聶寒，蘇珂，龍艷，蔣姍姍，孫清

青蒿琥酯對糖尿病腎病大鼠腎組織Toll樣受體4及白細胞介素-8表達的影響

聶寒，蘇珂△，龍艷△，蔣姍姍，孫清

目的 觀察青蒿琥酯對糖尿病腎?。―N）大鼠模型腎組織Toll樣受體（TLR）4、白細胞介素（IL）-8表達的影響。方法 健康雄性SD大鼠（體質(zhì)量＞200 g）采用高糖高脂聯(lián)合腹腔注射30 mg/kg鏈脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病腎病模型。將32只造模成功大鼠隨機分為B、C、D、E組，另擇8只健康雄性SD大鼠（體質(zhì)量≤200 g）為A組，A、B組給予10 mg/（kg·d）生理鹽水；C、D組分別給予30 mg/（kg·d）、10 mg/（kg·d）青蒿琥酯；E組給予10 mg/（kg·d）依那普利。灌胃給藥12周后，觀察大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、空腹血糖、體質(zhì)量、腎臟肥大指數(shù)（KI）的變化；Western blot法檢測腎組織TLR4蛋白的表達；ELISA法檢測血清及腎組織IL-8的水平。結(jié)果 B、C、D、E組空腹血糖、KI均明顯高于A組，體質(zhì)量明顯低于A組；B、C、D、E組24 h尿蛋白、Cr、BUN、腎組織TLR4蛋白表達、血清及腎組織IL-8水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組（均P＜0.05）。TLR4蛋白與血清IL-8（r=0.969）、腎組織IL-8（r=0.972）、Cr（r=0.944）、BUN（r=0.903）、24 h尿蛋白（r=0.965）均呈正相關(guān)（均P＜0.05），腎組織IL-8與Cr（r=0.929）、BUN（r=0.940）、24 h尿蛋白（r=0.962）均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。結(jié)論 青蒿琥酯可能通過下調(diào)腎組織TLR4蛋白的表達，減少炎性因子IL-8的釋放，減輕DN的炎癥反應(yīng)，一定程度上緩解DN的發(fā)展。

青蒿素；糖尿病腎?。籘oll樣受體4；白細胞介素8；炎癥反應(yīng)；青蒿琥酯

糖尿病腎?。―N）作為糖尿病的全身微血管并發(fā)癥之一，具有較高的致死、致殘率，其發(fā)病機制復(fù)雜多樣。近年有許多學者提出機體內(nèi)持續(xù)性慢性低度炎癥狀態(tài)參與DN［1］，其可能機制之一免疫炎癥反應(yīng)已得到廣泛的認可。作為介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)關(guān)鍵步驟的Toll樣受體（TLR） 4及炎癥因子白細胞介素（IL）-8被認為在DN的免疫炎癥機制中起著關(guān)鍵性的作用，并隨著DN病程進展，其濃度逐漸上升［2］。青蒿琥酯是青蒿素的一種半合成衍生物，具有抗瘧、抑制細胞增生、免疫調(diào)節(jié)、抗血管增生等作用［3］，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)其還具有免疫炎癥抑制作用，可能有助于DN的治療［4］。有研究顯示青蒿琥酯可減少哮喘氣道平滑肌［5］、腎間質(zhì)［6］中TLR4、IL-8的表達，減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，但有關(guān)青蒿琥酯對DN腎組織中TLR4、IL-8表達影響的研究尚少見。本研究旨在通過檢測TLR4、IL-8在DN大鼠中的表達，探討青蒿琥酯對DN炎癥損傷的作用，為臨床治療DN提供新的思路及方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康6～8周齡雄性SPF級SD大鼠45只，體質(zhì)量180～220 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。

1.1.2 藥品及主要試劑 鏈脲佐菌素（STZ，美國Sigma公司），青蒿琥酯（桂林南藥股份有限公司），馬來酸依那普利（揚子江藥業(yè)集團），大鼠血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所），大鼠IL-8酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海科敏生物有限公司），兔抗大鼠TLR4多克隆抗體（美國Abcam公司），辣根過氧化物酶（HRP）標記山羊抗兔IgG（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），硝酸纖維素膜（美國Amersham公司），ECL發(fā)光試劑（Pierce公司）。

