錢芳，劉志輝，陸超

（南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江蘇南京210029）

高效液相色譜法測定黃蜀葵花總黃酮固體分散體中金絲桃苷含量*

錢芳，劉志輝，陸超

（南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江蘇南京210029）

目的建立測定黃蜀葵花總黃酮固體分散體中金絲桃苷含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Hedera C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相梯度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測波長為360 nm，柱溫為30℃。結(jié)果金絲桃苷的質(zhì)量濃度在1.140 6～72.998μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r=1.000 0），平均加樣回收率為99.01%，RSD為1.94%（n=9）。結(jié)論該方法簡便易行，結(jié)果準確，重復(fù)性好，可用于測定黃蜀葵花總黃酮固體分散體中金絲桃苷的含量。

黃蜀葵花總黃酮；固體分散體；高效液相色譜法；金絲桃苷

黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬黃蜀葵Abelmoschus manihot（L.）Medic的干燥花，主要功效為消腫解毒、清利濕熱，內(nèi)服用于治療水腫淋濁、濕熱壅遏，外用治療水火燙傷、癰疽腫毒［1］。黃酮類化合物為主要活性成分，其中以金絲桃苷、異槲皮苷的含量較高［2-3］。黃蜀葵花黃酮類成分吸收較差［4］，影響療效。將其制成固體分散體，能較好地提高黃酮類化合物的溶解度，從而提高其生物利用度。本試驗中，用高效液相色譜（HPLC）法測定黃蜀葵花總黃酮固體分散體中金絲桃苷的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（G1322A脫氣機，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A VWD檢測器，Agilent ChemStation，美國安捷倫公司）；BP-211D型十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；KQ-1000E型超聲波清洗器（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；101-1A型電熱鼓風干燥箱（江蘇省南通市滬通制藥機械設(shè)備有限公司）；HH-4型數(shù)顯型恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。金絲桃苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111521-201205，供含量測定用）；黃蜀葵花總黃酮固體分散體（批號為150511，150512，150514，本實驗室制備）；液相色譜用試劑為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［1］

色譜柱：Hedera C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，0～35min時（17∶83），35～37min時（30∶70），37～53min時（30∶70），53～55min時（17∶83），55～60min時（17∶83）；檢測波長：360 nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

取金絲桃苷對照品，精密稱定，加甲醇溶解，制成1 mL含20μg的溶液，即得對照品溶液。精密稱取樣品90 mg，置25mL容量瓶中，加甲醇，超聲30min，放冷，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取處方比例的輔料，按供試品溶液制備方法制成空白輔料溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：取2.2項下3種溶液，分別進樣10μL。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜峰相應(yīng)位置上顯相應(yīng)峰，而空白輔料溶液色譜中無此峰，說明輔料對金絲桃苷的含量測定無干擾。金絲桃苷與樣品中其他組分色譜峰可達基線分離，理論板數(shù)按金絲桃苷峰計在10 000以上，分離度大于2.0。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取對照品溶液，用甲醇分別稀釋至質(zhì)量濃度為72.998，36.499，18.249 5，9.124 8，4.562 4，2.281 2，1.140 6μg/mL的溶液，由樣測定。以進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=22.009X-0.9407，r=1.000 0（n=7）。結(jié)果表明，金絲桃苷質(zhì)量濃度在1.140 6～72.998μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，重復(fù)測定6次，計算峰面積。結(jié)果的RSD為1.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h時進樣測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.17%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為150511）樣品約90mg，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，進樣測定，以金絲桃苷含量計算。結(jié)果的RSD為1.01%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為150511）約47mg，共9份，精密稱定，加入金絲桃苷對照品，依法制備供試品溶液，精密吸取10μL，進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 金絲桃苷加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，每批2份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果批號為150511，150512，150514的供試品中，金絲桃苷含量分別為2.57，2.46，2.51mg/g。

3 討論

黃蜀葵花的主要活性成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷含量較高，故以金絲桃苷為含量測定的指標成分。

參考2010年版《中國藥典（一部）》［5］，以乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）為流動相，結(jié)果分離效果不佳。文獻［6-9］報道的金絲桃苷的含量測定方法，試驗中金絲桃苷未能有效分離，且分析時間過長。曾比較乙腈-四氫呋喃-冰醋酸溶液為流動相［10］，四氫呋喃-甲醇-乙腈-冰醋酸溶液為流動相［11］。通過反復(fù)摸索，最后以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，實現(xiàn)了較好的分離效果。

本試驗中采用超聲處理提取樣品，比較了超聲20，30，40min金絲桃苷的提取率，結(jié)果30min與40min提取的得率相同，故確定提取時間為30min。

本試驗中建立的高效液相色譜法簡便易行，結(jié)果準確，重復(fù)性好，能有效控制黃蜀葵花總黃酮固體分散體中金絲桃苷的含量。

［1］劉爽，江蔚新，吳斌.黃蜀葵花化學成分及藥理活性研究進展［J］.中國現(xiàn)代中藥，2010，12（8）：5-9.

［2］劉子修，李燕思，周艷萍，等.黃蜀葵花化學成分與藥動學研究進展［J］.中南藥學，2012，10（11）：839-841.

［3］張元媛，賈曉妮，曹永翔，等.黃蜀葵花化學成分研究［J］.西北藥學雜志，2008，23（2）：80-82.

［4］薛彩福，郭建明，錢大瑋，等.黃葵醇提物中黃酮類成分在體腸吸收研究［J］.藥學學報，2011，46（4）：454-459.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：287.

［6］曹廣尚，楊培民，李芳.HPLC測定貫葉金絲桃滴丸中金絲桃苷含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（7）：67-68.

［7］方慧祥，楊坤芬，馮玉茹.RP-HPLC法測定補腎強身片中金絲桃苷的含量［J］.中國藥房，2015，26（3）：413-415.

［8］田元春，劉倩，韋水林，等.HPLC測定參杞強精膠囊中金絲桃苷含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（14）：149-151.

［9］崔慧芳，常欣.高效液相色譜法測定月季花中金絲桃苷含量［J］.中國藥業(yè)，2013，22（11）：4-5.

［10］劉麗娜，李勇軍，何迅，等.高效液相色譜法測定葒葉心通軟膠囊中金絲桃苷含量［J］.中國藥業(yè)，2008，17（10）：25-26.

［11］李標，張鍇，曹文丁，等.高效液相色譜法測定山楂葉中金絲桃苷的含量［J］.中國藥業(yè)，2003，12（12）：37-38.

Determination of Hyperin in Solid Dispersion of Abelmoschus Manihot Total Flavones by HPLC

Qian Fang，Liu Zhihui，Lu Chao
（Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu，China 210029）

Objective To establish a method for the determination of hyperin in solid dispersion of Abelmoschus Manihot total flavones by HPLC.Methods The Hedera C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）was used，the mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution with gradient elution.The flow rate was 1.0 mL/min，the detection wavelength was 360 nm，and column temperature was 30℃.Results The linear range of hyperin was 1.140 6-72.998μg/mL（r=1.000 0），the average recovery rate was 99.01%，and RSD was 1.94%（n=9）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable.It can be used for the content determination of hyperin in solid dispersion of Abelmoschus Manihot total flavones.

Abelmoschus Manihot total flavones；solid dispersion；HPLC；hyperin

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0112-03

錢芳（1975-），副主任中藥師，主要從事中藥制劑和新藥研究工作，（電子信箱）qfss1024@126.com。

2015-06-23）

*江蘇省中醫(yī)藥局資助項目，項目編號：LZ13063。