李正甫，周慶國(guó)，寸誠(chéng)芬，李 琳，白祖留

(1.保山市畜牧工作站，云南 保山 678000;2.通?？h四街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 通海 652702;3.騰沖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 騰沖 679100;4.江川縣畜牧獸醫(yī)局，云南 江川 652600;5.昆明錦農(nóng)堂農(nóng)牧科技有限公司，云南 昆明 650000)

雞傳染性鼻炎(Infectious Coryza，IC)是由副雞嗜血桿菌(Haemophilus paragallinarum，Hpg)引起雞的急性呼吸系統(tǒng)疾病。該病主要癥狀為鼻腔與鼻竇發(fā)炎、流鼻涕、臉部腫脹和打噴嚏?？梢鸬半u產(chǎn)蛋量下降，育成雞生長(zhǎng)發(fā)育受阻和淘汰率增加，肉雞肉質(zhì)下降。本病在世界各地均有流行，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。在我國(guó)，雞傳染性鼻炎的發(fā)病率可達(dá)20% ～50%，死亡率可達(dá)5% ～20%[2]。近年來(lái)，雞傳染性鼻炎在我國(guó)各地時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，因此，對(duì)該病進(jìn)行快速診治具有重要意義。

1 發(fā)病情況

2014年6月，云南省保山市某養(yǎng)雞場(chǎng)共飼養(yǎng)海蘭褐殼蛋雞9 000只，其中2幢相鄰雞舍的3 200羽產(chǎn)蛋雞中出現(xiàn)了一種以流鼻涕、打噴嚏、顏面腫脹、呼吸困難為特征的呼吸道疾病，其發(fā)病率約25%，死亡率約10%，產(chǎn)蛋率下降約20%，給該雞場(chǎng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為查明病因，對(duì)該病進(jìn)行科學(xué)防控，筆者對(duì)發(fā)病雞和病死雞進(jìn)行病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷。

2 剖檢變化

對(duì)12只病死雞進(jìn)行剖檢，可見(jiàn)大部分雞鼻道內(nèi)有大量透明或淺黃色黏液，大部分雞鼻竇內(nèi)有大量干酪樣物質(zhì)，有的雞鼻竇內(nèi)有大量淺黃色膿性黏液，氣管內(nèi)也有大量黏液和少量小顆粒干酪樣物質(zhì)，少數(shù)雞可見(jiàn)肺部充血、出血。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

將鼻分泌物、鼻竇內(nèi)的干酪樣物質(zhì)劃線接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，再將金黃色葡萄球菌作井字劃線接種于上述培養(yǎng)基，放置于蠟缸中37℃培養(yǎng)24 h后觀察培養(yǎng)結(jié)果，可見(jiàn)在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出大量針尖大小透明菌落，菌落凸起、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊，且越靠近葡萄球菌菌苔的菌落越大(直徑約0.5mm)，越遠(yuǎn)離葡萄球菌菌苔的菌落越小，再遠(yuǎn)離葡萄球菌菌苔幾乎無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，符合副雞嗜血桿菌培養(yǎng)的典型特征——“衛(wèi)星現(xiàn)象”。將上述透明菌落收獲于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，命名為BS001細(xì)菌株，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2 細(xì)菌染色鏡檢

挑取上述針尖大小透明菌落涂布于載玻片上，酒精燈火焰固定后，按照細(xì)菌革蘭氏染色標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行革蘭氏染色，再將染色好的細(xì)菌涂片用顯微鏡油鏡鏡檢，鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性小桿菌，也有較長(zhǎng)的桿菌，呈明顯的多形態(tài)桿菌(見(jiàn)圖1)，分離株BS001細(xì)菌形態(tài)與副雞嗜血桿菌形態(tài)相符。

圖1 分離株BS001革蘭氏染色形態(tài)(放大倍數(shù)1 000×)

