龍海波++孫燕芳++曾凡云++白成

摘 要 通過室內(nèi)接種方法測定土壤中接種象耳豆根結(jié)線蟲（Meloidogyne enterolobii）二齡幼蟲不同初始密度（0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8和16條/cm3）對黃瓜生長的影響。研究結(jié)果表明，黃瓜受損程度與象耳豆根結(jié)線蟲初始接種密度呈正相關(guān)，隨著接種密度的增加，形成的根結(jié)指數(shù)不斷提高，而黃瓜植株高度和苗鮮重相比對照均表現(xiàn)為下降，即發(fā)病程度逐漸加重。當(dāng)土壤中象耳豆根結(jié)線蟲二齡幼蟲的初始接種密度為0.25條/cm3，即可對黃瓜的株高和植株鮮重產(chǎn)生顯著危害，初始密度為8條/cm3處理，則可導(dǎo)致黃瓜植株死亡。該研究結(jié)果可為制定象耳豆根結(jié)線蟲的防治指標(biāo)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 象耳豆根結(jié)線蟲 ；黃瓜 ；初始密度 ；病情指數(shù)

分類號 S432.45

Effect of Initial Population Density of Meloidogyne enterolobii

on Cucumber Growth in Greenhouse

LONG Haibo SUN Yanfang ZENG Fanyun BAI Cheng

（Environment and Plant Protection Institute /

Ministry of Agriculture Key Laboratory of Pests Comprehensive Governance for Tropical crops /

Hainan Key Laboratory for Monitoring and Control of Tropical Agricultural Pests /

Hainan Engineering Research Center for Biological Control of Tropical Crops Diseases and Insect Pests， CATAS， Haikou， Hainan 571101， China）

Abstract The effects of initial population levels of Meloidogyne enterolobii [0， 0.125， 0.25， 0.5， 1， 2， 4， 8 and 16 second stage juvenlies （J2） per cm3 of soil] on cucumber were investigated with pot planting in a greenhouse. The results showed that there is a positive relationship between the initial population density of the nematode and the extent of damage it cause to cucumber. Both shoot height and shoot fresh weights were decreased as increasing initial densities of the nematodes， but the disease index was increased. When the initial inculcation density of M. eneterolobii reached to 0.25 J2 per cm3 of soil， either cucumber shoot height or fresh weight was reduced significantly. Moreover， inoculation of cucumber with eight J2 of M. eneterolobii could lead to plant dead. These results provide a possibility to estimate the economic threshold， which is needed for evaluation efficacy of nematode control.

Keywords Meloidogyne enterolobii ； cucumber ； initial density ； disease index

黃瓜（Cucumis sativus L.）是我國廣泛栽培種植的蔬菜作物，種植面積占蔬菜總面積的10%左右[1]。近年來，隨著復(fù)種指數(shù)的提高以及大棚設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展，黃瓜根結(jié)線蟲病害普遍發(fā)生且逐年加重，一般可能減產(chǎn)20%～30%，嚴(yán)重時達(dá)到50%以上，甚至絕產(chǎn)[2]。為害黃瓜的根結(jié)線蟲病原種主要有南方根結(jié)線蟲（M. incognita）、爪哇根結(jié)線蟲（M. javanica）、花生根結(jié)線蟲（M. arenaria）和象耳豆根結(jié)線蟲（M. enteolobii）。其中，象耳豆根結(jié)線蟲近幾年在海南多個市縣的冬季瓜果蔬菜基地廣泛發(fā)生，為害嚴(yán)重，已成為制約黃瓜生產(chǎn)的重要因素之一[3-5]。

根結(jié)線蟲通過侵染寄生作物根系，破壞寄主的正常生理代謝水平，并且攫取寄主細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致作物生長矮小、緩慢、葉色異常，結(jié)果少，產(chǎn)量低，有時造成植株提早死亡。根結(jié)線蟲對作物的危害程度取決于線蟲種類和寄主，同時與土壤中線蟲的初始數(shù)量和外部環(huán)境密切相關(guān)[6]。當(dāng)土壤中根結(jié)線蟲的初始密度大于經(jīng)濟(jì)閾值時，將會導(dǎo)致作物產(chǎn)量損失。國內(nèi)外關(guān)于根結(jié)線蟲初始數(shù)量對作物的生長影響已開展了一系列研究。Vovlas等[7]的研究結(jié)果表明，爪哇根結(jié)線蟲抑制馬鈴薯株高和株重的最低接種量為卵或幼蟲0.64 個/cm3（土）。Di Vito等[8-10]先后研究了南方根結(jié)線蟲不同種群密度對多種作物的生長影響，得出菠菜（Spinacia oleracea）耐受限度為土壤中卵或幼蟲0.5 個/cm3，而菜薊（Cynara scolymus）的耐受限度為卵或幼蟲1.1個/cm3。耿亞玲等[11]確定了番茄對南方根結(jié)線蟲的最低忍耐值為4.4頭/cm3。郭衍銀等[12]研究了南方根結(jié)線蟲不同初始密度對生姜（Zingiber officinale）生長的影響。結(jié)果表明，每百克干土中含50個卵，就可使生姜減產(chǎn)27.91%。了解根結(jié)線蟲影響寄主作物生長的最低初始密度對于確定防治的經(jīng)濟(jì)閾值，以及提出針對性的防治策略具有重要的意義。endprint

