鄭玲敏　陳航　周澤偉　王雨晶　王凱　魯倩倩　張雨梅

摘要：將飼用膽汁酸按0、60、600、3000mg/kg添加于飼料中喂養(yǎng)Wistar大鼠90d，每周稱(chēng)量大鼠體質(zhì)量與飼料消耗，并在喂養(yǎng)45、90d時(shí)剖檢，分別進(jìn)行血液細(xì)胞學(xué)、血液生化指標(biāo)檢測(cè)，計(jì)算主要臟器系數(shù)并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。結(jié)果表明，大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質(zhì)量增重、臟器系數(shù)、血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)、大體解剖及組織病理學(xué)檢查結(jié)果與對(duì)照組無(wú)顯著差異。中劑量組血液生化指標(biāo)除了喂養(yǎng)45d時(shí)GLU、TG以及喂養(yǎng)90d時(shí)TG稍低于對(duì)照組外，其他指標(biāo)與對(duì)照無(wú)顯著差異。飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時(shí)，對(duì)大鼠喂養(yǎng)90d未觀(guān)察到明顯的有害作用。

關(guān)鍵詞：大鼠；膽汁酸；飼料添加劑；亞慢性毒性；臨床應(yīng)用；安全劑量

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.73 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）05-0222-04

膽汁酸是在肝臟中合成的具有同類(lèi)結(jié)構(gòu)的大分子，是膽汁的主要成分，在促進(jìn)脂類(lèi)消化、膽固醇代謝方面有著極為重要的作用。膽汁酸進(jìn)入小腸后，乳化并水解脂肪為脂肪酸、甘油，并通過(guò)肝腸循環(huán)被重新吸收。膽汁酸可以促進(jìn)膽汁分泌。研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸還是一類(lèi)信號(hào)分子，可介導(dǎo)多種細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)，包括參與鈣動(dòng)員、環(huán)磷酸腺苷合成、蛋白激酶C易位和活性。膽汁酸的TGR5細(xì)胞表面受體廣泛分布于褐色脂肪組織、免疫系統(tǒng)、骨骼肌、神經(jīng)組織、腸內(nèi)膜等眾多組織中，參與能量代謝、炎癥反應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)。膽汁酸對(duì)膽固醇、具有潛在毒性的外源性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的排泄和生物轉(zhuǎn)化具有重要作用。飼料中添加膽汁酸不僅可以活化脂肪酶、促進(jìn)脂肪乳化、提高脂肪在腸道中的消化吸收率，還可以幫助機(jī)體排出有害物質(zhì)、提高動(dòng)物免疫功能、促進(jìn)動(dòng)物攝食、提高餌料效率、降低飼養(yǎng)成本，從而改善動(dòng)物生產(chǎn)性能。筆者通過(guò)大鼠亞慢性試驗(yàn)，考察膽汁酸較長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用時(shí)大鼠是否存在不良反應(yīng)，旨在為膽汁酸作為飼料添加劑的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1.材料與方法

1.1材料

4周齡Wistar大鼠（清潔級(jí)），雌雄各40只，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號(hào)：SYXK（蘇）2012-0029。大鼠飼喂經(jīng)60Co照射的飼料，自由采食、飲水，所飲水為符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)的自來(lái)水，試驗(yàn)前在試驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)5d。飼用膽汁酸呈白色粉末狀，膽汁酸總量>95%，批號(hào)20130428，由某動(dòng)物保健品有限公司提供。

1.2受試物劑量及染毒途經(jīng)

添加飼用膽汁酸于飼料中，經(jīng)飼料加工廠(chǎng)制成藥料，飼喂90d。添加量分為3000、600、60mg/kg高、中、低3個(gè)劑量組；對(duì)照組飼喂大鼠常規(guī)飼料。大鼠隨機(jī)分為4組，每組20只，雌雄各半。

1.3觀(guān)察指標(biāo)

試驗(yàn)期間觀(guān)察大鼠的行為及飲食，每周稱(chēng)量體質(zhì)量、飼料消耗。分別在喂養(yǎng)45、90d時(shí)進(jìn)行大體解剖，每組10只大鼠（雌雄各5只），分別取抗凝血進(jìn)行血液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。取血清樣品進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）等血液生化指標(biāo)的檢測(cè)。稱(chēng)量心、肝、脾、肺、腎、卵巢子宮、睪丸附睪質(zhì)量，計(jì)算臟器系數(shù)。對(duì)肝、腎、脾、肺、十二指腸、睪丸、子宮等主要臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS19.0軟件處理數(shù)據(jù)。

2.結(jié)果與分析

試驗(yàn)期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)飼用膽汁酸試驗(yàn)組大鼠有異常行為及表現(xiàn)，體質(zhì)量、飼料消耗、臟器系數(shù)、血液學(xué)指標(biāo)等見(jiàn)表1至表8。大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質(zhì)量增重、臟器系數(shù)、血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)、大體解剖及組織病理學(xué)檢查結(jié)果與對(duì)照組無(wú)顯著差異。中劑量組血液生化指標(biāo)除了喂養(yǎng)45d時(shí)GLU、TG，喂養(yǎng)90d時(shí)TG稍低于對(duì)照組外，其他指標(biāo)與對(duì)照無(wú)顯著差異。

3.結(jié)論與討論

本研究表明，飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時(shí)，對(duì)大鼠喂養(yǎng)90d未觀(guān)察到明顯的有害作用。如果在60mg/kg推薦水平使用，臨床應(yīng)用應(yīng)該是安全的。亞慢性毒性是指試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來(lái)化合物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)，試驗(yàn)?zāi)康氖怯^(guān)察不同劑量外源物質(zhì)長(zhǎng)期飼喂動(dòng)物產(chǎn)生的毒性作用性質(zhì)及靶器官，并制定安全使用劑量。正常情況下動(dòng)物血液生理生化指標(biāo)維持動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)動(dòng)物受生物、化學(xué)、應(yīng)激等因素影響時(shí)，血液生理生化指標(biāo)就會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化。血液生理生化指標(biāo)是反映外來(lái)物質(zhì)對(duì)機(jī)體毒性作用程度的關(guān)鍵指標(biāo)。本研究表明，中劑量組血液生化指標(biāo)除了喂養(yǎng)45d時(shí)GLU、TG，喂養(yǎng)90d時(shí)TG稍低于對(duì)照組外，其他指標(biāo)與對(duì)照無(wú)顯著差異。膽汁酸中劑量組的GLU、TG數(shù)值均在Wistar大鼠正常生理指標(biāo)范圍內(nèi)。endprint