黃守耀，焦春偉，梁慧嘉，楊詠善，陳家明，張命龍，洪雅琪，謝意珍，2*(.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州50070;2.廣東省微生物研究所，廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，省部共建華南應(yīng)用微生物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州50070)

衰老是生命運(yùn)動(dòng)的自然過程，是機(jī)體在發(fā)育成熟后，體內(nèi)各種功能活動(dòng)進(jìn)行性下降的過程，存在于任何生命體的任何時(shí)期，只是不同情況下其速率與程度有所區(qū)別。目前關(guān)于其發(fā)生機(jī)制說法不一，主要有中醫(yī)延年學(xué)說［1］、氧自由基學(xué)說［2］、遺傳程序?qū)W說［3－6］等。靈芝是一種珍貴的食藥用真菌，具有明顯抗衰老、抗氧化作用［7］，能消除自由基［8］、抑腫瘤、抗輻射，維持機(jī)體免疫調(diào)節(jié)平衡，提高機(jī)體抗病能力。筆者利用靈芝水提物制作成靈芝抗衰老面膜，進(jìn)行臨床試驗(yàn)，通過檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，研究其抗面部皮膚衰老的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 靈芝抗衰老面膜，由靈芝水提物制作，供試靈芝抗衰面膜由廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司提供。

1.2 方法 靈芝抗衰面膜臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)由抗皮膚衰老功效臨床試驗(yàn)委托國家衛(wèi)生部認(rèn)定具有“化妝品人體安全性與功效檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)”資質(zhì)的中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院皮膚科完成。采用隨機(jī)、雙盲的臨床功效研究方法。

1.2.1 試驗(yàn)對(duì)象。年齡在30～60歲的健康中國女性，皮膚類型為II～I(xiàn)V型皮膚［9］，在廣州生活居住一年以上，能很好配合試驗(yàn)，在研究期間能保持生活的規(guī)律性并能避免日光紫外線照射者，顏面部具有皮膚較粗糙或細(xì)紋較多者，能夠閱讀和理解知情同意書的所有內(nèi)容，并自愿簽署知情同意書者。試驗(yàn)期間不使用任何對(duì)結(jié)果有影響的化妝品、藥物和保健品。

凡具有下列任一條件的患者必須排除進(jìn)入該項(xiàng)研究，面部合并有嚴(yán)重細(xì)菌、病毒或真菌感染者，有高度過敏體質(zhì)者，有嚴(yán)重心、肝、腎功能損害及嚴(yán)重免疫功能低下者，有精神疾病及嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病者或妊娠以及口服避孕藥者，面部有糖皮質(zhì)激素皮炎者，面部有濕疹或嚴(yán)重脂溢性皮炎、痤瘡的患者，30 d內(nèi)參加藥物臨床試驗(yàn)或其他試驗(yàn)者，或1周內(nèi)系統(tǒng)使用對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響藥物者，2周內(nèi)有口服和外用可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響的美容產(chǎn)品者，不能配合試驗(yàn)者，研究者認(rèn)為不適于參加該研究者。受試者如在研究期間有妊娠、并發(fā)癥、嚴(yán)重不良事件或違反研究方案等原因，應(yīng)退出臨床研究，同時(shí)寫明退出原因。

1.2.2 使用方法。潔膚后，取出面膜，撕下珠光膜或藍(lán)色膜，貼于面部，再撕下藍(lán)色膜或珠光膜，約20 min后取下，將面部余留精華輕柔拍打至吸收。晚上睡前使用，效果更佳。每周使用2次，連續(xù)使用12周。

1.2.3 臨床試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)。共觀察12周，隨訪5次，分別為第0天、第7天、第28天、第56天和第84天，由專業(yè)研究者對(duì)每個(gè)受試者在使用前和每次隨訪時(shí)進(jìn)行目測(cè)評(píng)估、儀器測(cè)量以及問卷調(diào)查。每次日測(cè)評(píng)估和儀器測(cè)量保持前后條件一致即由同一個(gè)研究者，充足的光線，在相對(duì)恒定環(huán)境條件，即室溫(23±2℃)和濕度(50±5%)，對(duì)同一個(gè)靶部位進(jìn)行評(píng)估和測(cè)量。每個(gè)受試者每次評(píng)估和測(cè)試前應(yīng)避免劇烈運(yùn)動(dòng)，在上述室內(nèi)穩(wěn)定環(huán)境中休息20 min后進(jìn)行。

