桑國俊，郭海龍，王 珂，容維中，邱忠玉（甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?44000）

兩種新劑型牛細(xì)管凍精精子質(zhì)量評定

桑國俊，郭海龍，王 珂，容維中，邱忠玉
（甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?44000）

對以EG和GL為冷凍保護(hù)劑的2種稀釋液對牛精液冷凍保存效果進(jìn)行了質(zhì)量檢測與分析，表明2種劑型細(xì)管凍精在總活精子數(shù)、精子復(fù)蘇率、平均路徑速率、曲線運(yùn)動速率、直線運(yùn)動速率、頂體完整率和畸形率等方面顯著優(yōu)于對照組，EG劑型組的效果優(yōu)于GL劑型組。

甘油；乙二醇；細(xì)管凍精；精子活力

1　試驗(yàn)?zāi)康暮鸵?/h2>

牛的繁殖方式包括本交和人工授精，人工授精又分鮮配和凍配，利用細(xì)管凍精進(jìn)行遠(yuǎn)程和集中實(shí)施人工授精是最主要的牛群繁殖方式。因此，細(xì)管凍精的質(zhì)量是確保人工授精受胎率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［1］。細(xì)管凍精的質(zhì)量受供精公牛健康狀況、飼養(yǎng)水平、精液品質(zhì)、細(xì)管凍精制作環(huán)節(jié)和保存條件的影響，這些環(huán)節(jié)中除細(xì)管凍精制作外都可以進(jìn)行人工標(biāo)準(zhǔn)控制和實(shí)施，而細(xì)管凍精制作環(huán)節(jié)受冷凍液、冷凍方法的影響較大［2］。常規(guī)冷凍液的冷凍保護(hù)劑為甘油和蛋黃，在應(yīng)用中存在黏度過大、蛋黃脂肪顆粒大而不均勻，影響精子運(yùn)動速率的問題［3～4］。因此，在此前的一系列試驗(yàn)中篩選出了一種黏度較小的新型冷凍保護(hù)劑及其對應(yīng)的稀釋液，在不影響精液冷凍效果的前提下，提高精子的運(yùn)動速率，提高人工授精的受胎率［5］。本試驗(yàn)的目的是針對前期試驗(yàn)結(jié)果，對按照已經(jīng)定型的配方生產(chǎn)的牛細(xì)管凍精進(jìn)行精子質(zhì)量評定，為定型配方提供科學(xué)依據(jù)。

2　試驗(yàn)設(shè)備和要求

主要試驗(yàn)設(shè)備為液氮罐、顯微鏡、精子圖像分析儀［6］。

3　試驗(yàn)方法和步驟

以傳統(tǒng)配方及其生產(chǎn)方法為對照組，以EG（乙二醇）和GL（甘油）為冷凍劑的2種定型配方為實(shí)

06-0060-03驗(yàn)組，3組各生產(chǎn)100枚牛細(xì)管凍精，從中各抽檢10枚，測定總活精子數(shù)（total sperm count）、精子復(fù)蘇率（sperm recovery rate）、活力（sperm motility）、平均路徑速率（average path velocity，VAP）、曲線運(yùn) 動速率（curvilinear velocity，VCL）、直線運(yùn)動速率（straight line velocity，VSL）、頂體完整率（sperm acrosome integrity rate）和畸形率（sperm abnormality rate）等，測定結(jié)果用spss統(tǒng)計(jì)分析。

4　試驗(yàn)結(jié)果

4.1試驗(yàn)配方

本試驗(yàn)是對牛精液稀釋液和冷凍液測定并定型的基礎(chǔ)上實(shí)施的，根據(jù)前期項(xiàng)目試驗(yàn)結(jié)果，確定了最優(yōu)組合，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)測定，為配方定型提供更具說服力的數(shù)據(jù)資料。

試驗(yàn)配方設(shè)計(jì)見表1。EG組和GL組的基礎(chǔ)液相同。冷凍液按照處理不同，設(shè)置了以EG為冷凍劑和以GL為冷凍劑2種處理，每個處理又分為第一液和第二液。第一液用于第一次稀釋牛精液，第二液用于稀釋進(jìn)行平衡處理和冷凍處理的精液。

對照組傳統(tǒng)配方為：第一液：蒸餾水100mL，檸檬酸鈉2.97g，普通卵黃10mL；第二液：取第一液41.75mL，加入果糖2.5g，甘油7mL。

牛精液稀釋、平衡、冷凍及保存與前期試驗(yàn)相同。本處不予敘述。

4.2試驗(yàn)結(jié)果

依照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，本次測定的是已經(jīng)按照定型配方和生產(chǎn)規(guī)程生產(chǎn)的牛細(xì)管凍精，隨機(jī)選擇EG組和GL組各10枚細(xì)管凍精，在實(shí)驗(yàn)室用精子圖像分析儀進(jìn)行總活精子數(shù)、精子復(fù)蘇率、活力、平均路徑速率（VAP）、曲線運(yùn)動速率（VCL）、直線運(yùn)動速率（VSL）、頂體完整率和畸形率等測定。測定數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果詳見表2。

