陳 容，鄭玉娟，張黨權(quán)，陳麗莉，龔建平，周文化，何含杰，覃杰明

（1.中南林業(yè)科技大學(xué) a.經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.林業(yè)生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.經(jīng)濟(jì)林培育與利用湖南省2011協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長(zhǎng)沙 410004；2 .湖南澧縣樹大園林有限公司，湖南 澧縣 415513）

紅檵木高效再生體系的建立

陳 容1a,b,c，鄭玉娟1b，張黨權(quán)1a,b,c，陳麗莉1b，龔建平2，周文化1b，何含杰1b，覃杰明1b

（1.中南林業(yè)科技大學(xué) a.經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.林業(yè)生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.經(jīng)濟(jì)林培育與利用湖南省2011協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長(zhǎng)沙 410004；2 .湖南澧縣樹大園林有限公司，湖南 澧縣 415513）

紅檵木是極具觀賞價(jià)值的常綠灌木。以紅檵木的葉片和莖段為材料，通過(guò)優(yōu)化愈傷組織誘導(dǎo)與增殖，不定芽誘導(dǎo)、增殖與生根的培養(yǎng)基與激素配比，進(jìn)行紅檵木高效再生體系研究。結(jié)果表明，紅檵木外植體最佳消毒方案為兩次升汞消毒法：0.1% HgCl2兩次消毒，各3 min；最佳愈傷組織誘導(dǎo)與增殖的培養(yǎng)基配方分別為：MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 1.7 mg/L、MS + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.06 mg/L；首次使用AgNO3，獲得最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：MS + 6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.01 mg/L + AgNO31 mg/L；不定芽增殖最佳培養(yǎng)基配方為：MS + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.05 mg/L + Vc 5.0 mg/L；最佳不定芽生根方案為：選擇2.1～3.0 cm的不定芽，保留2～4葉片，接種至1/2 MS + IBA 4.5 mg/L培養(yǎng)基。從而建立了效果穩(wěn)定的完整紅檵木高效再生體系，為紅檵木工廠化育苗及轉(zhuǎn)基因體系建立奠定基礎(chǔ)。

紅檵木；再生體系；不定芽誘導(dǎo)；硝酸銀

紅檵木又稱紅花檵木Loropetalum chinensevar.rubrum，金縷梅科檵木屬植物，為常綠灌木。紅檵木花紅葉片紅，色彩絢麗，一年3～4次花期，生態(tài)適應(yīng)性強(qiáng)，耐修剪，易造型，廣泛用于色籬、模紋花壇、灌木球、彩葉片小喬木、樁景造型、盆景等城市綠化美化。紅檵木為白檵木L. chinense的變種，是在特定自然條件下由野生檵木突變而來(lái)，其突變途徑是個(gè)復(fù)雜的過(guò)程[1]，其機(jī)理至今仍未探明。自然界中植物的天然突變率極低，紅檵木作為世界罕見的植物突變資源，被稱為我國(guó)特有的“植物中的熊貓”[2]。目前，檵木屬中的白檵木、大果檵木、大花檵木3個(gè)品種和紅花檵木變種產(chǎn)于我國(guó)，主要分布于湘贛交界處的羅霄山脈[3-4]。我國(guó)紅檵木中心產(chǎn)區(qū)在湖南，已有70多年栽培歷史，面積達(dá)3 000 hm2[5]。

目前，紅檵木的苗木培育以無(wú)性繁殖為主，主要有壓條、扦插、嫁接和組織培養(yǎng)等方式，其中扦插方式應(yīng)用比較廣泛。然而，由于扦插存在繁殖系數(shù)低、受季節(jié)限制等不利因素，研究者開始通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)紅檵木的工廠化育苗批量生產(chǎn)。1982年宋佩倫等[6]首次進(jìn)行了紅檵木的組織培養(yǎng)，采取莖尖和當(dāng)年生葉片為外植體，探索通過(guò)誘導(dǎo)愈傷組織分化途徑形成試管苗；2001年彭海信等[7]以紅檵木腋芽為外植體進(jìn)行了快繁研究；2005年林紫玉等[8]以紅檵木莖尖、腋芽等作為外植體進(jìn)行試管苗誘導(dǎo)研究。

