賈青輝,李蘊玉,李佩國，張文香，張香齋,張艷英，張清波

（1.河北科技師范學(xué)院動物科技學(xué)院，河北秦皇島066600；2.石家莊九鼎藥業(yè)有限公司，河北石家莊052160）

耐藥蟲株的出現(xiàn)和藥物在肉蛋中的殘留是用化學(xué)藥物防治雞球蟲病需要解決的兩大難題。因中藥具有毒副作用小和抑殺球蟲、增強機體免疫功能及促進生長等優(yōu)點，尤其是雞球蟲對其不易產(chǎn)生耐藥性和無殘留，中藥成為替代化學(xué)抗球蟲藥的主要途徑之一。本試驗根據(jù)中醫(yī)理論、辯證理論和雞球蟲發(fā)病特點，組成中藥復(fù)方，應(yīng)用中藥口服液制作工藝制成了球必妥，防治球蟲病效果良好。為了評價球必妥的安全性，為臨床用藥提供保證，以及為今后新藥的開發(fā)和利用提供科學(xué)的依據(jù)，對雞進行了亞慢性毒性試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗用藥

球必妥口服液：青篙（25%）、苦參（15%）、大薊（10%）、仙鶴草（15%）、地榆（10%）、白頭翁（15%）、黃芪（10%）。依據(jù)中藥口服液制作工藝制作而成1.00 克/毫升的母液備用。

1.2 試驗動物分組

選擇體重相近的14日齡蛋公雛90 只，隨機分成3 組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)10。其中第I組為空白對照組；第Ⅱ組為飲用質(zhì)量濃度為45 克/升的球必妥口服液；第Ⅲ組為飲用質(zhì)量濃度為90克/升的球必妥口服液。于分組后當(dāng)天開始用藥，連續(xù)用藥30 天。

1.3 臨床觀察

試驗期間逐日觀察并記錄各組雞的采食、飲水、排糞、羽毛的光澤度等。試驗結(jié)束時空腹稱重，統(tǒng)計并比較體重增長情況。

1.4 血液生化指標(biāo)測定

于試驗開始前和試驗結(jié)束時每組隨機抽取5只，心臟采血并分離血清，在-20℃下保存，用于血液生化指標(biāo)測定。其中血清尿酸（UA）：酶比色法；血清肌酐（Cre）：苦味酸法；血清直接膽紅素（T.Bi1i）與血清總膽紅素（D.Bi1i）：重氮法；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）與血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）：連續(xù)監(jiān)測法；血清總蛋白含量（TP）：雙縮脲法；血清白蛋白（ALB）：溴甲酚綠法；血清球蛋白（GLB）：差減法（總蛋白-白蛋白）。

1.5 免疫器官指數(shù)及病理學(xué)觀察

在試驗結(jié)束時每組隨機抽取5 只剖殺，觀察并記錄心、肝、脾、肺、腎、盲腸、法氏囊、胸腺等組織器官的肉眼變化。取胸腺、法氏囊、脾臟分離周圍組織后稱重，計算免疫器官指數(shù)：以免疫器官鮮重（克）占每千克體重（千克）表示。

1.6 統(tǒng)計處理

使用Exce1 2003 和SPASS 11.5 軟件包，以單變量方差分析(one-way ANOVA)進行統(tǒng)計，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＞0.05 為差異不顯著，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)

表1 各組增重和料重比

試驗期間雛雞飲用球必妥口服液后其精神狀況、采食、飲水、排糞等均無異常表現(xiàn)，體態(tài)發(fā)育良好，無任何中毒癥狀，存活率為100%。

2.2 增重及料肉比情況

從表1 可見，在整個試驗期內(nèi)，Ⅱ組增重最高，達244.31 克，料重比最低為2.49，與Ⅰ組相比，其增重顯著提高了10.59%（P＜0.05），料重比顯著降低了11.70%（P＜0.05），并于第Ⅲ組差異不顯著。

表2 各組不同時間血清生化指標(biāo)變化

表3 各組免疫器官的重量（克）

表4 各組免疫器官指數(shù)（克/千克）

2.3 血清生化指標(biāo)變化

從表2 可見，Ⅱ組、Ⅲ組GPT、GOT 活力、肌酐、尿酸、總蛋白、白蛋白、球蛋白、T.Bi1i 和D.Bi1i含量與Ⅰ組比較無明顯差異（P＞0.05）。

2.4 免疫器官重量及免疫器官指數(shù)變化

剖殺觀察，與空白對照組比較，球必妥口服液組雞的心、肝、腎、脾等主要器官的形態(tài)、質(zhì)地、色澤均無異常變化。

從表3、表4 可見，各組間胸腺、法氏囊、脾臟的重量和指數(shù)均無差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

3.1 對雛雞臨床癥狀和病理組織學(xué)的影響

本試驗將抗球蟲中藥制劑以預(yù)防量和2 倍治療劑量用于飲水，連續(xù)飲用30 天，對雞的精神、飲食和生長等均無明顯影響。病理剖檢及病理組織學(xué)觀察肝、腎、心等主要器官，未出現(xiàn)異常的病理變化。試驗結(jié)果表明長期使用該中藥制劑沒有引起機體出現(xiàn)中毒反應(yīng)，機體組織器官未受到明顯損傷，說明該中藥制劑毒副作用比較低。