3.3 細(xì)菌生化鑒定

將分離株進(jìn)行生化鑒定，方法如下:①氧化酶試驗(yàn):用接種環(huán)挑取上述細(xì)小菌落涂布于氧化酶試紙上，氧化酶試紙變紅為陽(yáng)性，不變色為陰性。②過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn):將3%雙氧水滴加到上述細(xì)小菌落上，有氣泡產(chǎn)生為陽(yáng)性，沒(méi)有氣泡產(chǎn)生為陰性。③其它生化試驗(yàn):將上述4℃保存的營(yíng)養(yǎng)肉湯細(xì)菌懸液，接種于葡萄糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、硝酸鹽還原、H2S試驗(yàn)、MR試驗(yàn)和VP試驗(yàn)共9種生化鑒定管，置5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48 h，觀察細(xì)菌的生化特性，按照細(xì)菌生化微量鑒定管使用說(shuō)明書(shū)判定生化結(jié)果。生化試驗(yàn)結(jié)果表明分離株BS001的氧化酶、過(guò)氧化氫酶陰性;發(fā)酵葡萄糖、半乳糖和蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;發(fā)酵甘露糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖、麥芽糖;H2S、MR試驗(yàn)、VP試驗(yàn)陰性。其生化鑒定結(jié)果與參考文獻(xiàn)[1]中的副雞嗜血桿菌生化特征相符合，將分離株BS001生化鑒定為副雞嗜血桿菌。

4 診斷結(jié)果

結(jié)合該病的主要臨床癥狀(鼻腔、鼻竇發(fā)炎、流鼻涕、臉部腫脹和打噴嚏)、主要病理變化(鼻腔內(nèi)有大量黏液、鼻竇內(nèi)有干酪樣物質(zhì))以及細(xì)菌分離鑒定的結(jié)果(分離到一株副雞嗜血桿菌BS001)，將該起病例確診為雞傳染性鼻炎。

5 治療措施

先用復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉進(jìn)行治療，投藥方式為飲水，用藥劑量按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。具體方法如下:用100 g復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉兌水100 kg，飲水給藥，每天2次，連用5 d，病情得到有效控制。然后再用天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的雞傳染性鼻炎二價(jià)滅活疫苗(A型221株+C型H－18株)進(jìn)行全群雞緊急免疫接種。本次治療選用藥物治療加疫苗免疫注射的綜合防制措施，取得了很好的治療效果。

6 小結(jié)

雞傳染性鼻炎是由副雞嗜血桿菌引起雞的一種重要傳染病，該病一年四季均可發(fā)生，但在氣候寒冷潮濕、雞群密度過(guò)大、通風(fēng)不良條件下多發(fā)。該病主要發(fā)生于2月齡以上的青年雞和產(chǎn)蛋雞。該病在診斷過(guò)程中容易與禽流感、新城疫等其它呼吸道疾病相互混淆，應(yīng)注意鑒別診斷[3]。因此，病原分離鑒定就顯得尤為重要。本研究對(duì)云南保山一起疑似蛋雞傳染性鼻炎的病例進(jìn)行病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌分離鑒定綜合診斷，分離到一株副雞嗜血桿菌BS001，這是云南省繼李富祥等[4]2012年首次報(bào)道副雞嗜血桿菌分離后再次分離到副雞嗜血桿菌，確診該起病例為雞傳染性鼻炎，細(xì)菌分離鑒定仍然可作為雞傳染性鼻炎診斷的標(biāo)準(zhǔn)。該次臨床診斷結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷的綜合診斷方法切實(shí)、可靠，值得推廣應(yīng)用。

在該起病例的治療過(guò)程中，首先采用雞場(chǎng)消毒，再用復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉治療，病情得到很好的控制。在藥物治療方面，也有用中藥治療該病的成功案例[5]，筆者認(rèn)為，中草藥治療雞傳染性鼻炎的方法也值得驗(yàn)證。由于該雞場(chǎng)雞群未進(jìn)行過(guò)雞傳染性鼻炎疫苗免疫，筆者在藥物治療后再用雞傳染性鼻炎二價(jià)滅活疫苗(A型221株+C型H－18株)進(jìn)行全群雞緊急免疫接種，取得了很好的治療效果。由于該病的發(fā)生受氣候條件、氣溫突變、雞群飼養(yǎng)密度、通風(fēng)條件等因素的影響，所以加強(qiáng)消毒、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和嚴(yán)格的防疫是防治本病的主要措施。

[1]Y.M.saif.禽病學(xué)(第十一版)[M].蘇敬良，高福，索勛主譯，北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005:784－798.

[2]Chen X，Zhang P，Blackall PJ，et al.Characterization of Haemophilus paragallinarum isolates from China[J].Avian Dis，1993，37(2):574 － 576.

[3]張剛，楊靜媛.蛋雞傳染性鼻炎、禽流感和新城疫的鑒別診斷[J].云南畜牧獸醫(yī)，2012(4):16－17.

[4]李富祥，李華春，許琳，等.副雞嗜血桿菌的分離鑒定及16SrRNA序列分析[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2012，20(4):32 －38.

[5]劉錦妮.蛋雞傳染性鼻炎中藥診治[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2013(2):65－66.