1.2 方法

1.2.1 制備模型 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，喂養(yǎng)期間每周測量大鼠體質(zhì)量，1周后按體質(zhì)量分為正常對照組（A組，≤200 g，n=8）和高糖高脂組（＞200 g，n=37）。正常對照組以普通飼料喂養(yǎng)，高糖高脂組大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，飼料配方按照文獻［7］的方法。6周后禁食12 h，腹腔注射STZ 30 mg/kg（使用前溶于0.1 mmol/L、pH 4.2～4.5無菌檸檬酸鈉緩沖液）復(fù)制2型糖尿病模型，以連續(xù)3次測隨機血糖大于16.7 mmol/L視為2型糖尿病模型成功。符合2型糖尿病模型的大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)4周后，測定尿量大于原尿量50%、尿蛋白排泄率大于30 mg/24 h視為2型糖尿病腎病模型制備成功。3只未成模大鼠于1周后再次注射STZ仍未成模，2只大鼠死亡，余32只大鼠均成模。

1.2.2 分組及給藥 將32只成模大鼠采用隨機數(shù)字表法分為模型對照組（B組）、青蒿琥酯大劑量組（C組）、青蒿琥酯小劑量組（D組）、依那普利組（E組），每組8只。其中C組和D組分別給予30 mg/（kg·d）、10 mg/（kg·d）青蒿琥酯；E組依據(jù)臨床上常規(guī)用量，并通過人與大鼠的體表面積換算給予10 mg/（kg·d）依那普利；A、B組給予10 mg/（kg·d）生理鹽水。均灌胃給藥12周，實驗過程中不用胰島素。

1.2.3 標本收集 于12周末，用代謝籠收集24 h尿量，并迅速送至我院檢驗科測定24 h尿蛋白。所有大鼠禁食不禁水12 h后，測量空腹血糖及體質(zhì)量。腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉后從心臟采血4～5 mL，室溫下靜置1 h后以3 000 r/min 4℃離心10 min，取上層血清，-80℃冰箱保存。放血處死大鼠后立即剖腹游離出腎臟，取左腎，濾紙吸干血跡后用電子天平稱腎濕質(zhì)量，計算腎臟肥大指數(shù)（KI）=腎濕質(zhì)量/體質(zhì)量，余腎組織置于冰上剪碎后放至凍存管中，-80℃冰箱保存。

1.2.4 Western blot法測定TLR4蛋白的表達 將取出的組織塊稱質(zhì)量后，在液氮中研磨成粉末狀加入裂解液使其溶解，4℃12 000 r/min離心15 min，取上清，用Bradford比色法測定總蛋白濃度。蛋白稀釋后沸水浴中3 min后上樣，經(jīng)10%的SDS-PAGE電泳1 h后，轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維素膜上；5%脫脂奶粉室溫下封閉1 h，洗去封存液后加入一抗（兔抗大鼠TLR4多克隆抗體1∶200），4℃孵育過夜；洗膜3次，每次10 min，后加入HRP標記的二抗（1∶2 000），室溫下孵育1 h：洗膜3次，每次10 min；后用ECL發(fā)光試劑發(fā)光，膠片曝光，顯影，定影。用圖像分析軟件進行灰度值測定，以TLR4灰度值與內(nèi)參β-actin灰度值的比值作為TLR4蛋白表達的相對水平。

1.2.5 ELISA法測定IL-8的水平 嚴格按照購買的試劑盒說明書進行操作，相同標本設(shè)2個復(fù)孔，重復(fù)2次，在酶標儀上于450 nm波長處測定吸光度（OD）值，根據(jù)標準曲線及OD值計算各個標本的濃度。

1.2.6 其他指標 采用苦味酸比色法測定Cr水平，脲酶法測量BUN水平，全自動生化儀檢測24 h尿蛋白。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用±s表示，各組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法，相關(guān)分析行Pearson積差相關(guān)，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠空腹血糖、體質(zhì)量及KI的比較 B、 C、D、E組空腹血糖明顯高于A組（P＜ 0.05），B、C、 D、E組間空腹血糖差異無統(tǒng)計學意義；B、C、D、E組體質(zhì)量明顯低于A組，C、D、E組體質(zhì)量高于B組（P＜ 0.05）；B、C、D、E組KI高于A組，C、D、E組KI低于B組（P＜0.05），見表1。

Tab.1 Comparison of fasting glucose，body weight and Kidney Index among different rat groups表1 各組大鼠空腹血糖、體質(zhì)量及KI的比較（n=8，±s）