1.2.3.1 感官評(píng)價(jià)。評(píng)估指標(biāo)包括面部皮膚干燥度、皮膚彈性、皮膚光澤度、皮膚細(xì)小皺紋以及皮膚光滑度。每個(gè)指標(biāo)依據(jù)其程度按0分(很好)～9分(很差)來進(jìn)行評(píng)估，通過使用產(chǎn)品前后各指標(biāo)的改變程度(評(píng)分差值)來判斷其改善程度，改善程度評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)分別為－l=輕度變差、－2=中度變差、－3=明顯變差、0=無改善、1=輕度改善、2=中度改善、3=明顯改善、4=完全改善。

1.2.3.2 安全性評(píng)估。所有在使用產(chǎn)品期間發(fā)生的皮膚不良反應(yīng)如皮膚紅、刺痛、瘙癢、灼熱等均應(yīng)記錄，對(duì)嚴(yán)重不良反應(yīng)要及時(shí)報(bào)告。皮膚不良反應(yīng)分級(jí)按照衛(wèi)生部頒發(fā)的2007年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定的人體試用試驗(yàn)皮膚不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)來判斷。

1.2.3.3 皮膚含水量的測(cè)定。使用德國 COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產(chǎn)的皮膚水份測(cè)量?jī)x(Corneometer@CM825)，每次隨訪時(shí)對(duì)受試者靶部位皮膚進(jìn)行皮膚含水量測(cè)定，共測(cè)量3次，取其平均值;通過比較樣品使用前后及試驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚含水量的變化來評(píng)估該樣品的保濕功效。

1.2.3.4 皮膚彈性指標(biāo)的測(cè)定。使用德國 COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產(chǎn)的皮膚彈性測(cè)量?jī)x(Cutometer@MPA580)對(duì)受試者靶部位皮膚進(jìn)行皮膚彈性指標(biāo)R2和R5的測(cè)定，共測(cè)量3次，取其平均值;通過比較樣品使用前后及試驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚彈性指標(biāo)的變化來評(píng)估該樣品對(duì)皮膚彈性的改善功效。

1.2.3.5 皮膚紋理深淺指標(biāo)的測(cè)定。先用硅膠在眼角靶部位制成細(xì)小皺紋模型，然后使用德國COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產(chǎn)的皮膚皺紋分析儀(Visioline⑩VL650-Quantiride⑧)對(duì)受試者靶部位細(xì)小皺紋模型進(jìn)行皮膚細(xì)紋深度和長(zhǎng)度指標(biāo)的分析;通過比較產(chǎn)品使用前后及試驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚細(xì)紋深度和長(zhǎng)度的變化來評(píng)估該樣品對(duì)皮膚細(xì)紋的改善功效。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析。使用SPSS20.0專用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素重復(fù)測(cè)量分析方法進(jìn)行檢驗(yàn)，P值＜0.05表明有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 感官評(píng)估結(jié)果

2.1.1 研究者感官評(píng)估。研究者感官評(píng)估結(jié)果(表1)表明，受試者使用樣品后，皮膚干燥度、皮膚彈性、皮膚光澤度以及皮膚光滑度有不同程度的改善，且隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，改善效果增強(qiáng)，各時(shí)間點(diǎn)較使用前有明顯的改善(P值＜0.05);皮膚細(xì)小皺紋方面，隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，雖然有一定程度改善，但較使用前無明顯的改善(P值＞0.05)。從使用樣品不同時(shí)間后各皮膚改善程度的人數(shù)百分比(表2)可看出，隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，各指標(biāo)的改善率逐漸增加，在連續(xù)使用12周時(shí)，皮膚干燥度、彈性、光澤度以及光滑度的總改善率均超過 90%，分別為 91.17%、91.17%、94.12%、91.18%，細(xì)小皺紋的總改善率也達(dá)11.76%。

表1 研究者評(píng)估各指標(biāo)的變化

表2 研究者評(píng)估各指標(biāo)總改善率 %

2.1.2 受試者自我感官評(píng)估。由圖1可見，在使用產(chǎn)品后第1周開始，受試者自評(píng)面部各指標(biāo)(皮膚柔軟度、皮膚光滑度、皮膚滋潤(rùn)度和皮膚紋理改善度)總的改善率基本達(dá)50%，隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，各指標(biāo)的總改善率逐漸提高，使用12周后皮膚柔軟度、光滑度、滋潤(rùn)度和紋理改善度分別為91.18%、88.24%、85.28%和 91.17%。受試者使用產(chǎn)品后，自我感覺良好。