近年來(lái)，越來(lái)越多的研究開始了對(duì)紅檵木組織培養(yǎng)體系的更進(jìn)一步探索，特別是對(duì)紅檵木不同外植體的消毒方案、不同激素及其濃度對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的影響、光照對(duì)愈傷組織的增殖影響、不同激素及其配比對(duì)愈傷組織分化的影響、以及紅檵木叢生芽的誘導(dǎo)等方面都做了一定研究[9-15]。然而，紅檵木愈傷組織分化出芽困難等關(guān)鍵問(wèn)題仍未得到有效的解決，導(dǎo)致目前還沒(méi)有切實(shí)可行的紅檵木完整再生體系?；诖耍狙芯恳约t檵木的葉片和莖段為材料，通過(guò)優(yōu)化愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)與增殖、不定芽生根的最佳培養(yǎng)基與激素配比，建立完整的紅檵木高效再生體系，為紅檵木工廠化育苗及轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)建立提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 外植體采取與表面消毒

（1）外植體采取與預(yù)處理

于晴天早晨采取紅檵木向陽(yáng)嫩枝枝頂端含4～6個(gè)腋芽的短枝條，長(zhǎng)度約10～15 cm。去除該枝條上兩年生的老葉片和當(dāng)年生的幼嫩葉片，保留當(dāng)年生的成熟葉片，然后將該外植體用洗衣粉水浸泡5 min，并用軟絨毛刷去除葉片和莖段表面的臟物，再用流水沖洗1 h左右，最后用去離子水漂洗，備用。

（2）外植體表面消毒

將經(jīng)預(yù)處理的紅檵木外植體于超凈工作臺(tái)中進(jìn)行表面消毒。由于紅檵木葉片及木質(zhì)化程度較低的莖段表面與側(cè)芽有較多絨毛，容易攜帶大量微生物，不利于表面消毒。因而在表面消毒方案中，關(guān)鍵是優(yōu)化升汞的濃度與消毒時(shí)間。經(jīng)過(guò)前期預(yù)試驗(yàn)，設(shè)計(jì)了兩次升汞法表面消毒方案：首先用75%的酒精處理外植體45 s，去離子水清洗兩遍（每次4 min）；然后分別加入適量的0.1%和0.2%升汞進(jìn)行兩次消毒（表2，共8組處理），每次消毒后都用去離子水充分漂洗兩次（每次5 min）。表面消毒后，將外植體用0.1 M氯化鈣溶液浸泡一分鐘，用去離子水漂洗一遍，備用。

1.2 愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)

以MS為基本培養(yǎng)基，將植物激素6-BA和NAA設(shè)計(jì)6個(gè)組合（表3），對(duì)紅檵木外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)。將經(jīng)過(guò)表面消毒的紅檵木葉片和莖段取出，于含濾紙的培養(yǎng)皿中吸干表面水分，用解剖刀在葉片表面橫切一次，然后將葉片正面朝下平鋪于培養(yǎng)基表面；同時(shí)，將枝條斜切成1.5～2 cm的莖段（含一個(gè)腋芽），斜插入培養(yǎng)基中，最后將接種有外植體的組培瓶于光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為（25± 1）℃，光照強(qiáng)度為2 000 lx，光照時(shí)間為12 h/d，并定期觀察生長(zhǎng)情況。

1.3 愈傷組織的增殖培養(yǎng)

本研究以MS為基本培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)了6個(gè)植物激素6-BA和IBA的組合處理（表1），對(duì)紅檵木愈傷組織進(jìn)行增殖培養(yǎng)。待新愈傷組織生長(zhǎng)至一定程度后，切下生長(zhǎng)狀況良好的部位繼續(xù)轉(zhuǎn)至新的增殖培養(yǎng)基中，每3周繼代轉(zhuǎn)瓶一次，每次轉(zhuǎn)瓶時(shí)需將褐化部位切掉。愈傷組織在繼代培養(yǎng)3～4次后，可用于后續(xù)的不定芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)。