＊＊P＜0.01，a與A組比較，b與B組比較，P＜0.05

組別A組B組C組D組E組F空腹血糖（mmol/L）4.618±0.859 24.875±0.872a24.754±0.822a25.675±0.964a24.808±0.844a130.719＊＊體質(zhì)量（g）491.713±12.791 329.725±5.640a362.532±1.743ab347.811±10.416ab331.654±6.781ab891.765＊＊KI（g/kg）3.324±0.219 6.794±0.421a4.837±1.011ab5.971±0.832ab4.611±0.794ab108.473＊＊

2.2 各組大鼠24 h尿蛋白、Cr及BUN的比較 B、C、D、E組24 h尿蛋白、Cr和BUN水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組（均P＜0.05），E組與C組差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

Tab.2 Comparison of twenty-four hours urine protein，serum creatinine and Urea nitrogen of rats in each group at 12 weeks after completion of the experiment表2 實驗12周后各組大鼠24 h尿蛋白定量、Cr、BUN水平的比較 （n=8，±s）

Tab.2 Comparison of twenty-four hours urine protein，serum creatinine and Urea nitrogen of rats in each group at 12 weeks after completion of the experiment表2 實驗12周后各組大鼠24 h尿蛋白定量、Cr、BUN水平的比較 （n=8，±s）

＊＊P＜0.01，a與A組比較，b與B組比較，c與C組比較，d與D組比較，P＜0.05；表3同

BUN（mmol/L）9.145±0.521 29.242±0.705a11.602±0.624ab18.807±0.624abc10.591±1.075abd1 280.110＊＊組別A組B組C組D組E組F 24 h尿蛋白（mg）18.141±0.702 68.713±1.433a31.332±4.220ab53.067±3.282abc32.781±3.632abd256.732＊＊Cr（μmol/L）23.451±1.460 63.462±4.401a30.471±1.144ab50.491±0.887abc31.515±0.672abd102.117＊＊

2.3 各組大鼠TLR4蛋白表達及IL-8水平的比較 B、C、D、E組腎組織TLR4蛋白的表達、血清及腎組織IL-8水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組，E組高于C組（均P＜0.05），見表3、圖1。

Tab.3 Comparison expression levels of TLR4 and IL-8 of rats in each group表3 各組大鼠TLR4蛋白、IL-8水平的比較（n=8，±s）

Tab.3 Comparison expression levels of TLR4 and IL-8 of rats in each group表3 各組大鼠TLR4蛋白、IL-8水平的比較（n=8，±s）

組別A組B組C組D組E組F腎組織TLR4蛋白0.243±0.004 0.678±0.005a0.424±0.004ab0.612±0.002abc0.522±0.003abcd128.011＊＊血清IL-8（ng/L）4.479±0.311 14.673±0.115a8.527±0.228ab11.298±0.163abc10.149±0.073abcd361.616＊＊腎組織IL-8（ng/L）5.112±0.210 12.737±1.237a7.211±0.769ab11.301±1.211abc9.149±0.073abcd96.745＊＊

Fig.1 Comparison of TLR4 expression level in the renal tissue of rats圖1 各組大鼠腎組織TLR4蛋白表達的比較

2.4 相關(guān)性分析 TLR4蛋白與血清 IL-8（r= 0.969）、腎組織IL-8（r=0.972）、Cr（r=0.944）、BUN（r= 0.903）、24 h尿蛋白（r=0.965）均呈正相關(guān)（均P＜0.05），腎組織IL-8與Cr（r=0.929）、BUN（r=0.940）、24 h尿蛋白（r=0.962）均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。

3 討論

近些年研究發(fā)現(xiàn)，DN除了已熟知的經(jīng)典的發(fā)病機制（血流動力學障礙、糖代謝紊亂、氧化應(yīng)激、胰島素抵抗等）外，免疫炎癥反應(yīng)也參與了DN的發(fā)生發(fā)展［8］。有研究證實糖尿病機體的內(nèi)環(huán)境紊亂狀態(tài)可以引起腎臟固有細胞的損傷，并釋放多種炎癥介質(zhì)引起腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化［9］。因此筆者推測炎癥機制可能單獨或與上述經(jīng)典機制相互作用導(dǎo)致DN的發(fā)展惡化。