黃瓜是對根結(jié)線蟲高度敏感的寄主作物，國內(nèi)尚無抗線蟲的黃瓜品種，生產(chǎn)上主要以化學(xué)藥劑防治為主，用藥量大、經(jīng)濟(jì)成本高且易污染環(huán)境。目前國內(nèi)外還未有關(guān)于象耳豆根結(jié)線蟲初始密度對黃瓜生長影響的相關(guān)研究報道。本研究在溫室條件下測定了象耳豆根結(jié)線蟲不同接種密度對黃瓜生長的影響，以期為提出象耳豆根結(jié)線蟲防治指標(biāo)和制定相應(yīng)的防治策略提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試蟲源

供試象耳豆根結(jié)線蟲源于海南省澄邁縣永發(fā)鎮(zhèn)黃瓜病株，經(jīng)室內(nèi)單卵囊接種番茄（cv. 特級大明星）進(jìn)行種群的擴(kuò)繁[5]。選取接種70 d后的番茄病根，參照Ding等[13]描述的方法收集線蟲卵塊，并于28℃下孵化象耳豆根結(jié)線蟲二齡幼蟲（J2）。將孵化的J2置于水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)中，3 000 r/min離心5 min沉淀線蟲，滅菌水中清洗3次后，配備不同濃度梯度的線蟲懸浮液用于后續(xù)試驗。

1.1.2 供試黃瓜

供試黃瓜品種‘農(nóng)家樂黃瓜（山東益民種子有限公司），為海南當(dāng)?shù)貜V泛種植的品種。種子在清水中浸泡6 h后，用紗布包好并置于30℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行催芽。發(fā)芽后，將種子種植于含有約500 cm3土壤的塑料花盆中（規(guī)格：頂部直徑×底部直徑×高=12 cm×6 cm×10 cm），每盆1株，溫室內(nèi)（25 ℃）培養(yǎng)生長。種植土壤為椰糠土（購于?？诿捞m源源園藝公司），滅菌后使用。

1.2 方法

1.2.1 試驗設(shè)計

黃瓜出苗后長至4～5片真葉時進(jìn)行象耳豆根結(jié)線蟲J2接種試驗。試驗共設(shè)置9個密度梯度處理，土壤中J2接種量分別為0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8和16條/cm3。分別計算土壤總體積500 cm3所需的總二齡幼蟲數(shù)，配置線蟲懸浮液，用接種針將J2注入黃瓜根系附近。每個密度處理種植20株。接種后的黃瓜置于控溫（25～28℃）日光溫室中生長，光照條件為14 h光照，10 h黑暗。

1.2.2 調(diào)查統(tǒng)計

分別在接種線蟲后第35、70 d對黃瓜的生長情況和根結(jié)線蟲侵染形成根結(jié)情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計。其中，接種35 d每個處理分別隨機(jī)調(diào)查6株，而接種70 d后每個處理隨機(jī)調(diào)查數(shù)為10株。記錄黃瓜株高和地上部分鮮重，觀察、拍照并統(tǒng)計根結(jié)數(shù)。參照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“黃瓜抗南方根結(jié)線蟲病鑒定技術(shù)規(guī)程”進(jìn)行分級并計算病情指數(shù)[14]。采用DPS軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較（P≤0.5）。

