袁盛勇等

摘要：利用3.0×104～3.0×108個/mL 5個濃度的球孢白僵菌XD0104015菌株對南瓜實蠅的成蟲、幼蟲、蛹進行室內(nèi)致病力測定。結(jié)果表明，成蟲、幼蟲、蛹校正死亡率均在3.0×108個/mL孢子濃度下達到最高，分別為（90.00±1.92）%、（84.44±2.99）%、（80.00±2.95）%；致死中時間（LT50）分別為（4.088±0.387）、（4.575±0.569）、（4.702±0335） d；處理9 d的致死中濃度（LC50）分別為（2.466±0.579）×104、（2.578±0.452）×104、（3.461±0.679）×104個/mL，供試菌株在室內(nèi)對南瓜實蠅各蟲態(tài)均有較強的致病力，在田間具有較理想的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：南瓜實蠅；球孢白僵菌；致病力

中圖分類號：S433.89文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1002-1302（2015）09-0158-02

球孢白僵菌（Beauveryia bassiana）是一種發(fā)展較早、普及面積較大、應(yīng)用較廣的昆蟲病原真菌[1]。它是一類能寄生在昆蟲體表和體內(nèi)的真菌，通過氣孔侵入蟲體，吸收蟲體水分萌發(fā)芽管，隨后分泌酶素溶解體壁幾丁質(zhì)，并不斷生長菌絲，破壞體壁幾丁質(zhì)及上皮細(xì)胞或腸壁細(xì)胞而進入蟲體體腔，繼而破壞血細(xì)胞及其他器官細(xì)胞，最后菌絲穿出體壁，使蟲身長滿菌絲而死亡[2]。南瓜實蠅（Bactrocera tau）是一種重要的果蔬害蟲，該蟲具有隱蔽性，寄主廣，繁殖力強，適應(yīng)性極強和危害嚴(yán)重等特點。它以幼蟲駐入成熟的果實中產(chǎn)生危害，導(dǎo)致果實腐爛、落果，造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失[3-4]。目前，對南瓜實蠅主要以化學(xué)防治為主，對環(huán)境造成較大的污染；隨著人們環(huán)保意識的增強和對蟲生真菌研究的深入，利用蟲生真菌防治害蟲越來越受到重視，這也是重要的方法之一[5-7]。目前，國內(nèi)外利用蟲生真菌防治南瓜實蠅的相關(guān)研究較少，本研究利用球孢白僵菌XD0104015菌株對果蔬害蟲南瓜實蠅的各蟲態(tài)進行室內(nèi)致病力測定，以期為使用昆蟲病原真菌進行生物防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株來源供試球孢白僵菌XD0104015菌株保存于紅河學(xué)院農(nóng)學(xué)系農(nóng)業(yè)害蟲綜合防治實驗室。

1.1.2供試蟲源室內(nèi)人工飼養(yǎng)，建立南瓜實蠅種群。

1.2方法

1.2.1分生孢子液的制備將復(fù)壯、擴繁后的球孢白僵菌XD0104015用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)后，將其分生孢子洗落后用無菌水過濾。用血球計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)，計算出原孢子液濃度，稀釋成試驗所需的濃度梯度。

1.2.2球孢白僵菌對南瓜實蠅致病力測定設(shè)3.0×104～3.0×108個/mL 5個濃度，并用無菌水加0.05%吐溫-80作為對照，每個濃度3個重復(fù)，每個重復(fù)30頭蟲，接種后分別供給飼料，置于溫度為26 ℃、相對濕度為85%的人工氣候箱中培養(yǎng)，連續(xù)觀察9 d，每天定時記錄成蟲死亡數(shù)，并將死亡的蟲體挑出保濕培養(yǎng)，觀察是否為真菌感染致死。