表1　定型配方

表2　尺指標(biāo)，從中選擇所有一歲、二歲、

表3　試驗(yàn)組比對照組指標(biāo)提高百分比統(tǒng)計(jì)

上述統(tǒng)計(jì)分析表明：

總活精子數(shù)：試驗(yàn)組和對照組均在3500萬左右，差異不顯著（P＞0.05）。

精子復(fù)蘇率：優(yōu)勢序列為EG組＞GL組＞對照組。EG組比GL組低0.34%（P＞0.05），比對照組高2.8%（P＞0.05）；GL組比對照組高2.45%（P＞0.05）。

活力：優(yōu)勢序列為EG組＜GL組＞對照組。EG組比GL組低2.34%（P＞0.05），比對照組高% 5.33（P＞0.05）；GL組比對照組高7.86%（P＜0.05）。

平均路徑速率（VAP）：優(yōu)勢序列為EG組＜GL組＞對照組。EG組比GL組低1.27%（P＞0.05），比對照組高3.78%（P＞0.05）；GL組比對照組高5.11%（P＜0.05）。

直線運(yùn)動速率（VSL）：優(yōu)勢序列為EG組＞GL組＞對照組。EG組比GL組高3.22%（P＞0.05），比對照組高4.59%（P＜0.05）；GL組比對照組高1.32%（P＞0.05）。

曲線運(yùn)動速率（VCL）：優(yōu)勢序列為EG組＞GL組＞對照組。EG組比GL組高5.34%（P＜0.05），比對照組高11.00%（P＜0.05）；GL組比對照組高5.37%（P＜0.05）。

頂體完整率：優(yōu)勢序列為EG組＞GL組＞對照組。EG組比GL組高0.78%（P＞0.05），比對照組高9.2%（P＜0.05）；GL組比對照組高8.36%（P＜0.05）。

畸形率：優(yōu)勢序列為EG組＞GL組＞對照組。EG組比GL組低6.96%（P＜0.05），比對照組低15.35%（P＜0.01）；GL組比對照組低9.01%（P＜0.05）。

5分析討論

本次試驗(yàn)對牛精液冷凍保存試驗(yàn)中定型的兩種方法進(jìn)行的質(zhì)量檢查評定表明：

①篩選出的兩種牛精液冷凍保存方法的各項(xiàng)質(zhì)量評定指標(biāo)高于對照組，特別是對受精過程影響最大的精子頂體完整率、精子畸形率、直線和曲線運(yùn)動速率等指標(biāo)均高于或顯著高于對照組。

②兩組試驗(yàn)組之間相比，相互之間差異不一致。關(guān)鍵指標(biāo)（精子頂體完整率、精子畸形率、直線和曲線運(yùn)動速率等）EG組高于GL組。

③小結(jié)。對于已經(jīng)定型的兩種牛精液的冷凍保存方法而言，EG組優(yōu)于GL組，更具有推廣應(yīng)用價值。

［1］ 鄧福金，王化青，吳慶榮.牛精液冷凍機(jī)理的探討［J］.中國牛業(yè)科學(xué)，2013，2（39）：57-59.

［2］ 賈永宏，朱慶超，楊海濤等.牛精液冷凍保護(hù)劑研究進(jìn)展［J］.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2014，1（35）：5-8.

［3］ 易康樂.水牛冷凍精液稀釋液配方改進(jìn)的研究［D］.中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，2005：1-33.

［4］ 蔡虹.牛精液冷凍稀釋液新配方研究［D］.中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫2009：1-55.

［5］ 楊俊濤.牛精液冷凍稀釋液的改進(jìn)研究［D］.中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫2007：1-45.

［6］ 王麗云，劉玉，朱子岳等.牛冷凍精液稀釋液的研究進(jìn)展［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2014，6（4）：15-16.

Quality Test for two Types Bovine Frozen Semen of Wheat Straw

SANG Guo-jun，GUO Hai-long，WANG Ke，RONG Wei-zhong，QIU Zhong-yu
（Gansu Institute of Animal Science and Veterinary medicine，Pingliang Gansu 744000，China）

It were studied that EG and GL as cryoprotectant had increased the thawing sperm motility for bovine frozen semen of wheat straw.The report had showed there are significant difference between group EG and group GL in total sperm count，recovery rate，motility，average path velocity，curvilinear velocity， straight line velocity，acrosome integrity rate and abnormality rate.

GL（Glycerol），EG（ethylene glycol），bovine frozen semen of wheat straw，sperm motility

S823.6

A

1001-9111（2015）

2015-04-18 修改日期：2015-04-22

甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開發(fā)項(xiàng)目"EG和TCM199提高牛精液冷凍效果的關(guān)鍵技術(shù)研究"。

桑國?。?963-），男，博士研究生，甘肅省臨洮縣人，研究員，主要研究方向?yàn)閯游镞z傳育種與繁殖。