接種象耳豆根結(jié)線蟲二齡幼蟲35 d后，除空白對照外，其余處理的黃瓜根部都會產(chǎn)生根結(jié)。隨著接種密度的加大，根結(jié)指數(shù)迅速提高（表1）。當(dāng)J2初始群體密度為1條/cm3時，黃瓜根部已有較多根結(jié)形成，病情指數(shù)將近50%；而當(dāng)J2初始群體密度為16條/cm3時，病情指數(shù)達(dá)到100%（表1）。在株高方面，當(dāng)J2接種密度在0～1條/cm3時，各處理對應(yīng)的平均株高無顯著差異；而當(dāng)J2接種密度為2條/cm3時，黃瓜的株高開始顯著降低；J2接種密度為16條/cm3時，平均株高達(dá)到最低值，為55.2 cm，僅為對照處理的64%（表1）。在苗鮮重方面，當(dāng)接種密度達(dá)到0.25條/cm3時，苗鮮重開始顯著降低，為對照處理的91.6%；而接種密度在0.25～2條/cm3時，則各處理間無顯著差異（表1）。

接種象耳豆根結(jié)線蟲二齡幼蟲70 d后，接種處理4條/cm3的黃瓜地上部葉片開始明顯黃化，接種密度8頭/cm3處理的黃瓜有部分萎蔫死亡，而處理16條/cm3的黃瓜全部死亡，且部分植株已干枯。相比接種30 d的黃瓜根系，各接種線蟲處理的根結(jié)數(shù)量明顯增多，根結(jié)體積變大，并且可見卵囊。當(dāng)初始群體密度≥2頭/cm3時，病情指數(shù)均達(dá)到100%（表1）。J2接種密度處理8頭/cm3的黃瓜部分根系已經(jīng)腐爛，根系變粗變短（圖1）。在株高方面，當(dāng)J2接種密度為0.25頭/cm3時，已開始與對照差異明顯；其中處理0.25、2、4、8條/cm3的株高分別為124.5、99.8、86.9和66.2 cm（表1），分別為對照處理（133.2 cm）的93.5%、74.9%、65.2%和49.7%。在苗鮮重方面，當(dāng)J2接種密度≥0.25頭/cm3時，與對照差異明顯；其中，處理0.25、2、8、16頭/cm3的苗鮮重分別為24.3、16.8、8.5和4.5 g（表1），分別為對照處理（27.0 g）的90.0%、62.2%、31.5%和16.7%。

3 討論

本研究采用國內(nèi)常規(guī)黃瓜品種進(jìn)行不同密度的室內(nèi)接種實驗，獲得了象耳豆根結(jié)線蟲不同初始密度在不同生長期對黃瓜生長指標(biāo)的影響，結(jié)果表明：當(dāng)土壤中象耳豆根結(jié)線蟲J2的接種密度為0.25條/cm3，即可對黃瓜的株高和植株鮮重產(chǎn)生顯著危害，密度為8條/cm3處理則可導(dǎo)致黃瓜植株根系腐爛。該研究結(jié)果為確定象耳豆根結(jié)線蟲的防治指標(biāo)提供了初步參考。在野外田間條件下，土壤中根結(jié)線蟲的密度與作物生長關(guān)系受到土壤質(zhì)地、溫度、濕度以及外部環(huán)境氣候等多方面的影響，難以準(zhǔn)確測定線蟲初始接種密度與損失之間的關(guān)系。實際上，國內(nèi)外研究學(xué)者通常在可控的環(huán)境下進(jìn)行評估測試，并且也多以植物的生長情況代替真實產(chǎn)量。例如Charegani等[15]室內(nèi)測試得出，爪哇根結(jié)線蟲影響黃瓜株高和苗鮮重的初始數(shù)量分別為2個卵或幼蟲/g（土）和4個卵或幼蟲/g（土）。黃娟華等[16]研究表明，溫室條件下每100 cm3土中有10條象耳豆根結(jié)線蟲M. enteolobii二齡幼蟲就可顯著抑制番茄的苗鮮重和株高。Azam等[17]通過室內(nèi)盆栽試驗發(fā)現(xiàn)，南方根結(jié)線蟲對番茄生長造成顯著影響的最低J2接種密度為500條/盆。盡管根結(jié)線蟲對植株高度、鮮重等生長指標(biāo)的影響并不能夠完全反映產(chǎn)量的損失，但對于認(rèn)識線蟲初始密度與作物受損程度之間的關(guān)系非常重要，可以為制定相應(yīng)的防治指標(biāo)提供理論依據(jù)。值得注意的是，自然環(huán)境中線蟲分布并不均勻，且土壤溫度和質(zhì)地差異較大，在指導(dǎo)田間生產(chǎn)時，還需結(jié)合田間實際情況綜合考慮進(jìn)一步開展相關(guān)的田間試驗研究。endprint

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