表1 紅檵木愈傷組織增殖培養(yǎng)的激素組合Table 1 Hormone combination for callus multiplication of L. chinense var. rubrum

1.4 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

以MS為基本培養(yǎng)基，對(duì)6-BA、NAA和AgNO3設(shè)計(jì)30個(gè)組合處理（表4），對(duì)紅檵木愈傷組織進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。從增殖培養(yǎng)瓶中選取暗紅色或略帶綠色的致密度適宜的紅檵木愈傷組織，切成0.5 mm左右的小塊，放入不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)。不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為：溫度（25±1）℃，光照強(qiáng)度2 000 lx，光照時(shí)間12 h/d。

1.5 不定芽增殖培養(yǎng)

將分化的紅檵木不定芽從愈傷組織上切下，轉(zhuǎn)至MS + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.05 mg/L + Vc 5.0 mg/L的增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行不定芽的增殖和壯苗培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：溫度（25± 1） ℃，光照度2 000 lx，光照時(shí)間12 h/d。

1.6 不定芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

分別以1/2MS和3/4MS為基本培養(yǎng)基，設(shè)置3個(gè)IBA濃度，共6個(gè)組合處理（表5），對(duì)紅檵木不定芽進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。將壯苗培養(yǎng)后的紅檵木不定芽轉(zhuǎn)至生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并記錄各組植株的株高和葉片數(shù)，暗培養(yǎng)3 d，然后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)室，培養(yǎng)條件為：溫度（25±1）℃，光照度2 000 lx，光照時(shí)間12 h/d。接種一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)各組處理的生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅檵木外植體的高效表面消毒

外植體在接種培養(yǎng)了15 d后，分別對(duì)不同消毒實(shí)驗(yàn)處理的葉片與莖段進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)不同處理的微生物污染率、褐化率及存活率（表2）。結(jié)果表明，在兩次升汞法表面消毒方案中，以兩次0.1% HgCl2、消毒時(shí)間均為3 min的效果最佳，外植體的微生物污染率和褐化率都為最低，過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短的消毒時(shí)間都難以實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)微生物污染率和褐化率的有效控制。因此，紅檵木外植體的高效表面消毒方案為：采用當(dāng)年生的幼嫩莖段或成熟葉片，75%的酒精漂洗外植體45 s，二次0.1% HgCl2消毒 3 min。

聲納圖像在映射過(guò)程中損失了高度信息,光學(xué)圖像中采用多視圖幾何原理,利用不同映射角度的圖像視差關(guān)系計(jì)算目標(biāo)的深度信息以恢復(fù)三維特征。但由于光學(xué)攝像機(jī)與聲納設(shè)備映射原理的差異,所以一般的基于光學(xué)的三維重建方法不能直接運(yùn)用到聲納圖像的三維重建過(guò)程中。根據(jù)多視角聲納圖像的映射特點(diǎn),本節(jié)提出一種對(duì)高度弧分段、逐級(jí)搜尋目標(biāo)的空間位置的多視角聲納圖像三維特征重建方法,用于恢復(fù)圖像的高度特征。

2.2 紅檵木愈傷組織的高效誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)

將紅檵木外植體接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基（圖1-A），5 d后就開始長(zhǎng)出愈傷組織，30 d后生長(zhǎng)明顯（圖1-B）。對(duì)生長(zhǎng)30 d的莖段和葉片愈傷組織誘導(dǎo)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（表3）。分析結(jié)果表明，NAA對(duì)紅檵木愈傷組織的誘導(dǎo)有顯著的作用，而6-BA的作用效果相對(duì)較弱。因此，紅檵木愈傷組織誘導(dǎo)的最佳激素組合為A5，培養(yǎng)基配方為：MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 1.7 mg/L。