3.2 對雛雞生長速度的影響

雞生長受外源和內(nèi)源兩類因子的影響，內(nèi)源因子與遺傳及生理狀況相關(guān)，外源因子源于環(huán)境，又稱環(huán)境因子，如食物、溫濕度等。本試驗是在各種條件相對穩(wěn)定的條件下進行的。試驗結(jié)果表明，在試驗結(jié)束時球必妥口服液中、高劑量組的平均增重顯著高于空白對照組，料重比雖然與對照組比較差異不顯著，但分別降低了11.70%和10.28%。說明球必妥口服液具有促進機體生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用。

3.3 對雛雞免疫器官重量及免疫器官指數(shù)的影響

本試驗測定了雛雞免疫器官重量及免疫器官指數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)飲用球必妥口服液的2 個試驗組的免疫器官重量及免疫器官指數(shù)雖然與對照組比較差異不顯著，但均高于對照組。胸腺、脾臟和法氏囊是機體重要的免疫器官，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱。本試驗進一步證實了抗球蟲中藥能促進雛雞免疫器官的發(fā)育，使機體免疫功能增強。

3.4 對雛雞腎功能的影響

尿酸是人、猿和禽類嘌吟代謝的終產(chǎn)物，屬核酸及蛋白質(zhì)代謝的一部分。尿酸在血液中的含量既體現(xiàn)畜禽肝腎功能是否正常，也體現(xiàn)了細(xì)胞核酸和蛋白質(zhì)代謝狀況是否正常。當(dāng)尿酸含量增高時，說明肝腎功能異常。

肌酐是肌肉肌酸和磷酸的代謝產(chǎn)物，其數(shù)值不受食物中蛋白質(zhì)含量、蛋白質(zhì)代謝以及年齡、性別或運動的影響。經(jīng)腎小球濾出，可作為檢查腎小球濾過能力是否正常的診斷指標(biāo)。

本試驗中藥組血清肌酐含量和尿酸含量與空白對照組比較差異不顯著，反映腎小球濾過率正常，腎臟未受損傷。

3.5 對雛雞肝功能的影響

肝臟具有旺盛的代謝功能，含有豐富的酶類。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)是廣泛存在于動物組織細(xì)胞線粒體內(nèi)的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，在機體蛋白質(zhì)代謝中起著重要的作用。正常時，谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于組織細(xì)胞內(nèi)，以肝細(xì)胞含量最多，心肌細(xì)胞中含量其次，只有極少量釋放血中，所以血清中此酶活力很低。當(dāng)肝臟、心肌病變、細(xì)胞壞死或通透性增加時，細(xì)胞內(nèi)各種酶釋放出來，使血清中此酶活性升高。谷草轉(zhuǎn)氨酶在肝細(xì)胞內(nèi)含有較高的濃度，只要肝臟發(fā)生炎癥、壞死、中毒等損害，谷草轉(zhuǎn)氨酶就會由肝細(xì)胞釋放到血中，使這種酶在血清中的活性升高。因此，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶增高的意義較大，其增高程度可反映肝細(xì)胞損害和壞死的程度。

膽紅素分為直接膽紅素和間接膽紅素，二者之和為總膽紅素。膽紅素主要在肝臟中生成，儲存在膽囊中。正常時，肝細(xì)胞能夠清除肝細(xì)胞所產(chǎn)生的膽紅素。當(dāng)肝臟受到損傷時肝細(xì)胞產(chǎn)生的直接膽紅素和間接膽紅素增加，超過肝細(xì)胞能夠清除率，而滯留在血液中，因而使血清中膽紅素濃度升高。

蛋白質(zhì)是血清的主要成分，血清中白蛋白與球蛋白之和即為血清總蛋白，血清總蛋白大部分由肝臟合成，除作為營養(yǎng)物的載體外，還維持血漿滲透壓，同時又是機體蛋白質(zhì)的一個來源，用于修補組織和提供能量，當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)病變，合成功能降低，影響蛋白質(zhì)的質(zhì)與量。血清球蛋白是一組成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)組合的總稱，它包括多種酶類、激素、抗體等特殊蛋白質(zhì)。球蛋白來源于漿細(xì)胞的分泌，反映機體的抵抗力。血清白蛋白系由肝實質(zhì)細(xì)胞合成。檢查血清總蛋白、白蛋白、球蛋白可作為反映肝功能的指標(biāo)。

本試驗飲用球必妥口服液的2 組血清中的GPT、GOT 活性以及血清總膽紅素、直接膽紅素、總蛋白、白蛋白、球蛋白含量與對照組比較無顯著差異，反映肝細(xì)胞清除膽紅素的功能正常，肝臟合成蛋白質(zhì)的功能正常。試驗結(jié)果表明，長期使用球必妥口服液肝臟功能正常未受到損傷，進一步證實球必妥口服液是一種低毒或無毒副作用，具有多種生理活性，并能調(diào)節(jié)機體內(nèi)環(huán)境平衡的有效藥物。

（略）