2.2 安全性評(píng)估 34名受試者中，第15號(hào)和29號(hào)受試者試驗(yàn)側(cè)使用試驗(yàn)產(chǎn)品10～20 min后，出現(xiàn)輕微的紅斑或瘙癢，持續(xù)約數(shù)分鐘至半小時(shí)不等，無特殊處理癥狀可自行消失，不影響產(chǎn)品的繼續(xù)使用。25號(hào)受試者第一次使用產(chǎn)品20 min后，雙側(cè)使用部位均出現(xiàn)輕微的紅斑，持續(xù)約30 min后自行消失。26號(hào)受試者第一周試驗(yàn)側(cè)每次使用試驗(yàn)樣品約10 min后，出現(xiàn)輕微刺痛，持續(xù)數(shù)分鐘后自行消失;第12周其中一次使用產(chǎn)品后，雙側(cè)使用部位均出現(xiàn)輕微刺痛，持續(xù)約10～20 min后自行消失。其余未見與樣品相關(guān)的局部不良反應(yīng)或嚴(yán)重不良反應(yīng)，產(chǎn)品具有較好的安全性。

2.3 儀器測(cè)量結(jié)果

2.3.1 面部靶部位皮膚含水量測(cè)量結(jié)果。由圖2可見，使用試驗(yàn)樣品后，面部靶部位皮膚含水量隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，均有逐漸升高的趨勢(shì)，各時(shí)間點(diǎn)與產(chǎn)品使用前比較，差異均有顯著性(P值＜0.05)。結(jié)果表明，試驗(yàn)樣品在使用后第一周開始，有提高面部皮膚含水量的功效。

2.3.2 面部靶部位皮膚彈性指標(biāo)測(cè)量的結(jié)果。皮膚彈性指標(biāo)R2是指無負(fù)壓時(shí)皮膚的回彈量與有負(fù)壓時(shí)的最大拉伸量之比，比值越接近1，說明皮膚彈性越好;R5是指在皮膚測(cè)試的第一次循環(huán)中，皮膚恢復(fù)過程的彈性部分與加負(fù)壓過程的彈性部分之比，比值越接近1，說明皮膚彈性越好。由圖3可見，皮膚的彈性值R2隨著使用樣品時(shí)間的延長(zhǎng)，有逐漸升高的趨勢(shì)，在使用后第8周達(dá)到最高峰，但各時(shí)間點(diǎn)與使用前比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值＞0.05)。彈性指標(biāo)R5隨著使用樣品時(shí)間的延長(zhǎng)，各時(shí)間點(diǎn)與樣品使用前相比變化不大(P值＞0.05)。試驗(yàn)樣品在改善皮膚彈性方面，效果不理想。

2.3.3 面部靶部位皮膚細(xì)小皺紋模型分析結(jié)果。通過面部細(xì)小皺紋模型的儀器分析，獲得平均皺紋長(zhǎng)度和深度的變化情況，由圖4可見，隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，受試者皮膚的細(xì)小皺紋平均長(zhǎng)度有逐漸變小的趨勢(shì)，在使用后第12周，與樣品使用前比較有顯著差異(P值＜0.05);皮膚細(xì)小皺紋平均深度也有逐漸變小的趨勢(shì)，除使用樣品后第8周外，其余各時(shí)間點(diǎn)與樣品使用前比較均有顯著差異(P值＜0.05)。試驗(yàn)樣品在減小和淺化皮膚皺紋方面均具有一定的功效。

3 討論

靈芝抗衰老面膜在改善面部皮膚干燥度、光澤度、光滑度、彈性、柔軟度和滋潤(rùn)度等方面有一定的功效，能一定程度地提高面部皮膚含水量，能一定程度地改善面部細(xì)小皺紋的長(zhǎng)度和深度，有較好的安全性。在試驗(yàn)過程中，皮膚彈性指標(biāo)R2、R5值在使用前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值＞0.05)，應(yīng)開發(fā)系列產(chǎn)品并配套使用，同時(shí)增加產(chǎn)品的使用頻率以更好地體現(xiàn)其抗面部衰老功效。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，靈芝含有多種氨基酸及礦物質(zhì)，并含有多種多糖類活性成分，靈芝多糖可促進(jìn)細(xì)胞增殖，減輕角質(zhì)形成細(xì)胞氧化應(yīng)激性損傷，有抗表皮細(xì)胞衰老作用［10］，該研究通過臨床試驗(yàn)證實(shí)靈芝具有抗衰老的功效，為靈芝產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展壯大提供試驗(yàn)依據(jù)。

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