獲得質(zhì)量較好的紅檵木愈傷組織后，使用不同濃度配比的6-BA、IBA進(jìn)行增殖培養(yǎng)（圖1-C）。分析結(jié)果表明，當(dāng)IBA濃度達(dá)到1 mg/L以上時(shí)，會(huì)使愈傷組織快速增殖結(jié)構(gòu)松散；當(dāng)IBA濃度低于0.04 mg/L時(shí)，增殖速度較慢；當(dāng)IBA濃度為0.06 mg/L時(shí)可以得到質(zhì)量最佳的愈傷組織，顏色表現(xiàn)為暗紅色。因此，紅檵木愈傷組織增殖的最佳激素組合為B4，培養(yǎng)基配方為：MS +6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.06 mg/L。

表2 紅檵木外植體表面消毒結(jié)果統(tǒng)計(jì)情況Table 2 Statistics of explant surface disinfection of L. chinense var. rubrum

表3 紅檵木愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的激素組合及相應(yīng)的誘導(dǎo)率Table 3 Hormone combination for callus induction and induction rate of L. chinense var. rubrum

2.3 紅檵木不定芽的高效誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)

在接種至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基一周后，紅檵木愈傷組織開始分化，生長(zhǎng)至4周后已有較多葉片（圖1-D、E）。統(tǒng)計(jì)不同激素配比下愈傷組織的分化情況（表4）。為解決紅檵木愈傷組織不定芽誘導(dǎo)的難題，首次嘗試在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加AgNO3，結(jié)果表明，加入AgNO3能顯著刺激愈傷組織分化出不定芽，不同AgNO3濃度與不同的激素組合表現(xiàn)出差異性的分化效率。整體而言，1 mg/L的AgNO3在不同激素濃度組合中均能取得較好的不定芽誘導(dǎo)效果；C12處理組雖然是不定芽誘導(dǎo)率最高的組合，但是AgNO3濃度過(guò)高（3 mg/L），對(duì)愈傷組織與不定芽本身也會(huì)產(chǎn)生一定的毒害作用，長(zhǎng)期培養(yǎng)不利于生長(zhǎng)。因此，紅檵木愈傷組織的不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基配方為：MS + 6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.01 mg/L+ AgNO31 mg/L。

參考李琦[16]在叢生芽誘導(dǎo)中的配方，設(shè)計(jì)了紅檵木不定芽增殖方案，獲得了最佳培養(yǎng)基配方：MS + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.05 mg/L + Vc 5.0 mg/L，結(jié)果表明，該配方對(duì)紅檵木不定芽的增殖有很好的效果，接種一個(gè)月后不定芽得到穩(wěn)定增殖（圖1-F），其生長(zhǎng)情況也很適合下一步的生根誘導(dǎo)。

2.4 紅檵木不定芽的高效生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

紅檵木不定芽在接種培養(yǎng)第7 d后開始逐漸生根，同時(shí)培養(yǎng)基底部還會(huì)長(zhǎng)出枚紅色的愈傷組織，并且伴有植株長(zhǎng)高及少量側(cè)枝生長(zhǎng)的現(xiàn)象（圖1-G、H、I、J）。培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽的生根情況（表5），并得到葉片數(shù)和株高對(duì)不定芽生根的作用關(guān)系（表6、表7）。

表4 紅檵木愈傷組織不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的激素組合及分化情況Table 4 Hormone combination on adventitious bud induction and differentiation of L. chinense var. rubrum

圖1 紅檵木高效再生體系建立Fig. 1 Establishment of high-eff i cient regeneration system of L. chinense var. rubrum

表5 紅檵木不定芽生根誘導(dǎo)的培養(yǎng)基與激素及相應(yīng)的生根率Table 5 Medium and hormone for adventitious bud rooting induction and corresponding rooting rate of L.chinense var. rubrum

由表5可知，MS培養(yǎng)基中添加3.5 mg/L～4.5 mg/L IBA的情況下，紅檵木不定芽都能有效生根，但生根率相差不大，其中1/2 MS的生根率略高于3/4 MS的生根率。

表6 紅檵木不定芽株高對(duì)生根的影響Table 6 Influences of plant height on adventitious bud rooting of L. chinense var. rubrum

由表6可知，高濃度的IBA更容易促進(jìn)相對(duì)株高較長(zhǎng)的紅檵木不定芽生根，其中IBA為4 mg/L時(shí)，2.1～3.0 cm的植株高度占到46.84%；另外，當(dāng)紅檵木不定芽高度低于1 cm或者高于4 cm時(shí)，都不容易生根。