成蟲采用噴霧法接種，將成蟲置于2L的塑料瓶內(nèi)，各濃度的孢子液噴于蟲體上；幼蟲和蛹均采用浸漬法接種，將幼蟲和蛹在孢子液中浸30 s進行接種，然后用毛筆將幼蟲挑入裝有飼料的培養(yǎng)皿中，將蛹挑入裝有適量沙子的小瓶中，用帶小孔的紗布封口[8-9]。

1.2.3數(shù)據(jù)分析試驗數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0進行處理[10]。根據(jù)校正死亡率進行概率值轉(zhuǎn)換后，對劑量作線性回歸分析，建立直線回歸模型，從而分別估計致死中濃度LC50、致死中時間LT50、相關(guān)系數(shù)（r）等參數(shù)[11]。相關(guān)計算公式如下：

死亡率=（死亡蟲數(shù)/供試蟲數(shù)）×100%；

校正死亡率=（處理組死亡率-對照組死亡率）/（1-對照死亡率）×100%。

2結(jié)果與分析

2.1球孢白僵菌對南瓜實蠅成蟲的致病力

球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對南瓜實蠅成蟲具有較強的致病力，其中在3.0×108個/mL濃度下的致病力最強，累計到處理9 d的校正死亡率為（90.00±1.92）%對照為5.56%；3.0×104個/mL孢子濃度下的致病力相對最弱，校正死亡率為（62.22±4.01）%。供試菌株對南瓜實蠅成蟲處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低，從（3.775±0617）×108個/mL 降至（2.466±0.579）×104個/mL；在30×104～3.0×108個/mL 5個孢子濃度下，隨孢子濃度的逐漸增大其致死中時間呈現(xiàn)逐漸縮短的趨勢（表1）。

2.2球孢白僵菌對南瓜實蠅幼蟲的致病力

分生孢子液在3.0×108個/mL濃度下對南瓜實蠅幼蟲表1球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對南瓜實蠅成蟲的致死中濃度和致死中時間

致死中濃度回歸致死中時間回歸時間

（d） 回歸方程 相關(guān)系數(shù)致死中濃度

（個/mL）濃度

（個/mL） 回歸方程相關(guān)系數(shù)致死中時間

（d）5y=2.265+0.264x0.972 1（3.775±0.617）×108a3.0×104y=3.857+4.307x0.979 27.862±0.679a6y=1.850+0.244x0.976 2（3.773±0.595）×107b3.0×105y=2.955+3.567x0.940 76.738±0.564b7y=1.521+0.236x0.966 9（2.842±0.493）×106c3.0×106y=2.402+3.065x0.966 46.078±0.531b8y=1.308+0.240x0.973 1（2.887±0.424）×105c3.0×107y=2.156+3.047x0.962 85.135±0.446c9y=0.981+0.223x0.920 3（2.466±0.579）×104d3.0×108y=1.756+2.871x0.971 64.088±0.387e注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。表2、表3同。

致病力最強，處理9 d的校正死亡率為（84.44±2.99）%，對照為6.67%；3.0×104個/mL濃度下對南瓜實蠅幼蟲致病力相對較弱，但其校正死亡率也達到了（52.22±4.01）%；隨時間的推移，供試菌株對南瓜實蠅幼蟲處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低；隨分生孢子液濃度的增加，其致死中時間也逐漸縮短，在3.0×104～3.0×108個/mL孢子濃度下的LT50從（7.550±0.694）d 縮短至（4.575±0.569）d（表2）。表2球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對南瓜實蠅幼蟲的致死中濃度和致死中時間

2.3球孢白僵菌對南瓜實蠅蛹的致病力

南瓜實蠅蛹在接種后3 d出現(xiàn)死亡，9 d死亡率達到最大，在3.0×108個/mL濃度下對南瓜實蠅蛹致病力最強，累計校正死亡率為（80.00±2.95）%，對照為4.44%。供試菌株對南瓜實蠅蛹處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低，最低為（3.461±0.679）×104個/mL；在3.0×104～3.0×108個/mL孢子濃度下的致死中時間呈現(xiàn)逐漸縮短的趨勢，最低為（4.702±0.335）d（表3）。表3球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對南瓜實蠅蛹的致死中濃度

