52.70±2.615AaAb回腸33.21±7.408AaCc 61.36±7.835AaAa 69.26±7.476AaAa 65.20±5.292AaAa 49.81±1.099AaBb絨毛長度與隱窩深度的比值十二指腸5.970±1.098AaAa 58.9±5.645Aa ABab 65.55±5.639AaAa 61.98±4.961AaAa 5.17±0.459Aa ABab空腸4.88±1.186AabAa 4.26±0.154AaBb 2.40±0.203AaCc 2.478±0.136AaCc 3.73±0.631Bb ABab回腸3.45±0.482AbAa 3.80±0.339ABb ABab 2.64±0.115AaBb 2.807±0.397AaBb 2.73±0.228Bc ABb 2.716±0.574Bc ABb 2.21±0.120AbBb 2.390±0.285AaBb

3.2 隱窩深度和肌層厚度對紅嘴相思鳥消化功能的影響 隱窩深度是腸上皮細胞成熟率的反應(yīng)性指標(biāo)，隱窩變深表明腸上皮細胞成熟率降低，變淺則表明成熟率上升[16]。同日齡下，紅嘴相思鳥十二指腸的隱窩深度大于空腸和回腸，且隨著日齡的增加隱窩深度呈現(xiàn)增長趨勢，這與Poole等[17]的研究結(jié)果一致。小腸各段的肌層厚度都隨著日齡的增加而逐漸增長。相同日齡比較，十二指腸是肌層厚度最大的腸段，回腸最薄。腸道肌層厚度越大，其蠕動能力越強，食糜與腸絨毛充分接觸的面越大，越有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

3.3 絨毛長度與隱窩深度的比值（V/C）對小腸吸收功能的影響 V/C比值下降，則消化吸收功能降低，動物生長發(fā)育受阻[18]。本研究顯示：絨毛長度與隱窩深度的比值在相同日齡下，十二指腸大于空腸和回腸；各個腸段的比值隨著日齡的增加逐漸降低；幼齡階段比值較大，成年階段比值較小。紅嘴相思鳥小腸各段的消化吸收能力由強到弱依次為：十二指腸、空腸和回腸；剛出殼的幼鳥的消化能力更強，之后隨著其生長速度減緩，V/C比值相應(yīng)降低。目前，已有大量的研究發(fā)現(xiàn)，幼齡動物小腸絨毛的形態(tài)和發(fā)育在初乳、斷奶應(yīng)激、日糧類型改變等因素的影響下均會發(fā)生改變。比如，斷奶應(yīng)激或斷奶日糧中抗原活性物質(zhì)導(dǎo)致的過敏反應(yīng)可使絨毛變短、隱窩加深。筆者認為，隨著日齡增加，紅嘴相思鳥各腸段的V/C值下降以及1～5日齡腸絨毛高度的成倍增長，與營養(yǎng)來源和能量代謝的改變等因素有關(guān)；并且可推測，育雛期紅嘴相思鳥小腸結(jié)構(gòu)和功能的完善以及機體的生長發(fā)育主要集中在5日齡內(nèi)。Baranyiova et al.[19]有關(guān)肉仔雞的研究也證實了這一猜想。這為進一步探索育雛期紅嘴相思鳥小腸發(fā)育規(guī)律的機理奠定了基礎(chǔ)，同時為其人工繁養(yǎng)過程中制定合理的飼養(yǎng)方法提供了理論依據(jù)。

[1]鄭光美.中國鳥類分類與分布名錄[M].北京:科學(xué)出版社，2005:270-271.

[2]李愛紅.組織染色中HE染色法的改良[J].生物醫(yī)藥，2009，16（10）:54-73.

[3]李偉，李霖，吳孝兵，等.多疣壁虎腸道內(nèi)分泌細胞的分布及形態(tài)學(xué)觀察[J].動物學(xué)雜志，2001（1）.

[4]徐會，郭延蜀.灰胸藪鹛消化系統(tǒng)形態(tài)的初步研究[J].四川動物，2006，25（4）:841-844.

[5]李福來.鳥類食性與消化道的特點[J].生物學(xué)通報，1984（2）:24-26.

[6]王麗萍，劉玉堂，肖向紅，等.環(huán)頸雉消化系統(tǒng)組織形態(tài)學(xué)觀察[J].動物學(xué)雜志，1994，29（3）:26-28.

[7]賈東平，彭克美，姜國彥，等.東方白鸛消化器官的組織學(xué)研究[J].野生動物，1991，64（6）:46-48.

[8]羅克.家禽解剖學(xué)與組織學(xué)[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社，1991:983.

[9]沈瑞蓮，劉清.西北冠鶴消化管的組織學(xué)觀察[J].動物學(xué)雜志，2000，35（3）:22-23.

[10]常展偉，楊玉榮，千國勝，等.非洲鴕鳥小腸組織學(xué)觀察[J].科學(xué)技術(shù)與工程，2008，8（6）:1541-1543.

[11]王繼鳳，陳耀星，王子旭，等.丁酸鈉對斷奶仔豬小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響[J].中國獸醫(yī)科技，2005，35（4）:298-301.

[12]方之平，潘黔生，黃風(fēng)杰，等.中華絨螯蟹消化道組織學(xué)及掃描電鏡研究[J].水生生物學(xué)報，2002，26（2）:136-141.

[13]董紅林，楊晶，單罷安，等.谷氨酰胺對氟尿嘧啶誘導(dǎo)的大鼠小腸結(jié)構(gòu)及其飲食量變化的影響[J].中國病理生理雜志，1999，15（5）:446-446.

[14]常文環(huán).黃霉素對肉仔雞促生長作用機理的研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，1996.

[15]Pluske JR，Williams IH，Aherne FX.Villous height and crypt depth in piglets in response to increases in the intake of cows′milk after weaning[J].Animal Science，1996，62（1）:145-158.

[16]李勇，蔡輝益，劉國華，等.地塞米松對肉仔雞空腸二糖酶活性及黏膜形態(tài)的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2008，39（1）:48-52.

[17]Poole C A， Wong E A， McElroy A P， et al.Ontogenesis of peptide transport and morphological changes in the ovine gastrointestinal tract[J].Small Ruminant Research，2003，50（1）:163-176.

[18]宋恩亮，陳耀星，王子旭，等.肉犢牛小腸黏膜免疫相關(guān)細胞的數(shù)量變化研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2007，38（10）:1109-1114.

[19]Baranyiova E，Holman J.Morphological changes in the intestinal wall in fed and fasted chickens in 1st week after hatching[J].Acta Vet Brno，1976，45（3）:151-158.