綜合不定芽生根率與植株高度以及植株保留葉片對(duì)生根的影響3個(gè)因素，得到紅檵木不定芽誘導(dǎo)生根的最佳方案：選擇2.1～3.0 cm高度的植株，保留2～4片葉，接種至1/2 MS + IBA 4.5 mg/L的培養(yǎng)基。

3 結(jié)論與討論

（1）影響愈傷組織不定芽誘導(dǎo)的因素。

表7 紅檵木生根不定芽中葉片數(shù)與植株高度的關(guān)系Table 7 Relationship of leaf number and plant height in rooted adventitious buds of L. chinense var.rubrum

在紅檵木再生體系建立過(guò)程當(dāng)中，愈傷組織的高效與穩(wěn)定分化一直是關(guān)鍵難題。本研究從內(nèi)在因素和外在因素兩個(gè)方面出發(fā)，探討影響紅檵木愈傷組織不定芽分化的因素。內(nèi)在因素主要包括外植體的來(lái)源、生長(zhǎng)環(huán)境、發(fā)育狀態(tài)等，外在因素主要包括激素的選擇與配比、培養(yǎng)基的選擇、胚性愈傷組織的挑選。

在生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選取過(guò)程中，本研究選擇的是最常見的生長(zhǎng)素NAA和細(xì)胞分裂素6-BA。NAA有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大的作用，高濃度NAA可促進(jìn)愈傷組織形成不定根，而低濃度NAA能促進(jìn)愈傷組織形成不定芽。因此，本研究選取的NAA濃度嚴(yán)格控制在0.01 mg/L～0.09 mg/L之間。6-BA有促進(jìn)細(xì)胞分裂以及非分化組織分化的作用，與其他激素的組合能促進(jìn)粗皮檸檬、匐枝栓果菊、越南槐[17-19]等植物的愈傷組織大量分化出芽，特別是與NAA組合在提高胚性愈傷組織和促進(jìn)離體組織的再生能力方面有著重要作用[20]。AgNO3在促進(jìn)器官發(fā)生、體細(xì)胞胚胎發(fā)生、以及抑制乙烯活性方面有顯著的特殊功效[21-23]，有實(shí)驗(yàn)研究表明，高濃度AgNO3抑制小麥花藥愈傷組織分化，而低濃度則促進(jìn)分化[24-25]。為解決紅檵木愈傷組織分化難與分化不穩(wěn)定的問(wèn)題，本論文首次嘗試在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入適量的硝酸銀，顯著提高了紅檵木愈傷組織的不定芽分化率，分化效果也非常穩(wěn)定。

（2）影響不定芽增殖的因素。

愈傷組織分化的不定芽是長(zhǎng)時(shí)間在各種內(nèi)源激素和外源激素共同作用下的結(jié)果。6-BA能有效促進(jìn)不定芽的增殖，但還能促進(jìn)酚類化合物的合成與刺激多酚氧化酶的活性，從而導(dǎo)致愈傷組織易發(fā)生褐變死亡。因此，在培養(yǎng)基中加入適量Vc類抗氧化劑[26]，能有效解決在紅檵木不定芽增殖過(guò)程中引起的愈傷組織褐變問(wèn)題。另外，紅檵木愈傷組織在含AgNO3的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，積累的AgNO3就越多，不利于后期的不定芽增殖培養(yǎng)。因而，當(dāng)紅檵木愈傷組織分化出的不定芽生長(zhǎng)至一定高度后，需及時(shí)轉(zhuǎn)瓶至增殖培養(yǎng)基中。