TLR參與免疫炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。TLR 4受體是迄今為止發(fā)現(xiàn)最早的TLR亞型之一，是目前被研究最多的Toll樣受體，在免疫炎癥性疾病中的作用也日漸受到關(guān)注［10］。其主要通過MyD88依賴的和非MyD88依賴的信號途徑通路引起生物活性作用［11］，通路被激活后可以啟動其下游各種炎癥介質(zhì)（如IL-8、IL-6、腫瘤壞死因子-α）的合成和釋放，從而引起一系列的炎癥反應(yīng)［12］。DN狀態(tài)下，體內(nèi)多種細胞因子被損傷活化后觸發(fā)TLR4介導(dǎo)的獲得性免疫反應(yīng)［13］，導(dǎo)致大量的炎癥細胞因子產(chǎn)生，引起腎臟炎癥反應(yīng)，加重腎損傷，參與DN的發(fā)生發(fā)展［14］。呂金雷等［15］發(fā)現(xiàn)高糖狀態(tài)下可以激活TLR4-MyD88信號通路，導(dǎo)致下游炎性因子的增加，提示高糖可能是觸發(fā)TLR4活化的因素之一，其介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)可能與MyD88依賴的信號途徑激活有關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)2型糖尿病腎病大鼠腎組織TLR4蛋白表達上調(diào)，與IL-8、腎臟損害程度的有關(guān)指標呈正相關(guān)，與上述研究結(jié)果相似，進一步說明糖尿病腎臟損害的免疫炎癥反應(yīng)機制與TLR4信號通路的活化有著密切聯(lián)系，因此阻斷TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對治療及緩解DN腎臟病變至關(guān)重要，但是否通過MyD88依賴的信號途徑介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)尚待進一步研究。

青蒿琥酯是具有過氧橋的倍半萜類化合物［16］。最新研究表明青蒿琥酯除具有傳統(tǒng)意義上的生物活性外還具有免疫炎癥抑制作用。本研究結(jié)果顯示，青蒿琥酯各劑量組較模型對照組的腎組織TLR4蛋白表達、血清和腎組織IL-8水平均明顯降低，且青蒿琥酯大劑量組較小劑量組效果更明顯，腎功能損傷程度減輕，24 h尿蛋白量減少，提示青蒿琥酯可能通過下調(diào)TLR4的表達，減少炎癥介質(zhì)IL-8水平，減輕腎臟的炎癥反應(yīng)，同時減少尿蛋白的產(chǎn)生，改善腎功能，從而在一定程度上保護腎臟。另外，本研究中腎組織TLR4蛋白的表達與IL-8、Cr、BUN及24 h尿蛋白量呈正相關(guān)，提示TLR4的表達異常與DN的持續(xù)性低度炎癥狀態(tài)有關(guān)，同時也發(fā)現(xiàn)腎組織IL-8水平與Cr、BUN及24 h尿蛋白量呈正相關(guān)，推測IL-8水平有可能成為判斷腎功能損害程度的一個指標，進一步驗證上述結(jié)論。同時發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯各劑量組間空腹血糖無明顯差異，提示青蒿琥酯對腎臟的保護機制可能獨立于血糖的作用。青蒿琥酯大劑量組與依那普利組相比各種腎功能損害指標無明顯差異，推測30 mg/（kg·d）青蒿琥酯可能與10 mg/（kg·d）依那普利在保護腎功能方面的療效相似。

綜上所述，青蒿琥酯可能通過下調(diào)腎組織TLR4的表達，減少炎癥因子IL-8的釋放，減少蛋白尿，改善腎功能，從而對腎臟病變程度的惡化起到一定程度的緩解作用，但具體機制尚需進一步研究。

［1］Huang L，Liao TT，Gong J，et al.The influence of bailing capsule on microinflammatory state in diabetic nephropathy with chronic renal failure［J］.China Modern Med J，2014，21（15）:72-74.［黃龍，廖婷婷，龔俊，等.百令膠囊對糖尿病腎病慢性腎衰竭微炎癥狀態(tài)的影響［J］.中國當代醫(yī)藥，2014，21（15）：72-74］.

［2］Yang M，Gan H，Shen Q，et al.Proinflammatory CD14+CD16+mono?cytes are associated with microinflammation in patients with type 2 diabetes mellitus and diabetic nephropathy uremia［J］.Inflamma?tion，2012，35（1）:388-396.doi:10.1007/s10753-011-9374-9.

［3］Liu L，Zuo LF，Wang J.Effects of artesunate on membrane potential of mitochondria and cell apoptosis of Ec9706 cells［J］.Med J Chin PLA，2014，39（1）:25-29.［劉亮，左連富，王靜.青蒿琥酯對食管癌Ec9706細胞線粒體膜電位及凋亡的影響［J］.解放軍醫(yī)學雜志，2014，39（1）:25-29］.