致死中濃度回歸致死中時間回歸時間

（d） 回歸方程 相關(guān)系數(shù)致死中濃度

3結(jié)論與討論

球孢白僵菌XD0104015菌株對南瓜實蠅成蟲、幼蟲、蛹均有較高的致病力，高濃度孢子的致病力明顯高于低濃度。菌株在3.0×108個/mL孢子濃度下對成蟲的致病力最強，處理9 d的累計校正死亡率為（90.00±1.92）%；其次是幼蟲的累計校正死亡率，為（84.44±2.99）%；對蛹的致病力最弱，累計校正死亡率（80.00±2.95）%。由于蛹?xì)さ谋Ｗo導(dǎo)致菌液不能直接接觸蟲體，因此對蛹的致病力相對較差。說明球孢白僵菌XD0104015菌株對南瓜實蠅的致病力表現(xiàn)為成蟲>幼蟲>蛹。

室內(nèi)的致病力測定效果較好，但田間條件復(fù)雜多變，成蟲具有飛翔能力，可以把分生孢子直接噴施在成蟲體表或者噴施在瓜田中瓜葉上經(jīng)氣流傳播黏附于成蟲體表建立寄生關(guān)系，達到防治成蟲目的；針對幼蟲和蛹的防治，可以把球孢白僵菌的孢子液提前噴施在瓜田的土壤中，老熟幼蟲從瓜果里跳到土壤中接觸分生孢子被寄生，蛹體在土壤中能接觸到噴施在土壤中的分生孢子寄生后導(dǎo)致蛹體死亡，同樣可以達到防治南瓜實蠅蛹的目的。在防治南瓜實蠅成蟲時可以利用某種誘集劑與球孢白僵菌XD0104015菌株孢子制劑相結(jié)合。田間實際大面積推廣應(yīng)用還需要進一步研究，以探索最有效噴菌時間和方式，制定并掌握最佳的施用方案以利提高防治效果。

參考文獻：

[1]劉艷梅，楊航宇，張宗舟. 昆蟲病原真菌的種類和致病機理[J]. 天水師范學(xué)院學(xué)報，2009，29（2）：40-43.

[2]王利軍，譚萬忠，羅華東，等. 蟲生真菌及其在害蟲生物控制中的應(yīng)用現(xiàn)狀與展望[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（4）：119-125.

[3]何恒果，李正躍，陳斌，等. 蟲生真菌對害蟲防治的研究與應(yīng)用[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，19（2）：167-173.

[4]安坤鵬，吳保鋒，申科，等. 南瓜實蠅特性及防治技術(shù)的研究進展[J]. 長江蔬菜，2011（20）：7-13.

[5]楊運華，杜開書，石明旺. 蟲生真菌的生物防治研究進展[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2011，39（1）：34-37.

[6]沈萍，范秀溶，李廣武. 微生物實驗[M]. 北京：高等教育出版社，1999：90-91.

[7]滕忠才，張立紅，劉廷輝，等. 小菜蛾高毒力球孢白僵菌菌株抗旱性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（9）：119-121.

[8]袁盛勇，孔瓊，馬艷粉，等. 球孢白僵菌MZ041016菌株對橘小實蠅的毒力測定[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2010，29（2）：152-155.

[9]潘志萍，李敦松，黃少華. 球孢白僵菌對橘小實蠅致病力的測定[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，25（5）：518-519.

[10]賈春生. 利用SPSS軟件計算殺蟲劑的LC50[J]. 昆蟲知識，2006，43（3）：414-417.

[11]袁志發(fā)，盧恩雙，郭滿才，等. 毒力測定的統(tǒng)計分析方法研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2003，31（6）：181-183.Md. Kafil Uddin，胡彬，王曉青，等. 北京地區(qū)溫室韭菜地遲眼蕈蚊種群動態(tài)初報[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（9）：160-161.

doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2015.09.049