（3）影響不定芽生根的因素。

除外源激素配比、培養(yǎng)基類型外，本研究還探索了不定芽株高、不定芽葉片數(shù)對(duì)紅檵木不定芽生根的影響。由本研究的研究結(jié)果可知，不定芽植株太矮時(shí)，一般都難以生根，外源激素對(duì)其作用不大。但是接種的不定芽高度超過(guò)4 cm時(shí)，植株木質(zhì)化程度較高，也較難生根。因此，選擇適宜高度的紅檵木不定芽能有效提高生根率。另外，在接種時(shí)，選擇適宜數(shù)量葉片的不定芽，也能起到促進(jìn)不定芽生根的效果。就外源激素而言，IBA對(duì)不定芽的生根有重要的影響[27-30]。本研究顯示，在紅檵木不定芽的生根培養(yǎng)中，高濃度IBA（3.5 mg/L）的生根效果較為理想。

（4）紅檵木高效再生體系與轉(zhuǎn)基因研究。

紅檵木為極其珍貴的天然植物突變體，但其突變機(jī)理仍未探明。目前，課題組通過(guò)轉(zhuǎn)錄組研究獲得一些紅檵木中特異表達(dá)新基因，對(duì)其進(jìn)行功能研究時(shí)，需通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)現(xiàn)這些基因在紅檵木體內(nèi)的過(guò)量表達(dá)與下調(diào)表達(dá)。然而，高效再生體系的缺失導(dǎo)致紅檵木轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)難以建立，制約了紅檵木特異新基因的功能研究。因此，本研究建立了效果穩(wěn)定的紅檵木高效再生體系，為后續(xù)的轉(zhuǎn)基因研究奠定了基礎(chǔ)。

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Establishment of high-eff i cient regeneration system ofLoropetalum chinensevar.rubrum

CHEN Rong1a,b,c, ZHENG Yu-juan1b, ZHANG Dang-quan1a,b,c, CHEN Li-li1b, GONG Jian-ping2,ZHOU Wen-hua1b, HE Han-jie1b, QIN Jie-ming1b
(1. Central South University of Forestry and Technology;1a) Key Lab. of Cultivation and Protection for Non-Wood Forest Trees,Ministry of Education; 1b) Hunan Provincial Key Lab. of Forestry Biotechnology; 1c) Cooperative Innovation Center of Cultivation and Utilization for Non-Wood Forest Trees of Hunan Province, Changsha 410004, Hunan, China; 2, Hunan Lixian Shuda Garden Co. Ltd.,Lixian 415513, Hunan, China)

Loropetalum chinensevar.rubrumis a kind of evergreen shrub which has great ornamental value. Using stems and leaves as explant, the high-efficient regeneration system ofL. chinensevar.rubrumwas researched by optimizing the medium type and hormone combination in induction and multiplication of callus, induction and rooting of adventitious buds. The results show that the optimal sterilizing conditions was: disinfected twice with 0.1% HgCl2sterilization each lasted 3 minutes; the optimal mediums for callus induction and multiplication were: MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA1.7 mg/L and MS + 6-BA 1.0 mg/L+ IBA 0.06～0.08 mg/L,respectively; By introducing AgNO3fi rstly, the optimal medium for adventitious bud induction was conf i rmed as: MS + 6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L + AgNO31 mg/L; the optimal medium of adventitious bud multiplication was: MS + 6-BA 1.0 mg/L + IBA 0.05 mg/L+ Vc 5.0 mg/L. The optimal program for rooting of adventitious bud is as follows steps: choosing 2.1～3.0 cm tall buds with 2～4 leaves and inoculating to the medium 1/2 MS + IBA 4.5 mg/L. Thereby, the high-eff i cient regeneration system ofL. chinensevar.rubrumwas established, and this system provide a basis for establishing the transgenic system and implementing industrialized breeding and seedling.

Loropetalum chinensevar.rubrum; regenetation system; adventitious bud induction; silver nitrate

S722.3+7

A

1673-923X(2015)04-0040-06

10.14067/j.cnki.1673-923x.2015.04.007

2014-08-06

國(guó)家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201204610）；湖南省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2014FJ2004）

陳 容，碩士研究生 通訊作者：張黨權(quán)，教授，博導(dǎo)；E-mail：zhangdangquan@163.com

陳 容, 鄭玉娟, 張黨權(quán),等. 紅檵木高效再生體系的建立[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2015,35(4):40-45.

[本文編校：文鳳鳴]