［4］Jiang SS，Long Y，Su K，et al.Effects of artesunate on high glucoseinduced cell apoptosis，TNF-α and IL-8 expression in renal tubu?lar epithelial cells［J］.Tianjin Med J，2015，43（1）:20-24.［蔣姍姍，龍艷，蘇珂，等.青蒿琥酯對高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞凋亡及TNF-α、IL-8表達的影響［J］.天津醫(yī)藥，2015，43（1）:20-24］.

［5］Huang FJ，Zhang GJ，Zhang H.Effects of artesunate on the expression level of TLR4 and TGF-βwith asthma rats［J］.Chin Med Biotechnol，2011，6（4）:266-269.［黃發(fā)軍，詹光杰，張宏.青蒿琥酯對哮喘大鼠肺組織TLR4及TGF-β表達的影響［J］.中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2011，6（4）：266-269］.doi:10.3969/cmba，j.issn.1673-713x.2011.04.006.

［6］Ma XY，Wu WH，Zeng Y，et al.The anti-inflammatory effect and its mechanism of artemisia on the renal of UUO rats［J］.Chongqing Med，2010，39（12）:1514-1516.［馬行一，昊蔚樺，曾燕，等.青蒿琥酯對UUO模型大鼠腎臟的抗炎作用及其機制研究［J］.重慶醫(yī)學，2010，39（12）：1514-1516］.doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2010.12.013.

［7］Fan YF，Xu RX，Xiang JJ，et al.Study of the method used to induce the model of type 2 diabetic mellitus rat and the characteristic of the nephropathy［J］.Journal of Chinese Physician，2012，14（1）:16-19.［范巖峰，許榕仙，向建軍，等.2型糖尿病腎病大鼠模型的建立及腎病特點［J］.中國醫(yī)師雜志，2012，14（1）：16-19］.doi:10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2012.01.006.

［8］Nelson KF，Tsung WC，Hwai LL，et al.Negative regulatory resposes to metabolliccaly triggered inflammtion impair renal epithelial immu?nity in diabetes mellitus［J］.J Mol Med，2013，91（12）:587-598.doi: 10.1007/s00109-012-0969-x.

［9］Ma J，Wu H，Zhao CY，et al.Requirement for TLR2 in the develop?ment of albuminuria，inflammation and fibrosis in experimental dia?betic nephropathy［J］.Int J Clin Exp Pathol，2014，7（2）:481-495.

［10］Zhang XD，F(xiàn)ang JA，Li XX，et al.Effect of Yishen capsule on thbuloin?terstitial expression of TLR and NF-κB in experimental diabetic ne?phropathy［J］.Chin J Kidney Dis Invest（Electronic Editor），2013，2 （4）:28-31.［張曉東，方敬愛，李秀秀，等.益盛膠囊對糖尿病腎病模型腎小管間質(zhì)TLR4及NF-κB表達的研究［J］.中華腎病研究，2013，2（4）：28-31］.doi:10.3877/cma.j.issn.2095-3216.04.007.

［11］Liu P，Li F，Qiu M，et al.Expression and cellular distribution of TLR4，MyD88，and NF-κB in diabetic renal tubulointerstitial fibro?sis，in vitro and in vivo［J］.Diabetes Res Clini Pract，2014，10（10）：1016-1024.doi:10.1016/j.diabres.2014.04.020.

［12］Wang ZG，Wei M，Wang M，et al.Inhibition of macrophage inhibito?ry factor reduces diabetic nephrpathyin typeⅡdiabetes in mice［J］.Inflammation，2014，37（6）:2020-2029.doi:10.1007/s10753-014-9934-x.

［13］Yang MX，Gang H，Shen Q.Effect of LPS on the level of TLR4 and on theexpression of NF-κB，Notch1 in monocytes from patients with type 2 diabetic nephropathy［J］.J Cent South Univ（Med sci），2012，37（6）:578-585.［楊孟雪，甘華，沈清.脂多糖對2型糖尿病腎病患者單核細胞TLR4水平及NF-κB，Notch1表達的影響［J］.中南大學學報（醫(yī)學版），2012，37（6）：578-585］.doi:10.3969/j.jssn.1672-7347.2012.06.007.

［14］Lorenz G，Darisipudi MN，Anders HJ.Canonical and non-canonical effects of the NLRP3 inflammasome in kidney inflammation and fi?brosis［J］.Nephrology Dialysis Transplantation，2014，29（1）:41-48.doi:10.1093/ndt/gft332.

