顧冬花（青海省大通縣樺林畜牧獸醫(yī)站810100）

部分規(guī)模化豬場種豬豬瘟抗體監(jiān)測及免疫效果分析

顧冬花（青海省大通縣樺林畜牧獸醫(yī)站810100）

為了解規(guī)模豬場種豬群豬瘟免疫抗體情況，評價豬瘟疫苗加強免疫的效果，對6個規(guī)模豬場的種豬群進行了豬瘟抗體檢測、補苗、再檢測。結(jié)果表明種豬群通過科學的增加豬瘟疫苗接種能明顯提升豬瘟抗體水平。但6個豬場的種豬群中均有少數(shù)種豬通過加免接種疫苗仍不能產(chǎn)生較好的豬瘟抗體，不具備對豬瘟病毒的抵抗能力，規(guī)模豬場應該對這些種豬進行淘汰，減少豬瘟病毒在豬場傳播的可能性。

豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬一種急性、烈性、接觸性傳染病，主要通過呼吸道和消化道傳染，臨床上以稽留高熱、皮膚和黏膜出現(xiàn)大量出血點為主要特征。豬瘟被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的動物疫病，我國列為一類動物疫病，也是目前危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。多年來，我國一直采取預防為主的方針，大大降低了豬瘟的感染率和發(fā)病率。但隨著集約化程度的提高和養(yǎng)豬規(guī)模的擴大，在疫苗接種范圍越來越大、防疫密度越來越高、接種劑量越來越大的情況下，該病出現(xiàn)了隱性感染、胎盤感染、新生仔豬先天性感染等形式。研究發(fā)現(xiàn)，豬場帶毒豬持續(xù)排毒，是豬瘟在豬場持續(xù)發(fā)生的根源[1～4]。另外，免疫抑制性因素，如豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒(PCV-2)及日糧中霉菌毒素等，也會嚴重損害豬的免疫系統(tǒng)，導致免疫失敗[5]。研究表明，受PRRSV感染的無特定病原(SPF)的豬接種豬瘟疫苗，豬瘟抗體水平明顯低于無感染PRRSV的對照豬[6,7]。為了解規(guī)模豬場種豬群豬瘟抗體情況，確保豬瘟疫苗免疫效果，選取6個不同規(guī)模豬場的種豬，逐頭采血，分離血清，由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的豬瘟正向間接血凝試驗抗體檢測試劑盒測定抗體水平，對豬瘟抗體不合格的種豬加強接種1次豬瘟疫苗，3周后再檢測豬瘟抗體，對第2次豬瘟抗體檢測不合格的種豬進行淘汰，實行豬場豬瘟凈化計劃。

1　材料與方法

1.1血清來源與數(shù)量采集6個不同規(guī)模豬場(編號1-6)種豬血樣共158份，按常規(guī)方法分離血清并置-20℃冰箱保存，待測。

1.2檢測試劑與儀器豬瘟正向間接血凝診斷抗原，陽性、陰性血清，稀釋液，均在有效期內(nèi)，由中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所提供。單多道移液器、生化培養(yǎng)箱、離心機、振蕩器。

1.3操作步驟與判定標準檢測方法采用正向間接血凝試驗，根據(jù)《豬瘟診斷技術(shù)規(guī)程》(NY/SY156-2000)操作。待檢血清放在59℃水浴鍋中滅能30min；豬瘟抗體檢測試劑盒恢復到室溫，在96孔血凝板(110V型)中每孔加入50μl稀釋液；取50μl滅能待檢血清、陽性血清、陰性血清分別加入第1孔作1:1稀釋后，混勻3～4次，吸出50μl加入第2孔再混勻3～4次，依次倍比稀釋至11孔，然后吸出50μl棄去。稀釋液對照孔不加樣；然后各孔均加25μl血凝抗原，振蕩混勻，蓋上玻板，室溫或37℃下靜置1.5～2.0h后觀察結(jié)果。

1.4結(jié)果判定在對照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，記錄各孔凝集情況，用“-、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”表示。以呈現(xiàn)＋＋血凝反應的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價。當陽性血清抗體效價≥1:256、陰性血清抗體效價≤1:16、稀釋液對照孔無自凝現(xiàn)象時，試驗成立。接種口蹄疫O型疫苗的豬免疫抗體效價≥1：128為免疫合格。

1.5加強免疫試驗對豬瘟抗體檢測不合格的所有種豬，避免所有人為因素的情況下，加強注射1次豬瘟疫苗，3周后采血，按常規(guī)方法分離血清，用同樣的方法再次檢測豬瘟抗體。

2　結(jié)果與分析

2.1不同規(guī)模豬場種豬群豬瘟抗體結(jié)果見表1。

表1　不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表1結(jié)果顯示，6個規(guī)?；i場種豬的豬瘟抗體合格率各不相同，但均高于70% 。其中1場的種豬豬瘟抗體合格率最高(85.42%)，5場的最低(72.22%)，158份檢測樣本中，免疫抗體合格124份，不合格34份，抗體平均合格率為78.48% ，抗體平均不合格率為21.51%，1、2、3、4場的種豬豬瘟抗體合格率均高于78.48%，5、6場的種豬豬瘟抗體合格率低于平均合格率。這表明，不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體的整齊度存在差異。對豬瘟抗體不合格種豬加強免疫后再次進行抗體檢測，檢測結(jié)果見表2。