［15］Lyu JL，Xu JH，F(xiàn)u ZH，et al.Angiotensin II up?regulates the release of inflammation factors via Toll?like receptor 4 signal in rat mesan?gial cells under high glucose［J］.Chin J Nephrol，2013，29（12）：908-913.［呂金雷，徐金華，付志暉，等.血管緊張素Ⅱ正向調(diào)節(jié)高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細胞TLR4信號及炎性因子的表達［J］.中華腎臟病雜志，2013，29（12）：908-913］.doi:10.3760/cma.j.issn.1001?7097.2013.12.007.

［16］Nzila A，Al-Zahrani I.Drugs for the treatment of malaria in the Kingdom of Saudi Arabia［J］.Saudi Med J，2013，34（6）:569-578.

（2014-06-11收稿 2014-12-19修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Effect of artesunate on expressions of Toll-like receptor 4 and interleukin-8 in renal tissues of diabetic nephropathy rats

NIE Han，SU Ke△，LONG Yan△，JIANG Shanshan，SUN Qing
Department of endcrinology，Affiliated Hospital of Guilin Medical College，Guilin 541001，China
△Corresponding Author E-mail：su13978316336@163.com，ly136988@163.com

Objective To investigate effect of artesunate on expressions of Toll-like receotor-4（TLR4）and interleu?kin-8（IL-8）in renal tissue of diabetic nephropathy rats.Methods Male SD rats of over 200 g in body weight（n=45）were injected with low dosage streptozotocin and fed with high fat and sucrose diets to establish diabetes nephropathy（DN）model.Among all rats of successful model，thirty-two were randomly selected and divided into four groups（n=8 in each group），Mod?el group（Group B），Artesunate at high dose treatment group［30 mg/（kg·d）］（Group C），Artesunate at low dose treatment group［10 mg/（kg·d）］（Group D），Enalapril treatment group［10 mg/（kg·d）］（Group E）.Another eight rats without STZ injec?tion whose body weight is under 200 g were assigned as Normal group（Group A）.Then，rats in Group A and B were given the same volume of normal saline［10 mg/（kg·d）］while rats in Group C，D and E were given 30 mg/（kg·d）Artesunate，10 mg/（kg·d）Artesunate and 10 mg/（kg·d）Enalapril respectively intragastrically for consecutive 12 weeks.Fasting blood glucose，body weight，kidney index，24-hours proteinuria，serum creatinine（Cr）and blood urea nitrogen（BUN）were measured.Expression level of TLR4 in renal tissue of rats were examined by Western blot；ELISA was used to quantify the concentration of IL-8 in serum and renal tissue of rats.Results Compared with rats in Group A，the levels of Fasting blood glucose，kidney index，24-hours proteinuria，Cr and BUN as well as the level of TLR4 in kidney，levels of IL-8 in serum and kidney all significant?ly increased in rats in Group B，C，D and E（P＜0.05）.On the other hand，body weight were decreased in rats of Group B，C，D and E compared to rats in Group A（P＜0.05）.The level of TLR4 in kidney，levels of IL-8 in serum and kidney，24-hours proteinuria，Cr and BUN in rats of Group C，D and E were significantly lower than those in rats of Group B（P＜0.05）.Furthermore，compared with rats in Group D，the levels of TLR4 in kidney，IL-8 in serum and kidney，24-hours proteinuria，Cr and BUN were decreased in rats in Group C and E（P＜0.05）.Pearson correlation analysis showed that the expression lev?el of TLR4 positively correlated with IL-8 level in serum（r=0.969，P＜0.05），IL-8 level in kidney（r=0.972，P＜0.05），24-hours proteinuria（r=0.965，P＜0.05），Cr（r=0.944，P＜0.05）and BUN（r=0.903，P＜0.05）.IL-8 level in kidney positively correlated with 24-hours proteinuria（r=0.962，P＜0.05），Cr（r=0.929，P＜0.05）and BUN（r=0.940，P＜0.05）.Conclu?sion Artesunate decreases expression of TLR4 and IL-8，reduce 24-hours proteinuria，inhibits the inflammation of the DN，relives the pathological lesions of nephron rats with diabetic nephropathy.

ARTEMISININ；diabetic nephropathies；Toll-like receptor 4；interleukin-8；inflammatory reaction；ARTE?SUNATE

R587.1

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.006

廣西醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)研究與開發(fā)項目（S201316-07）；廣西自然科學基金項目（2012GXNSFAA053085）

桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科（郵編541001）

聶寒（1987），女，碩士在讀，主要從事糖尿病及慢性并發(fā)癥的診治研究

△E-mail：su13978316336@163.com，ly136988@163.com