2.2豬瘟抗體不合格種豬加強免疫后豬瘟抗體

表2　豬瘟抗體不合格種豬加強免疫后豬瘟抗體檢測結(jié)果

表2結(jié)果顯示，豬瘟抗體不合格種豬加強免疫后各場種豬豬瘟抗體合格率均有不同程度的上升，1～6場的合格率分別上升了6.25個百分點、6.67個百分點、12個百分點、4.55個百分點、11.11個百分點、6.67個百分點。加強免疫后，免疫抗體合格140份，不合格18份，平均合格率為88.60%，平均不合格率為11.39%，平均合格率上升了10.12個百分點，平均不合格率下降了10.12個百分點。其中以3場抗體合格率上升幅度最大，上升了12個百分點。結(jié)果說明，規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體合格率不高存在多方面的原因，通過加強免疫可以適當提高規(guī)?；B(yǎng)殖場豬瘟抗體的合格率，為科學合理的制定豬場種豬淘汰計劃奠定了基礎。

3　討論

（1）到目前為止，加強免疫接種仍是對豬瘟預防與控制最有效的措施，而通過對免疫豬群進行抗體水平監(jiān)測，及時掌握豬群免疫抗體水平，了解免疫狀況，對控制疫病起著至關(guān)重要的作用。此次調(diào)查采用正向間接血凝試驗，檢測規(guī)模豬場種豬豬瘟免疫后能否產(chǎn)生抗體或抗體滴度能否達到免疫保護，以及加強免疫后豬瘟抗體的變化情況，從檢測結(jié)果可以看出，不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體合格率均存在差異，說明規(guī)?；i場的豬瘟抗體相對不太穩(wěn)定，抗體滴度高低不齊，經(jīng)加強免疫可以適當提高規(guī)模化豬場豬瘟抗體的合格率。（2）規(guī)?；i場的穩(wěn)定生產(chǎn)與持續(xù)發(fā)展是以種豬的健康穩(wěn)定為前提，豬場種豬豬瘟控制的好壞直接關(guān)系到整個豬群的健康狀況。種豬群攜帶豬瘟病毒或機體免疫受到抑制，豬瘟抗體水平低下，會造成仔豬先天性感染豬瘟或新生仔豬得不到母源抗體的充分保護，很容易感染包括豬瘟在內(nèi)的各種病原，成為豬場的隱患[1]。免疫注射操作方法不規(guī)范、劑量不足等，也會直接影響豬瘟疫苗的免疫效果。因此，在臨床上，通過嚴格檢測每一頭種豬的豬瘟抗體水平，評估其豬瘟免疫保護力。淘汰加強免疫后豬瘟抗體水平不合格的種豬，從源頭上降低豬瘟感染風險，是預防、控制、消滅、凈化豬瘟最有效的手段之一。（3）免疫抗體檢測是科學掌握疫苗免疫接種后抗體產(chǎn)生和消長變化的有效方法之一[9]。通過此次檢測、補苗、再檢測的過程分析豬場種豬豬瘟抗體不合格的原因可能有：①疫苗免疫操作不當存在打“飛針”現(xiàn)象，造成抗原量不足以誘導豬體產(chǎn)生免疫應答反應[6]；②疫苗質(zhì)量和冷鏈存在問題，疫苗保存、運輸不當造成疫苗質(zhì)量受到影響，抗原性能降低[8]；③某些豬體本身免疫功能差，存在免疫抑制性疾病(如混合感染PRRSV、PRV、PCV或飼喂發(fā)霉飼料等)或豬在免疫接種前后曾使用黃胺類等免疫抑制藥物[4]，造成豬體免疫功能受損而失去對疫苗的免疫應答能力[7]；④疫苗免疫沒有根據(jù)豬只大小選擇合適的針頭，大豬使用短針頭將疫苗注入脂肪疫苗未產(chǎn)生免疫應答；⑤重視程度不夠，對疫病的危害程度認識不夠深刻，思想上沒有引起足夠的重視。再加上防疫管理中的失誤，造成種豬漏防，成為免疫空白豬。為了排除人為和疫苗自身的因素，針對首次檢測豬瘟抗體不合格的所有種豬，加強接種1次豬瘟疫苗再檢測，結(jié)果顯示不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體合格率均有不同程度的提高，但每個豬場仍存在一定比例的豬瘟抗體不合格的種豬，認為可能屬于種豬自身因素(豬瘟帶毒或免疫抑制)。由于免疫受抑制的種豬，本身沒有足夠的豬瘟抗體，母乳中的母源抗體不足以保護其后代，新生仔豬免疫保護不足而成為易感豬。所以應淘汰豬瘟抗體不合格種豬，才能保證整個豬群的健康。

3　對策

在日常生產(chǎn)中經(jīng)常開展種豬豬瘟抗體檢測，摸清種豬群抗體水平狀況，分析原因，采取相應措施：（1）加強免疫管理，適時免疫接種，防止種豬漏防，在防疫注射時注意種豬的保定，注射部位要準確，確保免疫劑量。（2）強化疫苗的冷鏈運輸及保存，做好疫苗冷藏，稀釋后分不同氣溫不同要求在規(guī)定時間內(nèi)用完。（3）及時淘汰機體免疫功能有缺陷的種豬，特別是多次免疫仍達不到免疫要求的種豬，可借鑒湯薇等[10]對低抗體水平母豬的淘汰方法，以消滅傳染源。（4）強化消毒，凈化環(huán)境，做好引進種豬的隔離、檢測和補防工作，防止外來疫源傳入?？傊畯脑搭^抓起，及時補免，將疫苗接種與免疫監(jiān)測有機結(jié)合起來，以免疫監(jiān)測制定合理的免疫程序[4]，達到最佳免疫效果，及時淘汰不合格種豬，確保整個豬群的健康。

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